Егорова Е.В., Пересторонин В.И., Цыбиков Н.Н.

ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия

Роль белков теплового шока в местной резистентности полости носа и околоносовых пазух

Белки теплового шока (шапероны, стресс-белки, HSP-70, БТШ-70) это семейство эволюционно-древних белков, несущих стабильный геном и реализующих основную функцию – повышение резистентности клеток [1]. Слизистые оболочки организма, в том числе и полости носа, в течение онтогенеза подвергаются перманентному повреждающему действию патогенов внешней среды. Следует признать, что основной патоген представлен инфектами, в числе которых могут присутствовать как сапрофитные, так и болезнетворные микроорганизмы. Исходя из такой предпосылки ожидаемо, что эпителий слизистых находится в состоянии постоянного повреждения и как следствие - внутриклеточного синтеза БТШ-70.

До настоящего времени, роль БТШ как в механизмах создания местной резистентности, так и его участие в развитии хронического гнойного риносинусита (ХГРС) практически не исследовалось. Решение этого вопроса позволило бы расширить наши представления о понимании патогенеза этого заболевания.

Цель исследования: определить уровень HSP-70 в сыворотке крови и назальном секрете у здоровых и больных ХГРС на фоне лечения

Материалы и методы исследования

Под нашим наблюдением находилось 60 больных ХГРС в возрасте от 18 до 55 лет до и после лечения традиционными оригинальным методами. Контрольная группа состояла из 20 здоровых лиц без сопутствующей и ЛОР патологии.

Материалом для иммунологического исследования служили сыворотка крови и назальный секрет здоровых и больных ХГРС. Для получения смывов из полости носа пациенту в каждый общий носовой ход на 10 минут вводили сухой марлевый тампон, который после извлечения переносили в пробирку, содержащую 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Через 30 мин тампоны тщательно отжимали, и полученный смыв использовали для определения HSP-70 [2]. Концентрацию HSP-70 в сыворотке крови определяли моноклональными антителами методом ИФА. Статистическая обработка данных осуществлена при помощи пакета программ «Biostat» и Microsoft Excel 2003 (Microsoft Office 2003 for Windows XP Professional).

Результаты и обсуждение

Как показано в таблицах 1,2 содержание HSP-70 в сыворотке здоровых людей составило 0,17 нг/мл, а в назальном секрете 0,05 нг/мл. Низкий уровень БТШ-70 в назальном секрете, на наш взгляд, может быть связан с высокой степенью разведения секрета при десорбции компонентов слизи с марлевой турунды. В настоящее время сложилось мнение о том, что появление стресс-белков всегда сигнализирует о наличии патологического процесса. На самом же деле, в жидких средах абсолютно здоровых людей закономерно регистрируется БТШ-70 в ощутимых количествах. Следует предполагать, что перманентный синтез БТШ-70 в различных клетках отражает степень физиологического повреждения. С учетом эволюционной древности генома шаперонов, следует предполагать их очевидную гетерогенность для человека.

Таблица 1

Содержание БТШ-70 в сыворотке крови здоровых и больных ХГРС до и после лечения

(M ±SD)

Параметры пг/мл	Здоровые n=20	ХГРС до лечения n=60	ХГРС после лечения n=60
			традиционное	оригинальное
БТШ-70	0,17±0,08	0,65±0,01 Р<0,05	1,7±0,25 Р1<0,05	2,64±0,40 Р2<0,05 Р3<0,05

Примечание: Р - уровень значимости достоверных отличий между здоровыми и больными до лечения, Р1 - уровень значимости достоверных отличий между больными ХГРС до лечения и после проведения традиционной терапии, Р2 - уровень значимости достоверных отличий между больными ХГРС до лечения и после проведения оригинальной терапии, Р3 - уровень значимости достоверных отличий между традиционной и оригинальной терапией

Таблица 2

Содержание БТШ-70 в назальном секрете здоровых и больных ХГРС до и после лечения

(M ±SD)

Параметры пг/мл	Здоровые n=20	ХГРС до лечения n=60	ХГРС после лечения n=60
			традиционное	оригинальное
БТШ-70	0,05±0,003	0,16±0,07 Р<0,05	1,5±0,23 Р1<0,05	2,49±0,37 Р2<0,05 Р3<0,05

