ЗАВИСИМОСТЬ ВЫЖИВАЕМОСТИ БОЛЬНЫХ МЕЛАНОМОЙ КОЖИ ОТ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА КЛЕТОЧНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ Ki67.

Гродненский государственный медицинский университет, Беларусь.

В.С. Алексинский, д.м.н., проф. В.А. Басинский, д.м.н., проф. С.А. Ляликов.

Введение.

Одним из важнейших вопросов, стоящих перед патоморфологами и онкологами, является оценка клинического прогноза онкологических заболеваний. В последние годы активно изучается возможность построения прогноза выживаемости и метастатического потенциала опухолей разной локализации на основании интенсивности экспрессии белков, непосредственно участвующих в процессе клеточного деления, поскольку интенсивность опухолевого роста определяется объёмом пролиферирующего клеточного пула. Одним из маркеров клеточной пролиферации является ki67. Этот белок появляется в ядре клетки в заключительной части фазы G₁ и с высокой интенсивностью экспрессируется до завершения митоза [3].

Прогностическая ценность экспрессии Ki-67 в меланоме кожи до сих пор оценивается неоднозначно. По данным Ilmonen S. et all [3], экспрессия Ki-67 не являлась прогностическим фактором в первичной меланоме. Установлено, что в узловых меланомах уровень пролиферации практически не влияет на прогрессию болезни. В узловой меланоме Ki-67 не связан с толщиной опухоли, и не оказывает влияния на отсутствие рецидивов или выживание в целом [2]. С другой стороны, имеются данные, что для меланом аноректальной и синоназальной локализаций низкий уровень экспрессии Ki67 ассоциирован с лучшими показателями выживаемости [1, 4]. Показано, что в доброкачественных меланоцитарных поражениях индекс Ki-67 составляет менее 5% (диапазон 0%-4%), и окрашивание присутствует вблизи дермо-эпидермального соединения, тогда как в меланомах средний индекс составляет 27% (диапазон 5%-50%), а структура окрашивания носит гетерогенный характер [7]. Korabiowska M. et all [5] нашли не только значительную корреляцию между экспрессией маркерного гена ki67 в меланомах кожи и временем выживания, а также наличием метастазов, но и продемонстрировали важную роль антигена Ki-67 для дифдиагноза между родимыми пятнами и меланомами.

Учитывая разноречивость литературных данных, мы поставили цель оценить прогностическую значимость экспрессии маркера клеточной пролиферации ki67 в меланоме кожи при разных стадиях инвазивного роста опухоли по Кларку, различной толщине опухоли по Breslow, различной распространённости первичной опухоли (pT), а также в меланомах различных гистологических типов.

Материалы и методы

Материалом для данного исследования послужили 45 меланом кожи, полученные путём тотальной эксцизии. Всем больным было проведено хирургическое лечение без применения лучевой и химиотерапии.

Для определения пролиферативного индекса клеток опухоли использовали иммуногистохимическое окрашивание гистологических срезов с применением моноклональных мышиных антител (MIB-1) фирмы «Dako» к протеину ki67.

Для подсчёта количества ядер, экспрессирующих ki67, микропрепараты фотографировали в случайных полях зрения (объектив 40) с разрешением 1600 на 1200 пикселей при помощи микроскопа Axiostar и цифровой камеры Canon A620. Подсчёт количества ядер проводился в фоторедакторе Adobe Photoshop CS5.1 при помощи функции “analysis”, инструмента “count tool”.

Клеточный пролиферативный индекс рассчитывался как соотношение (выраженное в процентах) ki67-позитивных клеточных ядер меланомы к общему количеству ядер клеток опухоли, подсчитанных при 400-кратном увеличении. Подсчёт производился для клеточной популяции, насчитывающей не менее тысячи клеток, если это позволял объём представленной на исследование опухоли, и не менее чем в двух случайных полях зрения. В случаях, когда в объёме опухолевой ткани содержалось менее тысячи клеток, подсчёт производился в максимальном количестве не перекрывающихся полей зрения.

Полученные данные обработаны при помощи стандартных пакетов статистических программ Statistica 6.0 и SPSS 13.0.

Результаты исследования и обсуждение.

