Акушерство и гинекология/ 2. Органическая химия

Д. б. н., проф. Зубарева Г. М., Костина М. А.

Тверская государственная медицинская академия, Россия

Возможности применения методов инфракрасной спектрометрии и тонкослойной хроматографии сыворотки крови в дифференциальной диагностике доброкачественной патологии тела матки

Генитальный эндометриоз (ГЭ) является одним из наиболее распространенных гинекологических заболеваний у женщин репродуктивного возраста. Наиболее частая локализация этой патологии – поражение матки (аденомиоз), доля которого в структуре ГЭ составляет от 70 до 80% [4]. Наиболее часто при аденомиозе диагностируется миома матки, что встречается у 49-85% больных и клинически проявляется симптомами обоих заболеваний, наиболее выражен болевой синдром, гиперполименорея, вторичная анемия, дисфункция кишечника [1, 2, 3]. Симптомокомплекс как при аденомиозе так и при его сочетании с миомой обладает крайне низкой специфичностью, практически все указанные жалобы во многих клинических случаях одинаково характерны для заболеваний эндо- и миометрия, что значительно затрудняет диагностику патологического процесса, вследствие чего специфичность гинекологического обследования (анамнез, бимануальный осмотр, инструментальные, лабораторные, гистологические методы) не позволяет установить диагноз в 88% случаев [9, 10, 11, 12].

Целью исследования явилась выявление диагностически значимых изменений липидного спектра и диапазонов инфракрасного спектра (ИКС) сыворотки и плазмы крови для дифференциальной диагностики аденомиоза и сочетанной доброкачественной патологии матки (миома в сочетании с аденомиозом).

Материалы и методы исследования. Всего было обследовано 170 женщин в возрасте 35 – 48 лет, из них 80 – с сочетанием аденомиоза и миомы матки – 1-я группа, 60 – с чистой формой аденомиоза – 2-я группа и 30 - практически здоровых (3-я группа).

Обследование пациенток осуществлялось с использованием анкетно-опросного метода, включающего сбор жалоб, анамнеза, всем проводился клинический и биохимический анализы крови, тонкослойная хроматография плазмы крови и исследование инфракрасного спектра сыворотки крови, ультразвуковое сканирование органов малого таза, гистероскопия и раздельное диагностическое выскабливание, оперативное лечение (по показаниям проводилось больным с сочетанной патологией с последующим гистологическим исследованием препаратов).

Для исследования ИКС сыворотки крови был применен девятизональный анализатор - аппаратно-программный комплекс «Икар» (сертификат № 5745 от 20.11.98г., патент на изобретение № 2137126 от 10.09.99г.), позволяющий регистрировать показатели пропускания исследуемой системы в области длин волн от 3500 до 963 см^-1. Разработанная технология использования ряда параметров динамики показателей инфракрасного спектра сыворотки крови является универсальной, т.к. позволяет проводить раннюю диагностику и прогнозирование различных заболеваний на основании оценки суммарного эффекта влияния разнообразных компонентов изучаемых объектов на состояние водной основы биологической жидкости [6, 7]. Для измерения показателей пропускания в инфракрасной области были выбраны диапазоны, соответствующие связям основных функциональных групп биологически активным веществ и молекул воды.

Достоверность различий между группами определялись с помощью критериев Стьюдента и Фишера, а также расчета доверительного интервала используемых выборок.

Анализ первичных данных аппаратно-программного комплекса «ИКАР» проводили специализированным программным обеспечением, разработанным для этих целей на базе операционной системы Windows XP в вычислительной среде системы MATLAB 6.5 фирмы Math Works Inc (лицензия №146229).

Для исследования липидного спектра плазмы использовался метод тонкослойной хроматографии [6, 10]. Для оценки различий показателей липидных фракций между обследуемыми группами использовали метод сравнения - критерий Манна – Уитни.