Примечание: Р - уровень значимости достоверных отличий между здоровыми и больными до лечения, Р1 - уровень значимости достоверных отличий между больными ХГРС до лечения и после проведения традиционной терапии, Р2 - уровень значимости достоверных отличий между больными ХГРС до лечения и после проведения оригинальной терапии, Р3 - уровень значимости достоверных отличий между традиционной и оригинальной терапией

В условиях патологии динамика уровня БТШ-70 переходит на количественно другой уровень. Нами показано (табл. 1), что при ХГРС увеличивается концентрация БТШ-70 более чем в 5 раз в сыворотке крови. Содержание БТШ-70 резко увеличивается и в назальном секрете больных ХГРС (табл. 2), что может говорить об интенсивности воспаления в полости носа и ОНП. Причем, следует учитывать, что БТШ-70 синтезируется, экспрессируется и секретируется при локальном гнойном процессе эпителием, провоспалительными клетками, эндотелием, клетками соединительной ткани с одной стороны, а с другой - микроорганизмами. Последние находятся под постоянным действием факторов врожденного и адаптивного иммунитета, а так же антибиотиков, что является сигналом для синтеза БТШ в микроорганизмах.

Как указывалось ранее больных ХГРС лечили традиционным и оригинальными методами. Традиционная консервативная терапия включала системное назначение антибиотиков широкого спектра действия (амоксиклава или цефтриаксона), антигистаминные препараты. По показаниям выполняли пункцию гайморовой пазухи с промыванием синуса физиологическим раствором или наложение синус-катетера-ЯМИК для эвакуации содержимого из ОНП. Местно использовали сосудосуживающие препараты (назол или називин), ирригационную терапию физиологическим раствором. После купирования гнойно-воспалительного процесса больным проводилось физиотерапевтическое лечение. Оригинальная терапия, заключалась в экстракорпоральной активации лейкоцитов тимогеном. Для этого у пациентов в утренние часы забирали кровь из локтевой вены в пробирки с гепарином. В полученные образцы добавляли 0,01% раствор тимогена (10 мкг на 1мл крови) и инкубировали смесь в течение часа при комнатной температуре, затем центрифугировали при 1500 об/мин. Использовали две фракции – плазму крови и слой лейкоцитов, которые разводили физиологическим раствором в соотношении 1:10 и вводили пациентам в гайморовы пазухи, посредством заранее установленных дренажей или через синус-катетер -ЯМИК. Предварительно пазухи промывали 0,9 % раствором натрия хлорида в объеме 20 мл. Необходимо отметить, что описанный способ терапии проводили на фоне продолжающегося «стандартного» медикаментозного лечения.

Нами показано, что на фоне как традиционной, так и особенно оригинальной терапии концентрация HSP -70 возрастает как в сыворотке крови, так и назальном секретах (табл. 1, 2). Увеличение уровня этого шаперона может свидетельствовать с одной стороны об усилении секреции БТШ-70 микроорганизмами, которые повреждаются факторами местной резистентности, в том числе лейкоцитами, активированными тимогеном. Другим источником HSP -70, безусловно, являются клетки (макрофаги, моноциты) в сумме отражающие интенсивность воспаления.

Таким образом, при ХГРС значительно возрастает содержание HSP-70 в исследуемых биологических жидкостях, что отражает остроту воспалительного процесса. Динамику БТШ-70 следует расценивать как компенсаторную реакцию характеризующую напряженность механизмов резистентности.

Литература:

1. Пастухов Ю.Ф., Худик К.А., Екимова И.В. Шапероны в регуляции и восстановлении физиологических функций // Рос. Физиол. Журн. Им. И.М. Сеченова. 2010. Т. 96. N. 7. С. : 708-725.

2. Смирнова И. Н. Противовоспалительное действие ингаляций минеральных вод: целесообразность определения биохимических маркеров воспаления в назальном секрете / И. Н. Смирнова, Т. Н. Зарипова, Д. И. Кузьменко // Вопросы курортологии. - 2003. - № 4. -С. 20-23.