Медицина/5.Педиатрия
Сёмин Е.В., Блохин Б.М., Каграманова К.Г., Майорова
О.А.
Российский
государственный медицинский университет Росздрава, Россия
Роль HLA-антигенов в формировании атопических заболеваний у детей и подростков
Московского региона
Цель исследования
Целью нашего исследования было изучить
молекулярно-генетическими методами на популяционном уровне особенности системы HLA
I, II классов у детей и
подростков с персистирующим течением атопических заболеваний Московского
региона и оценить роль системы HLA
при формировании данной патологии.
Материалы и методы
В исследование было включено 60
детей и подростков европеоидов в возрасте от 5 до 18 лет с персистирующим
течением аллергического ринита/риноконъюнктивита, и/или атопического дерматита
и/или атопической бронхиальной астмы после подписания родителями пациента или
пациентом информированного согласия на участие в исследовании. Критерии
исключения детей и подростков из исследования был отказ родителей пациента или
пациента от подписания информированного согласия и участия в исследовании. Контрольная группа была представлена
1700 образцов пуповинной крови условно здоровых новорожденных детей, внесённых
в реестр неродственных доноров в городе Москве. Образцы пуповинной крови находятся
на хранении в ГУЗ «БСК ДЗМ» (Государственное учреждение здравоохранения «Банк
стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы»). Диагноз аллергического ринита
основывался на диагностических
критериях ARIA (Allergic rhinitis and
its impact on
asthma), 2010.
[1]. Диагноз атопического
дерматита основывался на общепринятых диагностических критериях, сформулированных Hanifin и Rajka [2].
Диагноз атопической бронхиальной
астмы основывался на диагностических
критериях GINA [3].
Всем пациентам были выполнены: клинический анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови, риноцитология, спирометрия: исход + проба с
бронхолитиком (для детей старше 5 лет), кожно-скарификационное тестирование с
неинфекционными атопическими аллергенами, исследование общего сывороточного иммуноглобулина Е и аллергенспецифических IgE, HLA-типирование методом
ПЦР (полимеразной цепной реакции) с
помощью олигонуклеотидных зондов и аллель-специфических праймеров.
Статистическая
обработка результатов производилась c
использованием методик Стентона Гланца, 1999 год с помощью программы «Statistica 6.0». Для
проверки значимости связи между двумя категоризованными переменными,
вычисленными в результате прямого подсчёта, использовался точный двусторонний критерий
Фишера (p=∑pi) с
вероятностью ошибки p<
0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Для изучения генетической
предрасположенности к атопическим заболеваниям был проведён сравнительный
анализ распределения аллельных вариантов всех генов HLA в генотипе основной и
контрольной групп.
В локусе HLA-A*
статистически значимая положительная ассоциация с атопией получена для
специфичности HLA-A*02. В основной группе частота встречаемости
составляла 41,67% (f=0,4167), в
то время как в контрольной группе- 28,69% (f=0,2869), р=0,029
(f- частота встречаемости аллеля
(для гомозигот бралась дважды), т.е. доля). Для специфичностей HLA-A*11,
HLA-A*32 была получена статистически значимая отрицательная ассоциация с
атопией. Специфичность HLA-A*11 в основной группе встречалась в 1,67% (f=0,0167), в группе контроля в 6,16% (f=0,0616), р=0,0467.
Специфичность HLA-A*32 не встречалась в основной группе, а в группе
контроля частота встречаемости составила 3,00% (f=0,0300), р=0,0491.
На основании полученных данных можно отклонить «нулевую гипотезу».
В локусе HLA-B*
статистически значимая положительная ассоциация с атопией при сравнении
основной и контрольной групп была выявлена для следующих специфичностей: HLA-В*15-
10,00% (f=0,1000) в основной
группе, против 5,49% (f=0,0549)
в контрольной группе, р=0,0434; HLA-В*27-
11,67% (f=0,1167) в основной
группе, против 5,12% (f=0,0512)
в контрольной группе, р=0,0055; HLA-В*39-
5,00% (f=0,0500) в основной группе, против 1,96% в контрольной группе, р=0,0364; HLA-В*53- 1,67% (f=0,0167) в основной группе, против
0,15% (f=0,0015) в контрольной
группе, р=0,0234.
Для специфичностей HLA-В*52
и HLA-В*57, напротив, была получена статистически значимая отрицательная
ассоциация с атопией. Данные специфичности в основной группе не встречались, в
то время как в группе контроля встречались в 3,07% (f=0,0307), р=0,0498 и 3,01% (f=0,0301), р=0,0492, случаев соответственно.
При сравнении частоты встречаемости
специфичностей локуса HLA-C* в основной и контрольной группах было выявлено
статистически значимое отличие между ними по специфичностям HLA-C*03 (положительная ассоциация с
атопией), HLA-C*06 (отрицательная ассоциация с атопией). Специфичность HLA-C*03
в основной группе выявлялась у 15,00% (f=0,1500) пациентов, тогда как в
контрольной группе- у 9,09 % (f=0,0909), р=0,0363. Специфичность HLA-C*06 в основной группе
выявлялась у 3,33 % (f=0,0333) пациентов, тогда как в контрольной группе- у
13,02 % (f=0,1302), р=0,0007.
Не
менее интересные результаты были получены при сопоставлении частоты
встречаемости генов HLA II класса.