Результаты исследования и их обсуждение Проведен анализ ряда медико-социальных параметров в исследуемых группах, в ходе которого было выявлено, что большинство женщин из первой группы относились к возрастной категории от 37 до 49 лет (средний возраст 43,6±6,8 лет), во второй группе преобладали пациентки в возрасте 27-36 лет (средний возраст 31,8±4,2 лет), что свидетельствовало о статистически значимых различиях в возрастном составе исследуемого контингента. При проведении всем больным клинического анализа крови было установлено, что в первой группе анемизированные женщины составляют 75,8%, что на 55,4% превышает частоту встречаемости таких больных во второй группе до проведения консервативной терапии. При исследовании ИКС сыворотки крови обследуемых групп с сочетанной патологией матки и с «чистой» формой аденомиоза было установлено, что существенных изменений показателей ИК-излучения не было отмечено только в диапазоне 1729 – 1533см^-1, который характерен для связей С=О и N-H амидных групп и Н-О-Н имеющихся в составе белков и воды (р>0,05). В остальных исследуемых областях были зафиксированы достоверные отличия (р<0,05). При сравнении показателей пропускания с группой контроля нами не установлены достоверные отличия в первой группе в диапазоне 2120-1880 см^-1 и во второй группе в диапазоне 3500 – 3100 см^-1 (таблица 1).

Таблица 1

Показатели пропускания ИК-излучения сыворотки крови обследуемых групп

Область ИК-спектра (см^-1)	1-я группа	2-я группа	3-я группа
3500 – 3100	1,90262±0,0758	0,93294**±0,0352	1,2931 ±0,4059
3085 – 2732	45,48310±0,3659	50,68132±0,1964	40,9310±1,1309
2120 – 1880	67,87263^**±0,3851	73,75059±0,2143	69,1034±1,6755
1831 – 1623	43,31655±0,3277	46,87840±0,1684	64,4931±1,3759
1729 – 1533	11,40665±0,2053	11,63299*±0,1027	16,5276±0,7341
1543 – 1396	39,05559±0,4085	43,36469±0,2039	27,1034±1,2179
1470 – 1330	41,12270±0,4077	45,74838±0,2068	32,5276±0,9055
1170 – 1057	41,50382±0,3722	45,49870±0,1981	34,5724±1,0431
1087 – 963	38,54356±0,3757	42,39762±0,1858	31,5690±1,2658

Примечание: 1-я группа – женщины с сочетанием внутреннего эндометриоза (аденомиоза) с миомой матки, 2-я группа - с чистой формой аденомиоза, 3-я группа - контроль (здоровые)

* - р > 0,05 – при сравнении с первой группой;

** - р > 0,05 - при сравнении с группой контроля

Таким образом, сравнительный анализ показателей пропускания ИК излучения сыворотки крови больных позволяет считать наиболее информативными области 3085 – 2732, 1831 – 1623, 1543 – 963 см^-1.

При изучении липидного спектра плазмы крови было установлено, повышенное количество общих липидов (ОЛ) в группе женщин с сочетанной доброкачественной патологией матки относительно контроля на 36,3% и относительно второй группы на 38,5%. Достоверных отличий в содержании ОЛ между группой контроля и группой женщин с аденомиозом не получено (р>0,05). Для первой группы характерны повышенные значения относительно третьей следующих фракций липидов: фосфолипиды (ФЛ) (на 43,3%), лизофосфатидилхолин (ЛФХ) (46,5%), триглицериды (ТГ) (на 31,7%), сфингомилины (СФМ) (на 75,6%), эфиры холестерина (ЭХ) (на 35,6%), свободный холестерин (СХЛ) (на 33,8%), диглицериды (ДГ) (на 45,2%) (р<0,05). Фосфоинозитиды (ФИ) снижены в данной группе в 1,6 раза относительно здоровых (на 62,2%). Показатели лизофосфатидилэтаноламинов (ЛФЭА) в первой группе в 2,3 раза были ниже таковых в группе контроля. Количество фосфатидилхолина (ФХ) в первой группе было снижено относительно второй на 56,8%. Выявлены повышенные относительно второй группы показатели ЛФХ (на 39%), ТГ (на 22,9%), ЭХ (на 49%), ДГ (на 9,8%). ФИ в первой группе достоверно меньше относительно показателей во второй на 28,6%. Все выше приведенные результаты достоверны (р<0,05). Однако, не обнаружено достоверных отличий между группами больных в содержании свободных жирных кислот (СЖК) и между второй группой и контролем в количестве ЭХ, СЖК, ОЛ и ТГ, (р>0,05). Проведя сравнительный анализ полученных результатов групп пациенток с аденомиозом и контролем, были выявлены достоверные изменения (р>0,05) в увеличении ФЛ на 30,3%, ФХ на 32,6%, СФМ на 28,1%, СХ на 27,8%, ДГ на 32,2%, а содержание ЛФЭА в 2 раза превышало значения относительно последней. Содержание ФИ во второй группе на 26,13% меньше относительно контроля (р<0,05) (рис. 1).

