Биологические науки /9. Биохимия и биофизика

Алшынбаев О.А. преподаватель-соискатель, Халила А.Н., д.б.н. профессор.Алибаев Н.Н. профессор, д.с.-х.н. Академический инновационный университет

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ТЕМПЕРАТУРЫ И ВРЕМЕНИ В ПРОЦЕССЕ СВЯЗИ ГОНОТРОПНЫХ ГОРМОНОВ К ЭРИТРОЦИТАМ

Имуннологическая реакция показывает связь антигенов и антителов к окружающей среде. В настоящее время существует множество видов имуннологических реакций. К ним относятся: реакция агглютинации (РА), реакция преципикации (РП), комплементационная реакция связывания (КРС), обратная гемаглютинация или непрямая реакция гемаглютинациии (ОГР) , антигенная реакция нейтрализации (АРАг), реакция нейтрализации антитела ( РНАд), латексная реакция агглютинации (ЛРА) и множество других видов[1,2]. К основным компонентам всех иммунологических реакций относятся антиген и антитело. Соединение антигена и антитела в иммунологических реакциях называется иммунокомплексом [3,4].

Чтобы наглядно увидеть образование этого иммунокомплекса используют дополнительные вещества. Результат обратной реакции гемагглютинации наблюдается в связи выпадания в осадок эритроцитарных диагностикумов. Если в проверяемых сыворотки крови существуют укрепленные в эритроцитарные диагностикумы соединенные с антигенами антитела, то происходит агглютинация. И наоборот, в проверяемой сыворотки крови не существуют соответствующих антител, то эритроцитарные диагностикумы в реакцию не впадают.

Обратная гемагглютинация является высоко чувствительной и простой по постановке происходящей через реакции нейтрализации антитела, нейтрализации антигена и других проводимых эритроцитарных диагностикумов [5,6,7]. Поэтому способы получения необходимых эритроцитарных диагностикумов к этим указанным реакциям считаются актуальными проблемами сегодняшнего дня.

В процессе приготовления эритроцитарных диагностикумов используются множество способов. Их основой считается укрепление иммунологически активных веществ - гемосенситинов. К гемосенситинам относятся сыворотка крови жеребой кобылы и взятые с нее активные компоненты.

Чувствительность эритроцитарных диагностикумов напрямую связаны с плотностью укрепленных к эритроцитам гемосенситинов. Плотность укрепленных гемосенситинов к эритроцитам проявляется благодаря чувствительному титру непрямой реакции гемагглютинации.[8].

В процессе укрепления гемосенситинов в эритроциты иследуются воздействие их насыщенности, средняя температуры и других обстоятельств.

Впервые укрепление гемосенситинов в эритроциты проводилось посредством танина. Однако обнаружилось множество недостатков этого способа. А именно, протанинованые эритроциты под влиянием сыворотки крови самопризвольно входили в агглютинацию. Выявилось, что этот недостаток полностью не устраняется даже способом проводившимся через предварительное очищение сыворотки крови. Поэтому показатели непрямой реакции поставленные с протанинованые эритроцитарными диагностикумами могут быть ложными. В последнее время стали использоваться новые способы укрепления гемосенситинов в эритроциты. В процессе связывания эритроцитов и гемосенситинов к используемые конъюгантам относятся: хлорид хрома, бисдиазобензидин, формальдегид, альдегид глутара и др. К ряду используемых этой группы конъюгантов можно отнести риванол и амидол.

При помощи названных конъюгантов появилась возможность улучшить способы укрепления гемосенситинов к эритроцитам и повысить чувствительность полученных эритроцитарных диагностикумов.

