Д.м.н. Кривохижина Л.В., к.м.н. Ермолаева Е.Н., к.м.н. Кантюков С.А.

Южно-Уральский государственный медицинский университет, Россия

Воздействие церулоплазмина на процессы свободнорадикального окисления в тромбоцитах

Активация процессов свободнорадикального окисления (СРО) в тромбоцитах является одной из важнейших характеристик структурно-функционального состояния этих клеток. Показано, что экзогенная или внутриклеточная продукция активных метаболитов кислорода влияет на функцию тромбоцитов. Поэтому ведется поиск лекарственных препаратов, которые могут прямо или косвенно изменять функциональное состояние кровяных пластинок через изменения процессов СРО в плазме и тромбоцитах. Одним из таких веществ является церулоплазмин (ЦП). ЦП основной антиоксидант плазмы. Он восстанавливает О^-₂ с помощью пары Си²⁺ до Н₂О, перехватывает свободные кислородные радикалы и предохраняет липидосодержащие структуры от их повреждающего действия.

Цель исследования: определить влияние ЦП на процессы свободно-радикального окисления в интактных и активированных АДФ тромбоцитах.

Материалы и методы. Работа выполнена на крови белых беспородных крыс. Исследования на животных выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.1977. Кровь стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия (9:1). Готовили обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) с количеством тромбоцитов в ней - 3^.х10⁸ кл/мкл.

Влияние ЦП на интенсивность процессов СРО определяли в интактных тромбоцитах и в процессе АДФ - индуцированной агрегации. Контрольную группу составили пробы ОТП с физиологическим раствором, опытную – пробы ОТП с ЦП, которые предварительно инкубировали в термостате при 37^о С – 30 минут. В экспериментах использовался препарат «Церулоплазмин», выпускаемый НПО «Иммунопрепарат» г. Уфа, его добавляли в пробы в концентрации 50% от его физиологического уровня в сыворотке крови.

О генерации активных форм кислорода судили по интенсивности хемилюминесценции тромбоцитов. Исследование выполнено на приборе хемилюминометре ХЛ-003. Продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли спектрофотометрическим методом в изопропанольной фракции [1]. Уровень малонового диальдегида (МДА) определяли в цветной реакции с тиобарбитуровой кислотой по методу В.В.Гаврилова с соавторами в модификации Э.Н. Коробейниковой. Достоверность различий между группами рассчитывали по парному t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение. ЦП обладает выраженными антиоксидантными свойствами, он достоверно снизил показатели люминол-зависимой хемилюминесценции тромбоцитов: светосумму и максимальную светимость (табл. 1). Аналогично изменилось и содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах (табл. 2). Добавление ЦП приводит к достоверному снижению содержания общих, промежуточных продуктов ПОЛ в ОТП. В ОТП достоверно уменьшился уровень МДА.

Таблица 1

Влияние церулоплазмина на показатели хемилюминесценции тромбоцитов

Показатели ХЛ		Контрольная группа (n = 9)	Опытная группа (n = 7)
люминол – зави- симое свечение	Светосумма (у.е · мин)	12,98 ± 1,57	6,54 ± 1,10*
	Макс. светимость (у.е)	3,23 ± 0,35	1,22 ± 0,26*
АДФ – индуци-ванная ХЛ	Светосумма (у.е · мин)	40,64 ± 3,33	29,39 ± 2,25*
	Макс. светимость (у.е)	9,40 ± 1,17	6,83 ± 0,93

Примечание:* – различие с контрольной по t – критерию Стьюдента (р < 0,01)

Индукция АДФ в ОТП вызывает агрегацию тромбоцитов, поэтому АДФ - индуцированную хемилюминесценцию тромбоцитов можно сопоставить с этим процессом. ЦП изменяет показатели АДФ – индуцированной хемилюминесценции тромбоцитов: светосумму (р < 0,01) и максимальную светимость (на правах тенденции).

Таблица 2

Влияние ЦП на содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах

Показатель	Интактные тромбоциты (n = 8)		После АДФ-индуцированной агрегации (n = 8)
	Контроль	Опыт	Контроль	Опыт
S 220 ед/мл	9,94 ± 0,06	8,68 ± 0,23*	9,81 ± 0,09	8,18 ± 0,21*
S 232 ед/мл	7,41 ± 0,44	7,12 ± 0,23	8,40 ± 0,36	6,28 ± 0,22*
S 278ед/мл	2,59 ± 0,40	1,67 ± 0,07*	2,71 ± 0,19	2,17 ± 0,11*
S 400ед/мл	1,06 ± 0,31	0,76 ± 0,23	0,66 ± 0,11	0,62 ± 0,06
МДА моль/мл	3,89 ± 0,14	2,63 ± 0,18*	2,69 ± 0,06	2,60 ± 0,10

Примечание:* – различие с контрольной по t – критерию Стьюдента (р < 0,01)

Предварительная инкубация ЦП с ОТП с последующей АДФ – индуцированной агрегацией приводит к достоверному уменьшению количества общих продуктов ПОЛ, за счет снижения первичных и промежуточных продуктов ПОЛ. Тромбоциты работают по принципу саморегулирующейся системы, накопление конечных продуктов ПОЛ в тромбоцитах приводит к снижению их функциональной активности. ЦП, оказывая выраженное антиоксидантное действие на тромбоциты, опосредованно изменяет и их функциональное состояние, оказывая антиагрегационный эффект [2].

Список литературы

1. Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г. и др. Сопоставление различных подходов к определению продуктов ПОЛ в гептан – изопропанольных экстрактах крови // Вопр. мед. химии. – 1989. – Т. 35, № 1. – С.127–131.

2. Ермолаева Е.Н., Кривохижина Л.В., Кантюков С.А, Сергеенко В.А. Механизм антиагрегационного действия церулоплазмина // Эфферентная

терапия. – 2004. - Т.10, № 4. - С. 39 – 42.