Медицина/8. Экспериментальная и клиническая фармакология

К.б.н. Бактыбаева Л.К., д.б.н. Тулеуханов С.Т.,

Даутова М.Б, Карбаева А.С.

Казахский национальный университет имени аль-Фараби, Казахстан

Исследование миелостимулирующих свойств фитопрепаратов, полученных из растений, произрастающих в аридной зоне Казахстана

В настоящее время в медицинской клинической практике используют препараты с миелосупрессивным действием. В частности, все цитостатики, применяющиеся в онкологической практике (в результате чего больной погибает не из-за онкологического заболевания, а от острой миелосупрессии), противотуберкулезные препараты (стрептомицин, тиацетазон, изониазид, Р-аминосалициловая кислота, диметилкарбазин), раствор Шторддарта (продукт перегонки нефти), тринитротолуол, пестициды, особенно хлорорганические препараты, линдан (гамма-гексахлорциклогексан) и ДДТ (дихлордифенилтрихлорэтан) также вызывают тяжелую панцитопению — одновременное уменьшение числа лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов. Но выбор эффективных миелостимулирующих препаратов, способных за короткий промежуток времени поднять (восстановить) показатели периферической крови и миелограммы костного мозга очень ограничен. Кроме того, миелостимуляторы находят широкое применение в офтальмологии, хирургии, косметологии и в биотехнологии. Таким образом, фармакологический скрининг миелостимулирующих препаратов актуален на сегодняшний день.

Методы. В работе использовали здоровых половозрелых животных - лабораторных крыс обоего пола, 10-15 нед. возраста, массой тела 210-280 г. До и в период эксперимента контрольные и опытные животные содержались в одинаковых стандартных условиях, на стандартном рационе, по 6 особей в клетке. Забор крови проводили из орбитальной вены крыс, наркотизированных слабым эфирным наркозом в 09.00 часов утра. Анализ крови проводили на гематологическом анализаторе для лабораторных животных «Abacus junior vet» (пр-во Diatron, Дания). Миелосупрессию вызывали внутримышечным введением цитостатика циклофосфамида натрия в дозе 30 мг/кг веса животного. Опытным группам животных соединения вводили в дозе 10 мг/мл (растворитель физиологический раствор), внутримышечно в объеме 0,5 мл ежедневно в течение 3 дней, спустя 3 дня после последнего введения определяли количество клеток в периферической крови. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили физиологический раствор. Препаратом сравнения являлся пантогематоген.

Результаты и их обсуждение. Уже на 1-ые сутки после введения можно было регистрировать тяжелую иммунодепрессию с поражением как лейкоцитарных клеток, так и красных кровяных клеток. За контроль по уровню поражения кроветворных пулов был взят 3-й день после введения иммунодепрессанта. Проведя анализ гемограммы крови было выявлено, что в большой степени пострадал лейкоцитарный пул. Общий лейкоцитрный показатель с уровня интактных животных (9,15±1,36)·10⁹/L крови упал до (2,371±0,16)·10⁹/L в 3,86 раза (Р≤0,05). В лейкограмме снизились обсолютные и относительные значения агранулоцитарных и гранулацитарных лейкоцитов. Среди агранулоцитов относительные значения лимфоцитов со значения (5,46±0,18)·10⁹/L крови упали в 3,41 раза до значения (1,60±0,2)·10⁹/L тогда как относительные значения со значения интактных животных (68,03±12,3)% крови упали лишь в 1,44 раза до (47,2±1,8)% крови. Аналогичная тенденция наблюдалась и в отношении других субпопуляций клеток.

Абсолютные значения падали более чем в 2 раза, а относительные значения снижались менее чем в 1,5 раза. Например, абсолютные значения моноцитарных клеток со значения (0,5±0,02)·10⁹/L крови снизилось до значения (0,12± 0,10) ·10⁹/L крови, т.е. в 4,17 раза (р≤0,05), тогда как относительное значение (6,28±1,24)% упало лишь до (4,9±1,3)%, что составило лишь 1,28-кратную разницу в значениях. Гранулоцитарные клетки со значения (3,64±1,22)·10⁹/L упали до (0,65±0,3) ·10⁹/L, т.е. в 5,6 раза(р≤0,01). А относительное значение гранулоцитов со значения (40,0±8,36).% упало в 1,52 раза, достигнув значения (26,18±4,5)%.

То, что абсолютные значения снижаются значительнее чем относительные, можно объяснить тем, что абсолютные значения более зависимы от значения общего лейкоцитарного показателя и поэтому интактные и значения после введения иммунодепрессанта более значимо изменялись, чем относительные.