В связи с этим, чтобы в предстоящих научных работах получить эритроцитарный диагностикум гемосенситинового (ГСКЖК) эритроцитного диагностикума сыворотки жеребой кобылы, мы сравнительно исследовали воздействие конъюгантов. Во всех исследованиях применялись одинаковые серии гемосенситинов. А процессе получения эритроцитарных диагностикумов сыворотка жеребой кобылы и и взятые с нее активные (ГСКЖК) компоненты сравнительно исследовались. На начальном этапе исследовательских работ исследовалось укрепление к эритроцитам от воздействия танина растворов 1:1, 1:2, 1:3 ГСКЖК при температурах 25⁰С, 30⁰С, 35⁰С, 40⁰С, 50⁰С, 55⁰С, 60⁰С 30, 45, 60, 90 минутах времени.

Результаты исследовательских работ показали что связыванию к эритроцитам ГСКЖК посредством танина является воздействие температуры. В процессе увеличения температуры наблюдалось усиливание укрепления ГСКЖК к эритроцитам посредством танина. А именно выявилось, в результате исследования воздействия укрепления ГСКЖК к эритроциты посредством танина, его физиологический раствор в соотношении 1:2 при выдержке в температуре 45⁰ С, является высоко чувствительной, и находится в в титре 1:400.

Наблюдалось, что растворы ГСКЖК при показателях 1:1 реакция самопроизвольно происходила в гемагглютинацию и при растворах 1:4, 1:8 реакции не происходило. Результаты исследований показали, что при нижних температурах 25⁰С, 30⁰С, укрепление СКЖК к эритроцитам уменьшалось, а при высоких температурах 55⁰С, 65⁰С чувствительность эритроцитарных диагностикумов снижалась.

Такой показатель наблюдается и его гемосенситивной фракцией. При выдержке в температуре 45⁰С, в процессе укрепления СКЖК посредством танина полученный самый высокий показатель в непрямой реакции гемагглютинации эритроцитарного диагностикума показывает чувствительность в титре 1:800.

На последующем этапе работ исследовалось воздействие времени на получение эриторцитарных диагностикумов. Результаты исследований показали, что за 10 минут времени, эритроцитные диагностикумы не образовываются. Выяснилось, что для получения эритроцитарного диагностикума посредством танина самое приемлемое временем является 40 минут. При времени ниже этого времени - 15 минутах чувствительность эритроцитарных диагностикумов показывает 1:50 титров, 20 минутах 1:200, 25 минутах 1:600, 35 минутах 1:700 титров. А при выдержке больше 40 минут, 45, 50, 55 минут, выявилось, что чувствительность эритроцитарных диагностикумов оказываются в одинаковом объеме.

Такой показатель наблюдается и при получении эритроцитных диагностикумов фракции СКЖК. А именно за 10 минут времени эритроцитный диагностикум не образуется, за 15 минут 1:100, за 20 минут 1:200, за 25 минут 1:400, за 30 минут 1:800, за 35 минут 1:1200, за 40 минут 1:1600 титров. При выдерживании более этого времени чувствительность эритроцитных диагностикумов будет постоянной.

В результате выяснилось, что для укрепления сыворотки крови жеребой кобылы и ее активных гемонеситивных фракций к эритроцитам посредством танина, можно получить высоко чувствительные эритроцитарные диагностикумы выдержав 40 минут при темпертатуре 45⁰С.

Использованная литература

1.Чайка Н.А. Реакция непрямой гемагглютинации. Л., 1981

2. Чайка Н.А. Серологическая диагностика паразитарных болезней, М., 1982

3. Римель Х., Ьрок Н. Основы иммунологии М., 1986

4. Халилаев А.Н. Иммунология и экология таксоплазм. Монография. А.,1995

5. Сайдуллин Т. Основы серологии А., 1992

6.Шамардин В.А., Каральник Б.В. Способ сенсибилизации эритроцитов А.С.

614777. СССР Б.Н. 1978 N25

7. Шамардин В.А. Научные основы приготовления эритроцитарных диагностикумов Автореф.Докт.Дисс. М., 1982

8. Халилаев А.Н. Определение паразитарных болезней животных иммунологическим способом. Монография А., 1996