Установлено, что экспрессия ki67 клетками меланомы кожи в представленных гистологических срезах варьирует в широких пределах – от полного отсутствия до 49,7%. В большинстве случаев распределение ki67-позитивных ядер носило либо достаточно равномерный характер, либо характеризовалось гетерогенностью с наличием случайно расположенных зон со сходной пролиферативной активностью. Только в 4 случаях были обнаружены значительные различия в величине индекса пролиферации, оцененного в зоне дермоэпидермального стыка и в интрадермальных частях опухоли.

При корреляционном анализе (методом Спирмена) не установлено достоверной связи между клеточным пролиферативным индексом и стадией инвазивного роста меланомы, определяемой по Кларку, а также толщиной опухоли, измеряемой по Breslow (в обоих случаях p>0,5). При множественных сравнениях методом Крускала-Уоллиса с использованием в качестве независимых группирующих критериев толщины опухоли по Breslow, стадии инвазивного роста по Кларку и гистологического типа опухоли статистически значимые различия в уровне экспрессии ki67 также отсутствовали (во всех случаях p>0,5).

Для изучения возможности прогнозировать выживаемость по величине экспрессии ki67 на основании полученных значений пролиферативного индекса была построена ROC-кривая со следующими параметрами: площадь под кривой = 0,703 (асимптотический 95% доверительный интервал 547-860), стандартная ошибка = 0,08, р = 0,024 (рисунок 2).

Из имеющегося ряда значений координат кривой было выбрано значение пролиферативного индекса, обладающее максимальной специфичностью и чувствительностью. Оптимальное значение исследуемой переменной составило 12,0% (чувствительность = 0,591, специфичность = 0,650). Затем выборка была разбита на две группы. В первую вошли лица, страдающие меланомой, клетки которой демонстрировали уровень экспрессии ki67, превышающий полученную пороговую точку, во вторую – пациенты со значением пролиферативного индекса ниже пороговой точки. При анализе выживаемости с помощью теста Гехана-Уилкоксона было найдено достоверное различие в общей и 5-летней выживаемости пациентов в указанных группах (р = 0,029 и 0,047 соответственно): лица, относящиеся к первой группе, продемонстрировали худшие показатели выживаемости по сравнению с пациентами из 2-й группы.

Заключение: Меланома кожи характеризуется широким диапазоном значений индекса клеточной пролиферации, причём могут встречаться меланомы со значительной разницей в зональной экспрессии маркеров клеточной пролиферации. Уровень клеточной пролиферации не связан с такими гистологическими параметрами опухоли как стадия инвазивного роста по Кларку, толщина опухоли по Breslow, гистологический тип, и может служить достоверным прогностическим критерием при оценке предполагаемой продолжительности жизни. Показатель пролиферативного индекса, превышающий 12%, ассоциирован с более неблагоприятным прогнозом в отношении общей и 5-летней выживаемости у пациентов с меланомой кожи независимо от стадии инвазивного роста по Кларку, толщины по Breslow или гистологического типа опухоли.

Литература:

1. Gerdes, J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies / J. Gerdes // Semin. Cancer Biol. – 1990. – Vol. 1(3) – P. 199-206.

2. Ki-67, Bcl-2 and p53 expression in primary and metastatic melanoma / S. Ilmonen [et al.] // Melanoma Res. – 2005. – Vol. 15(5) – P. 81-375.

3. Cyclin A expression in superficial spreading malignant melanomas correlates with clinical outcome. / V.A. Flørenes [et al.] // J. Pathol. – 2001. – Vol. 195(5) – P. 6-530.

4. Ki67 antigen and PCNA proliferation markers predict survival in anorectal malignant melanoma / O. Ben-Izhak [et al.] // Histopathology. – 2002. – Vol. 41(6) – P. 25-519.

5. Ki67 antigen as a predictive factor for prognosis of sinonasal mucosal melanoma / D.K. Kim [et al.] // Clin. Exp. Otorhinolaryngol. – 2008. – Vol. 1(4) – P. 10-206.

6. Nasr, M.R. Comparison of pHH3, Ki-67, and survivin immunoreactivity in benign and malignant melanocytic lesions / M.R. Nasr, O. El-Zammar // Am. J. Dermatopathol. – 2008. – Vol. 30(2) – P. 22-117.

7. Antigen Ki-67 and c-myc oncogene as related to histoclinical parameters in pigmented skin lesions / M. Korabiowska // In Vivo – 1995. – Vol. 9(5) – P. 8-433.