Диагностическое
значение определения
LE–клеток в «кожном окне»
Областной медицинский центр, Казахстан, г.Караганда.
LE–феномен
образуется благодаря присутствию в сыворотке больных системной красной
волчанкой особого фактора гамма – глобулиновой природы, под влиянием которого
ядра клеток крови или тканей набухают,
хроматин утрачивает свою структуру и превращается в аморфную массу.
Лизированный ядерный материал становится чужеродным для организма и
фагоцитируется лейкоцитами.
При микроскопическом
исследовании LE-клетка
представляет собой фагоцит, обычно нейтрофильный лейкоцит, в цитоплазме
которого содержится одно или несколько овальных, совершенно бесструктурных
гомогенных образований, окрашивающихся азур-эозином в светлый красновато-фиолетовый цвет. В мазках, помимо характерных волчаночных
клеток, можно видеть также свободно
лежащие тельца, большей частью округлые, того же строения и окраски, что и включения в клетках. Это
так называемые волчаночные тельца, не
фагоцитированные лейкоцитами. Кроме того, можно наблюдать эти же волчаночные тельца, окруженные
нейтрофилами, с образованием так называемых розеток.
От LE-клеток надо уметь отличать клетки Тарта, которые отдельные авторы называют
псевдо-LE-клетками.Это чаще всего полиморфноядерные лейкоциты,
поглотившие ядерную субстанцию с сохраненными контурами хроматиновой сети, в то
время как в LE-клетках включения гомогенные, полностью лишенные
ядерной структуры.
При резко
выраженном LE-феномене в каждом поле зрения можно видеть несколько
волчаночных клеток. Обнаружение в мазках только свободно лежащих телец, хотя и
очень напоминающих тельца красной волчанки, не позволяет с уверенностью дать
положительный ответ. Для выдачи отрицательного ответа следует тщательно
просмотреть серию препаратов. Обнаружение даже единичных, но не менее двух,
типичных клеток позволяет дать положительный ответ.
Известен способ
диагностики волчаночного нефрита от других нефропатий путем исследования крови
на наличие антинуклеарного фактора, недостатком которого является меньшая
специфичность, сложность постановки, требующая определенных навыков, наличия
дорогостоящих антисывороток.
Известен способ
диагностики волчаночного нефрита путем исследования крови на наличие LE-клеток. Способ осуществляется взятием крови из
локтевой вены в количестве 10-15 мл в пробирку, куда заранее вносят 2-3 капли
водного или карболового раствора гепарина. Кровь перемешивают и инкубируют при
комнатной температуре в течение 1-1,5 час. Затем в пробирку помещают 5-8 стеклянных бус, плотно
закрывают пробкой и ротируют со скоростью 44-50 об/мин. После этого кровь
отстаивают в течение часа до разделения слоев. Плазму, обогащенную лейкоцитами
отсасывают и переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 8-10
минут при 1000 об/мин. После этого кровь отстаивают. Из осадка делают мазки,
фиксируют их в метиловом спирте и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Мазки просматривают с сухой (увеличение 20), затем
с иммерсионной системой.
Указанный способ имеет следующие недостатки: инвазивен
(требует взятия 10-15 мл венозной крови), трудоёмок, способ выбран в
качестве прототипа и базового объекта.
Кроме того, этот способ недостаточно информативен, особенно у больных с тяжелым
нефротическим синдромом, при котором волчаночные клетки в крови обнаруживаются
не всегда, а системные проявления могут быть слабо выражены.
Дифференциальный
диагноз нефротического синдрома разной
этиологии очень важен, поскольку требует различной лекарственной терапии.
Целью
предлагаемого способа диагностики
является повышение точности определения и упрощение способа.
Способ
осуществляется с помощью постановки «кожного
окна».
На внутренней
поверхности средней трети левого предплечья скарифицируют поверхностный слой эпидермиса до капиллярных петель
размером 10х10 мм (всего три) и
накрывают покровными стёклами, которые укрепляют лейкопластырем и фиксируют бинтом. Стёкла снимают
поочерёдно через 6, 12, 24 часа, препараты (отпечатки) окрашивают азур-эозином
(по Романовскому-Гимзе) и микроскопируют. Отмечают содержание LE-клеток (чаще
всего нейтрофильный лейкоцит), содержащий
фагоцитированный гомогенный ядерный
материал, круглые гомогенные
гематоксилиновые тельца (внеклеточно расположенный ядерный материал, имеющий
круглую форму), гомогенизированные и фрагментированные «голые» ядра
нейтрофилов, отдельные сегментированные ядра нейтрофилов, имеющие вид набухших
со смазанным хроматином, круглым образованием, расположенных группами внеклеточно. При обнаружении одного или нескольких описанных
цитологических признаков диагносцируют
волчаночный нефрит.
Предлагаемый способ применён у 74-х больных с поражением
почек: у 20 волчаночным нефритом, в том
числе у 6 с нефротическим
синдромом, у 18 больных амилоидозом, у 10 с нефротическим синдромом, у
20 больных хроническим гломерулонефритом.
Установлено что
предложенный метод прост, неинвазивен и
высокоинформативен для дифференцильной
диагностики нефритов, в том числе с нефротическим
синдромом различной этиологии: волчаночного нефрита, хронического
гломерулонефрита, амилоидоза.
Достижение цели -
упрощение достигается за счёт исключения
забора крови, ротирования со стеклянными бусами, получения
лейкоконцентрата, центрифугирования.
По
сравнению со способом прототипом (базовым) предлагаемый способ имеет большую точность (таблица-1).
|
Метод |
Число исследуемых
больных волчаночным нефритом |
Процент совпадения
диагноза |
|
Прототип |
20 |
56% |
|
Предлагаемый способ |
20 |
95% |
У всех 20 больных
диагноз волчаночного нефрита был подтверждён так же обнаружением
антинуклеарного фактора в крови.
В предлагаемом
способе, в отличие от прототипа с целью повышения точности определения и упрощения
способа проводят микроскопию
отпечатков (кожного окна) и путём цитологического исследования при наличии одного из признаков: LE-клеток, круглых гомогенных гематоксилиновых телец,
гомогенизированных и фрагментированных (голых ядер) нейтрофилов- диагносцируют
волчаночный нефрит.
Преимущества предлагаемого способа, в сравнении с базовым объектом и прототипом состоят в повышении точности определения и упрощение способа.
Достоверность предлагаемого способа не вызывает сомнений, так как он проверен на группе больных с подтверждённым диагнозом волчаночного нефрита, количество которых вполне достаточно.
Данный способ диагностики может быть
использован в терапевтических отделениях и поликлиниках, располагающих
цитологическими лабораториями.