Осипова С.К., Горохова Т.А., Тржецинский С.Д., Мозуль В.И., Фурса Н.С.

Ярославский государственный медицинский университет

Запорожский государственный медицинский университет

ИЗУЧЕНИЕ УГЛЕВОДНОГО СОСТАВА НАСТОЙКИ ВАЛЕРИАНЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

Углеводы широко распространены в природе. Их подразделяют на моносахариды (монозы) и полисахариды (полиозы). Они обладают многими фармакологическими свойствами, в частности противовоспалительными, обволакивающими, ранозаживляющими и др. [1,3].

В корневищах с корнями валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L.s.l.) содержатся альдогексозы (глюкоза, галактоза, манноза), кетогексоза (фруктоза), пентозы (арабиноза, ксилоза, рибоза), кислоты (галактоновая, глюконовая, гулоновая), дисахарид (сахароза) [2,5], полисахариды, в состав которых входят арабиноза, галактоза, глюкоза, ксилоза, галактуроновая и глюкуроновая кислоты [4,5]. Данные об углеводном составе настойки валерианы нами не обнаружены.

Цель исследования – проанализировать углеводный состав настойки валерианы.

Объект исследования – настойка валерианы лекарственной, произведенная в феврале 2013 г. ЗАО «Московская фармацевтическая фабрика». Масса сухого остатка после упаривания настойки на водяной бане и высушивания в сушильном шкафу при температуре 85 ºС равнялась 3,2 г.

Для анализа свободных моносахаридов к 30 мг сухого остатка добавляли 1 мл воды очищенной в пробирке с завинчивающейся пробкой, нагревали при 90 ºС с последующим встряхиванием на протяжении часа при 25 ºС. После этого раствор центрифугировали 10 минут при 14000 об/мин. В дальнейшем аликвоту 20 мкл супернатанта анализировали методом прямофазовой ВЭЖХ на колонке Luna NH-24,6×250 мм или аналогичной с подвижной фазой ацетонитрил/вода 70:30 при скорости потока 1 мл/мин, комнатной температуре и с рефрактометрической детекцией. Обработку хроматограммы осуществляли при помощи программы «Экохром», расчет концентраций моносахаридов проводили по внешнему стандарту, содержащему смесь анализируемых сахаров и глицерина в концентрации 10 г/л. Результаты количественного определения свободных моносахаридов отражены в таблице 1.

Таблица 1

Содержание свободных углеводов в настойке валерианы

Лекарственная форма	Сахара, %			Общая сумма
	глюкоза	фруктоза	сахароза
Настойка	3,74	5,26	19,08	28,08

Из результатов исследований следует, что среди свободных углеводов больше всего содержалось сахарозы, значительно меньше кетогексозы фруктозы и альдогексозы глюкозы.

Для анализа связанных сахаров проводили гидролиз 1М хлористоводородной кислотой при 100 ºС в течение 2,5 часов. После этого раствор центрифугировали 10 минут при 14000 об/мин. К 0,5 мл супернатанта добавляли 1,5 мл воды и 2 мл полученного раствора пропускали через обращенно-фазный концентрирующий патрон (Диасорб С16), отбрасывали первые 1,8 мл и собирали последующие 0,2 мл. К 20 мкл раствора смеси стандартов в концентрации 1 г/л каждого углевода (внешний стандарт) и исследуемого раствора добавляли 20 мкл раствора внутреннего стандарта (раствор глюкозамина с концентрацией 1 г/л) и упаривали на вакуумированном центрифужном испарителе типа SpeedVac с подогревом в полипропиленовой пробирке. К высушенной пробе добавляли 20 мкл 0,5М раствора 1-фенил-3-метил-5-пиразолона в метаноле и 20 мкл 0,3М КОН, тщательно встряхивали на Vortex и термостатировали при 70 ºС в течение 2 часов. Для нейтрализации использовали 20 мкл 0,3М хлористоводородной кислоты и дважды экстрагировали избыток 1-фенил-3-метил-5-пиразолона 500 мкл бензола. Остаток упаривали на SpeedVac с подогревом и растворяли в 500 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:9). Содержание связанных сахаров определяли методом капиллярного электрофореза с использованием прибора Applied Biosystem 273 T. Обработку электрофореграммы осуществляли с помощью той же программы, что и свободных сахаров. Отношение пиков и расчет концентраций углеводов проводили по внутреннему (глюкозамин) и внешнему стандартам (смеси анализируемых углеводов в концентрации 1 г/л). Результаты определения приведены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание связанных сахаров в настойке валерианы

Лекарственная форма	Сахара, %				Общая сумма
	глюкоза	галактоза	манноза	арабиноза
Настойка	12,4	0,1	0,2	0,1	12,8

Из анализа видно, что среди связанных сахаров больше всего содержалось глюкозы.

Следовательно, в настойке валерианы определен состав и содержание свободных и связанных углеводов.

Литература:

1. Муравьёва, Т.И. Фармакосанирующие эффекты полисахаридов растительного происхождения: автореф. дис. … д-ра фармац. наук / Т.И. Муравьёва. – СПб., 1999. – 40 с.

2. Парфенов, А.А. Сравнительное фармакохимическое изучение валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного: автореф. дис. … канд. фармац. наук / А.А. Парфенов. – Пермь, 2009. – 24 с.

3. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств / Н.А. Криштанова [и др.] // Вестник Воронежского ГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. – 2005. - №1. – С. 212-221.

4. Талашова, С.В. Фармакогностическое изучение, стандартизация и комплексная переработка валерианы лекарственной: автореф. дис. … канд. фармац. наук / С.В. Талашова. – М., 1996. – 24 с.

5. Шкроботько, П.Ю. Дослiдження елементного складу та бiологiчно активних речовин рiзних видiв роду валерiана: автореф. дис. … канд. фармац. наук / П.Ю. Шкроботько.- Запорiжжя, 2011. - 24 с.