Медицина/7.Клиническая медицина.

Егорова Е.В., Пересторонин В.И., Цыбиков Н.Н.

ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия

Коагулологическая активность краткосрочной культуры моноцитов у больных хроническими риносинуситами

Установлено, что продукция моноцитарного тканевого фактора в ответ на стимуляцию клеток бактериальным эндотоксином (ЛПС) происходит как по CD14-зависимой, включающей CD14 связывание, так и по CD14-независимой схеме передачи сигналов. Впервые была показана роль CD14 в распознавании эндотоксина и его участие в трансмембранной передаче сигналов. Исследователи установили, что противовоспалительные цитокины (IL-4 и IL-10) значительно угнетают продукцию моноцитарного тканевого фактора. ИЛ-4 прерывает CD14-зависимый путь ЛПС активации продукции моноцитарного тканевого фактора [1].

Таким образом, приведенные факты свидетельствуют о значительной роли моноцитов в регуляции свертывания крови путем продукции тканевого фактора и других соединений, оказывающих влияние на процессы коагуляции. Однако до настоящего времени совершенно не исследовались механизмы участия моноцитов в формировании коагуляционного гемостаза в полости носа и ОНП.

Цель исследования: определить коагулологическую активность краткосрочной культуры моноцитов у больных хроническими риносинуситами

Материалы и методы исследования

Под нашим наблюдением находилось 60 больных хроническим гнойным риносинуситом (ХГРС) и 40 пациентов хроническим гнойно-полипозным риносинуситом (ХГПРС) в возрасте от 18 до 55 лет. Контрольная группа состояла из 20 здоровых лиц без сопутствующей и ЛОР патологии.

Материалом для иммунологического исследования служили назальный секрет здоровых и больных ХГРС и ХГПРС и донорская тест-плазма. Для получения смывов из полости носа пациенту в каждый общий носовой ход на 10 минут вводили сухой марлевый тампон, который после извлечения переносили в пробирку, содержащую 1 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Следует указать, что назальный секрет, десорбированный с марлевого тампона, подвергали разведению до стандарта оптической плотности, определяемой на спектрофотометре при длине волны 280 нм. В качестве стандарта выбрана величина оптической плотности равная 0, 400 ext.

В цитратную донорскую плазму (объем 100 мкл) вносили аликвоты назального секрета, смесь инкубировали 10 мин при комнатной температуре и определяли коагулологические показатели: активное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), время рекальцификации и каолиновое время.

Коагулологическую активность краткосрочной культуры моноцитов

осуществляли по оригинальному методу. Моноциты по 100 000 в аликвотах по 200 мкл вносили в лунки интактных полистероловых планшетов. В контрольные лунки вводили по 100 мкл забуференного физиологического раствора, в другие контрольные лунки – продигиозан в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл (1 мкг на лунку). В опытные лунки в зависимости от цели эксперимента вводили исследуемые субстраты (по 100 мкл), инкубировали при 37⁰С в течение 2 часов, клетки ресуспендировали путем пипетирования и вносили в цитратную тест-плазму, а затем вводили раствор CaCl₂ 0,277% и регистрировали время свертывания плазмы или АЧТВ. Результат выражали в секундах.

Статистическая обработка данных осуществлена при помощи пакета программ «Biostat» и Microsoft Excel 2003 (Microsoft Office 2003 for Windows XP Professional).

Результаты и обсуждение

На наш взгляд, более перспективным и интересным является способность секретов активировать моноциты и макрофаги к продукции тканевого фактора с последующим определением в этих клеточных культурах коагулоагической активности. Именно такая постановка вопроса наиболее адекватно отражает местные коагуляционные возможности.

Оказалось, что у здоровых людей супернатант культуры моноцитов, инкубированных с назальным секретом, проявляет более высокую коагулологическую активность (табл. 2).

Таблица 2

Коагулологические свойства культуры моноцитов у больных ХГРС и ХГПРС

(M ±SD)

Изучаемые показатели (сек.)	Контроль (физ.раствор) n=10	Здоровые (назальный секрет) n=20	Больные ХГРС (назальный секрет) n=60	Больные ХГПРС (назальный секрет) n=40
Время рекальцификации	120,0±8,0	70,0±5,1 Р<0,05	62,1±3,2 Р1<0,05	58,1±2,3 Р2<0,05 Р3˃0,05
АЧТВ	40,2±0,5	35,0±0,4 Р<0,05	34,0±0,3 Р1<0,05	30,5±0,4 Р2<0,05 Р3<0,05

Примечание: Р - уровень значимости достоверных отличий между контролем и здоровыми, Р1 - уровень значимости достоверных отличий между здоровыми и больными ХГРС, Р2 - уровень значимости достоверных отличий между здоровыми и больными ХГПРС, Р3 - уровень значимости достоверных отличий между больными ХГРС и ХГПРС

Так, супернатант 2-х часовой культуры моноцитов максимально сокращал время рекальцификации и АЧТВ донорских тест-плазм. Выявленная закономерность, несомненно, свидетельствует в пользу продукции тканевого фактора моноцитами в описываемых экспериментах.

Таким образом смывы слизистой оболочки носа и ОНП здоровых увеличивают коагулологическую активность донорской тест- плазмы за счет выделения моноцитами тканевого фактора.

В следующем исследовании мы активировали моноциты и макрофаги назальным секретом больных ХГРС и ХГПРС. Нами показано (табл. 1), что супернатант краткосрочной культуры донорских моноцитов, инкубируемых с назальным секретом больных ХГРС и ХГПРС сокращает время рекальцификации и АЧТВ тест-плазм доноров по сравнению с контролем (физ. раствор).

Таким образом, вышеприведенное усиление гемостатических свойств назального секрета больных ХГРС и ХГПРС вероятно обусловлено накоплением тканевого фактора, секретируемого из моноцитов и макрофагов слизистой полости носа и ОНП.

Литература:

1. Коррекция функциональной активности фагоцитов в очаге воспаления у больных с глубокими флегмонами шеи / Е.А. Цеймах и [др.] // Стоматология. – 2004. – № 4. – С. 37 – 41.