Изменения в значениях эритроцитарных и тромбоцитарных клеток регистрировались, но более, чем 2-х кратного снижения не было зарегистрировано. Уровень эритроцитарных клеток (6,5±1,56)·10¹²/L крови достиг значения (4,93±1,3)·10¹²/L крови, т.е. снижение наблюдалось в 1,32 раза. Уровень гемоглобина упал в 4,51 раза. У интактных животных он составлял 140,7 ± 16,7 г/L крови. И после интоксикации упал до 90,75±12,0 г/L крови. Но гематокритные значение со значения (39,8±6,3) упало в 2,88 раза (Р≤0,05) раза, достигнув значения (21,21± 2,58).

Критическое снижение наблюдалось среди тромбоцитов .Уровень интактных животных составлял (660,25±91,21)·10⁹/L крови и при искусственно вызванном иммунодепрессивном синдроме составил (70,5±43,2)·10⁹/L крови, что составило более 9,36-кратное снижение (Р≤0,01).

Вызвав искуственный иммунодепрессивный синдром животных пролечили новыми соединениями растительного происхождения. Соединения были исследованы под следующими шифрами: Соляноколосник прикаспийский (Holostachys caspia) водный экстракт-ИЕС.СПП.401Р, Соляноколосник прикаспийский (Holostachys caspia) 50% водно – этиловый экстракт-ИЕС.СПП.401Р.СЭ, Сведа мелколистная (Sueda microphilla) водный экстракт-СИЕ.СМ.401Р, Сведа мелколистная (Sueda microphilla) 50% водно – этиловый экстракт-СИЕ.СМ.401Р.СЭ, Климакоптера туполистная (Climacoptera obbtusifolia) 70% водно – этиловый экстракт-G.COE_X, Климакоптера шерстистая (Climacoptera lanata) 70% водно – этиловый экстракт-G.CLE_X, Климакоптера толстоватая (Climacoptera subcrassa) водный экстракт-A.SKF Климакоптера толстоватая (Climacoptera subcrassa) 50% водно – этиловый экстракт-A.CSE_X.

Проведя анализ полученных данных можно выделть в первую очередь соединения СИЕ.СМ.401Р, СИЕ.СМ.401Р.СЭ, полученные из растения Сведа мелколистная (Sueda microphilla). Следует отметить, что значимо выделялись по активности соединения, полученные водно - этиловым экстрагированием растений, чем просто водным экстрагированием. Показатели крови животных, получавших соединение СИЕ.СМ401Р.СЭ. В первую очередь следует отметить, что уровень лейкоцитарных клеток вырос до (5,64±0,03)·10⁹/L крови, против значения контрольных животных (2,79±0,65)·10⁹/L крови, т.е.в 2,02 раза. Следует отметить, что соединение СИЕ.СМ.401Р.СЭ. значимо стимулировало деление гранулоцитов, чем агранулоцитов. Мало влияло на значения лимфоцитарных клеток. После проведенного лечения соединением абсолютное значение лимфоцитов составило (1,49±0,02)·10⁹/L крови против контрольного значения (1,55±0,25)·10⁹/L крови, т.е. даже контрольное значение выше. А относительные значения лимфоцитов в группе введения соединения СИЕ.СМ.401Р.СЭ даже в 1,93 раза были меньше контрольных (26,27±2,28)% против (50,65±8,36)%. А вот уровень гранулоцитарных лейкоцитов, как абсолютные, так и относительные значения значимо выросли в группе введения соединения СИЕ.СМ.401Р.СЭ. Абсолютное значение гранулоцитов в группе введения соединения СИЕ.СМ.401Р.СЭ составило (26,27±2,28)·10⁹/L против контрольного значения (1,13±0,0)·10⁹/L крови , т.е. в 23,25 раза (р≤0,01) превышая контроль. Относительное значение в группе введение соединение СИЕ.СМ.401Р.СЭ также превосходило контрольные значение в 1,45 раза

Значимых отличий в значениях эритроцитарных клеток не было зарегистрировано, ни в общем эритроцитарном показателе, ни в гемоглобине, гематокрите и т.д. Следует отметить изменения в уровне тромбоцитарных клеток, так против контрольного показателя (447,0±127,2)·10⁹/L крови в группе введения СИЕ.СМ.401Р.СЭ он составил (600,0±90,1)·10⁹/L крови.

Показатели гемограммы в группе введения водного аналога СИЕ.СМ.401Р были не то, что выше значений контрольной группы, а даже на несколько параметров ниже, в 1,3-2,4 раза. Например уровень лейкоцитов в группе введения соединения СИЕ.СМ.401Р был (1,31±0,33)·10⁹/L крови против контрольного значения (2,79±0,56)·10⁹/L крови. Также все показатели лейкограммы, как относительные, так и абсолютные, уступали контрольным значениям. Аналогичная картина наблюдалось в значениях эритроцитарных и тромбоцитарных клеток.