Статистически значимая положительная ассоциация
с атопией при сравнении основной и контрольной групп по локусу HLA-DRB1*
были выявлена для специфичности HLA-DRB1*09. В основной группе
специфичность HLA-DRB1*09 встречалась 5,00% (f=0,0500) случаев, тогда
как в контрольной группе- в 1,46% (f=0,0146), р=0,0109. Кроме этого, была получена статистически значимая
отрицательная ассоциация с атопией для специфичностей HLA-DRB1*04 и HLA-DRB1*07.
Специфичность HLA-DRB1*04 в основной группе встречалась в 5,00% (f=0,0500) случаев, в группе контроля в
11,06% (f=0,1106), р=03,53. Специфичность HLA-DRB1*07 в основной группе
встречалась в 6,67% (f=0,0667) случаев, в группе контроля в
14,86% (f=0,1486), р=0,0115.
Статистически значимая
отрицательная ассоциация по локусу HLA-DQB1* с атопией была выявлена для
специфичности HLA-DQB1*02, которая составила 13,33% (f=0,1333) случаев в основной группе в
отличие от 21,14% (f=0,0214), р=0,0389 в контрольной группе.
Данные, полученные при сравнении
частот встречаемости специфичностей (групп аллелей) в основной и контрольной
группах и представляющиеся, как статистически значимые, были подвергнуты
дальнейшему статистическому анализу. Силу ассоциации анализируемых признаков
определяли с помощью величины относительного риска (RR) и величины отношения
шансов (OR): RR=
/
, OR=A*D/B*C, где A- число
больных с определённым геном, B- число
здоровых с определенным геном, C- число
больных без гена, D- число
здоровых без гена.
Для всех перечисленных критериев рассчитывался
доверительный интервал (Cl) при 95% уровне значимости. Важно сказать, что
доверительные интервалы для показателей относительного риска развития
заболевания, отношения шансов не должны проходить через 1. В противном случае
значение риска учитывать нельзя и данные специфичности не могут рассматриваться
в качестве маркеров атопии. При значениях RR и OR больше единицы можно говорить
о том, что конкретная специфичность ассоциирована с заболеванием и чем больше
эти величины, тем ассоциация более выражена.
Среди вычисленных показателей относительного
риска и отношения шансов, высокие и достоверные значения в основной группе
отмечены для следующих специфичностей: HLA-В*15 (RR=2,034, OR=2106), HLA-В*27
(RR=2,569, OR=2,702), HLA-В*39 (RR=2,610, OR=2,764), HLA-В*53
(RR=8,291, OR=11,207), HLA-DRB1*09 (RR=3,389, OR=3,701).
Для специфичностей А*02 и C*03
показатели RR, OR достоверны (р<0,05), но доверительные интервалы
проходят через 1. Это указывает на низкую ассоциацию данных специфичностей с
атопией. Таким образом, проведенный анализ позволяет предполагать существование
генетически детерминированной связи развития атопии с выявленными статистически
значимыми специфичностями (группами аллелей).
Значения относительного риска и отношения шансов
для специфичностей, выявленных в основной группе как статистически значимые
отрицательные ассоциации, были меньше
единицы: HLA-C*06 (RR=0,229, OR=0,221); HLA-DRB1*04 (RR=0,418, OR=0,408), HLA-DRB1*07 (RR=0,400, OR=0,389), HLA-DQB1*02 (RR=0,568, OR=0,556).
Значения RR и OR практически не отличались. Доверительные интервалы <1, р<0,05.
В данной ситуации ассоциацию с атопией можно считать отрицательной. Такое сочетание
низких показателей относительного риска и отношения шансов с высокими
показателями превентивной фракции позволяет говорить об устойчивости к развитию
атопии при наличии данных специфичностей.
Выводы и
практические рекомендации
1.
В исследуемой группе выявлены
положительные ассоциации атопических заболеваний с HLA-специфичностями HLA-В*15
(RR=2,034, OR=2106), HLA-В*27 (RR=2,569, OR=2,702), HLA-В*39
(RR=2,610, OR=2,764), HLA-В*53 (RR=8,291, OR=11,207), HLA-DRB1*09
(RR=3,389, OR=3,701); выявлены отрицательные ассоциации с атопическими
заболеваниями по специфичностям: HLA-C*06 (RR=0,229, OR=0,221); HLA-DRB1*04
(RR=0,418, OR=0,408), HLA-DRB1*07 (RR=0,400, OR=0,389), HLA-DQB1*02
(RR=0,568, OR=0,556);
2.
Полученные методом
полимеразной цепной реакции данные распределения генов системы HLA у условно
здорового детского населения кавказоидов (европеоидов) Московского региона и
пациентов с атопией, рекомендуется использовать для проведения подобных
исследований в медицинских учреждениях аналогичного профиля других регионов
России для выявления групп риска и создания регистра больных атопическими
заболеваниями;
3.
Контингент
лиц с маркерами HLA-ассоциированной предрасположенности к развитию атопических
заболеваний подлежит охвату мероприятиями первичной и вторичной профилактики с
целью разработки превентивных мероприятий по предотвращению формирования
«атопического марша».
Литература
1.
«Allergic rhinitis and its impact on
asthma», Guidelines, 2010, vol. 9/8/2010, p. 21;
2.
Correale C., Walker C., Murphy L. et
al. «Atopic dermatitis: a review of diagnosis and treatment» // Am. Family.
Phys. 1999, 60, p. 1191-1197;
3.
«Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы» // Под ред. Чучалина А.Г.- М.: Издательский дом «Атмосфера», 2007, 104
с., ил.