Рис. 1. Среднее содержание липидов и их фракций в плазме крови обследуемых больных.

Выводы.1.Инфракрасная спектрометрия сыворотки крови позволяет проводить дифференциальную диагностику доброкачественной патологии матки, т. к. имеются достоверные отличия показателей пропускания исследуемого спектра сыворотки у больных с сочетанной патологией матки и у пациенток с аденомиозом, в том числе и в сравнении с группой контроля, при этом наиболее выраженные изменения отмечаются в диапазонах 3085 – 2732, 1831 – 1623, 1543 – 963 см^-1. 2. Гиперлипидемия (за исключением СЖК и ФХ) у больных с сочетанной доброкачественной патологией матки также может использоваться в диагностических целях.

Литература:

1. Адамян Л. В., Кулаков В. И., Андреева Е. Н. Эндометриозы: Руководство для врачей. - М.: Медицина, 2006 – 480 с.

2. Баскаков В. П., Цвелев Ю. В., Кира Е. Ф. Эндометриоидная болезнь.– СПб.: Изд-во Н-Л, 2002. – 448с.

3. Боровкова Л. В. Репродуктивная функция у больных с генитальным эндометриозом: Автореф. дис. …д-ра мед. наук. – М., 2004. – 34 с.

4. Дамиров М. М. Генитальный эндометриоз – болезнь активных и деловых женщин. М.: Изд-во Бином, 2010. – 191с.

5. Дин Р. Процессы распада в клетке. М., 1981. – С. 107-116

6. Зубарева Г. М. Анализ состояния биологических систем с помощью ИК- спектрометрии: Автореф. дис. … д-ра. биол. наук – Москва, 2005. – 44с.

7. Каргаполов А. В. Новые подходы к определению целостного состояния биологически активных систем / А. В. Каргаполов, Г. М. Зубарева. – Тверь, 2006. – 184 с.

8. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов. М. Кейтс. Пер. с англ. – Л.: Наука. – 1981. – 332 с.

9. Особенности морфофункционального состояния эндометрия, местного и системного иммунитета женщин репродуктивного возраста при внутреннем эндометриозе (аденомиозе) и современные методы терапии / Михнина Е. А., Давыдова Н. И., Эллиниди В.Н., Калинина Н. М. // Журнал акушерства и женских болезней. – 2006. – Том LV, вып. 3. – С. 78-82.

10. Цвелев Ю. В., Беженарь В. Ф., Повзун С. А., Фридман Д. Б. Клиническая диагностика аденомиоза // Журнал акушерства и женских болезней. – 2005. – Т. LІV, вып. 3. – С. 91-98.

11. Atri M., Reinhold C., Mehio A. R., Champan W. B., Bret P. M. Adenomyosis: US features with histologic correlation in an in-vitro study // Radiology. – 2000. – Jun – Vol. 215. – P. 783-790

12. Bergholt T., Eriksen L., Berendt N., Jacobsen M. et al. Prevalence and risk factors of adenomyosis at hysterectomy // Hum. Reprod. – 2001. – Vol. 16. – P. 2418-2421.