Абсолютно аналогичную картину можно увидеть в группах введения соединений ИЕС.СПП.401Р.СЭ. Общий лейкоцитарный показатель в группе введения ИЕС.СПП.401Р.СЭ. составил (4,96±1,23)·10⁹/L крови против контрольного значения (2,79±1,23)·10⁹/L крови. Относительное значение гранулоцитов составило (51,53±2,53)% против контрольного показателя (43,35±3,35)%. Значимых отличий в показателях моноцитов и лимфоцитов зарегистрировано не было.

Следует отметить следующее соединения G.COE_Х при общем лейкоцитарном показателе (4,71±1,21)·10⁹/L крови против контрольного значения (2,79±1,23)·10⁹/L крови. Но значимого увеличения ни агранулоцитов, ни гранулоцитов не было зарегистрировано. Лишь на 2-7% отличались значения в группе введения соединения G.COE_X, превышая показатели контрольной группы. А уровень эритроцитарных и тромбоцитарных клеток был даже ниже контрольных значений. Особенно уровень гемоглобина составлял (23,29±2,31)г/L крови против контрольного значения (96,0±12,2) г/L крови. Уровень тромбоцитов составлял (393,33±121,2)·10⁹/L крови против показателя контрольной группы (447,0±92,1)·10⁹/L крови.

В ряду соединений растительного происхождения самые плохие результаты по миелостимулирующей активности показало соединение ASCE_X. Значения лейкоцитарных, эритроцитарных, тромбоцитарных клеток были ниже показателей контрольной группы в 3,21-27,84 раза (Р≤0,01). В большей степени пострадали тромбоцитарные клетки, а так же соответственно уровень тромбокрита. Можно предположить, что данное соединение обладает цитостатическим действием, что и усугубило действие иммунодепрессанта. Также можно предположить, что соединения ASKF и GCLE_X также подавляют пролиферативную активность кроветворных пулов костного мозга, что и повлекло за собой снижение уровня клеток в периферической крови даже ниже уровня контрольной группы.

Таким образом, водно-спиртовые экстракты растений Соляноколосника прикаспийского и Сведы мелколистной обладают миелостимулирующим действием на гранулоцитарные лейкоциты. Не влияют на лимфоцитарные показатели. Соединения, полученные из растений Климакоптера туполистая, шерстистая, толстоватая обладают противоположным действием – подавляют пролиферативную активность клеток, т.е. обладают цитостатическим действием, но это требует дополнительного исследования (желательно у онкологов, которые изучают цитостатики на культуре раковых клеток).

Литература:

1. Алмазов В. А., Афанасьев Б. В., Зарицкий А. Ю., Шишков А. Л. Лейкопении. — Л.: Медицина, 1981. — 240 с.

2. Воробьев А. И., Бриллиант М. Д. Терапия осложнений цитопенического син-дрома. — В кн.: Патогенез и терапия лейкозов. М., Медицина, 1977, с. 153 — 163.

3. Кинетические аспекты гемопоэза/Под ред. Г. И. Козинца, Е. Д. Гольдберга. — Томск, 1982. — 311 с.

4. Файнштейн Ф. Э. Цитостатическая болезнь и агранулоцитозы. — В кн.: Болезни системы крови. — Ташкент, Медицина, 1980, с. 460 — 469.

5. Физиология лейкоцитов человека/Под ред. В. А. Алмазова, Б. В. Афанасьева, А. Ю. Зарицкого и др. Л.: Наука, 1979. — 231 с.

6. Cline М. J., Opelz G., Saxon A. et al. Autoimmune panleukopenia/New Engl. J., Med., 1976, vol. 295, p. 1489-1493.

7. Астрахан В. И., Гарин А. М., Личиницер М. Р. Общая характеристика и классификация побочного действия противоопухолевых лекарств. — В кн.: Побочное действие лекарственных средств. — М.: 1976, с. 207 — 213.

8. Баранов А. Е., Бриллиант М. Д., Воробьев А. И. Лечение цитостатической болезни. — Тер. арх., 1975, № 6, с. 79 — 87.

9. Воробьев А. И., Бриллиант М. Д., Баранов А. Е. Цитостатическая болезнь (к вопросу о лекарственных агранулоцитозах). — Тер. арх., 1975, № 6, с. 3 — 11.

10. Гершанович М. Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. Злокач. новообразования. — М., 1982. — 223 с.

11. Пелевина И. П., Афанасьев Г. Г., Готлит В. Я. Клеточные факторы реакции опухолей на облучение и химиотерапевтические воздействия. М.: Наука, 1978. —...

12. Kanamaru А., Наrа H., Nagai K. Hemopoietic stem cells and their regulatory factors in aplastic anemia. — Acta Haemat. Jap., 1981, vol 44. N7 n 1332 — 1340.

13. Khelif A., Vuvan H., Tremisi J. P. et al. Remission of acquired pure red cell aplasia following plasma exchanges. — Scand. J. Haemat., 1985, N 34, p. 13 — 15.