Медицина/ 8. Морфология

К.м.н. Милюшина Я.А., Есболатова Г.М., к.м.н. Кожанова С.К., к.м.н. Милюшина И.Н.

Государственный медицинский университет г.Семей

Влияние туберкулезной инфекции беременных на формирование тимуса плодов человека

Актуальность исследования. Туберкулез является одной из наиболее актуальных социальных и медицинских проблем. По данным ВОЗ туберкулез занимает третье место среди причин смертности женщин детородного возраста во всем мире [1, 2, 3]. В Семипалатинском регионе общая заболеваемость туберкулезом выше среднереспубликанского показателя [4]. Сочетание процессов туберкулезного воспаления и беременности, как правило, является фактором риска отрицательного взаимодействия на оба процесса [5, 6]. Многочисленными клиническими и экспериментальными исследованиями показаны последствия различных форм патологии беременности для потомства, однако не достаточно изучено влияние различных осложнений течения беременности на органы иммунной системы у потомства [7].

Цель исследования. Изучение особенностей гистоархитектоники тимуса плодов человека и экспрессии белка-регулятора апоптоза bcl-2 в его лимфоидном компоненте при туберкулезной инфекции беременных.

Материал и методы. Исследования проведены на гистологических и иммуногистохимических препаратах тимусов плодов человека в сроке гестации от 18 до 27 недель (n=36). Материал был разделен на две группы: 1-я группа – условная норма (без патологии беременности); 2-я группа – плоды от женщин, перенесших туберкулезную инфекцию во время беременности, средний срок гестации в обеих группах составил 21-22 недели.

Из фрагментов тимуса готовились гистологические препараты с окраской гематоксилин-эозином для оценки гистологической структуры тимуса (согласно «Алгоритма оценки морфологических признаков вилочковой железы», Пругло Ю.В., 1996 г.) и препараты для иммуногистохимического исследования: срезы толщиной 3-5 мкм наносились на стекла, обработанные поли-L-лизином (Menzel-Glaser), после депарафинирования подвергались обработке в СВЧ-печи, затем после отмывания в буфере их инкубировали с первичными моноклональными антителами к bcl-2 (Clone: 124 “DAKO”). Для иммуноокрашивания продуктов реакции использовали систему визуализации Kit LSAB2® System-HRP (“DAKO”). Докраску ядер осуществляли гематоксилином. При интерпретации результатов распределения продуктов иммуногистохимической реакции учитывали локализацию и интенсивность окрашивания. Интенсивность иммуноокрашивания оценивали по 3 бальной шкале: 0 – нет окрашивания, 1 – слабое окрашивание, 2 – умеренное окрашивание, 3 – сильное окрашивание. Использовалась следующая формула подсчета: Histochemical score = ∑P(i)∙i. Результат трактуется следующим образом: от 0 до 10 – отрицательный, от 10 до 100 – слабоположительный, от 100 до 300 – положительный.

Результаты и обсуждение. При световой микроскопии срезов тимуса прослеживается соединительнотканная капсула с отходящими от нее септами, по клеточному составу в структуре дольки преобладают средние и малые лимфоциты, более крупные сосредоточены вблизи и в самой субкапсулярной зоне, встречаются единичные макрофаги и эозинофилы. Граница между корковым и мозговым веществом выражена отчетливо. В контрольной группе наиболее часто встречались дольки среднего размера со значительным преобладанием коркового вещества над мозговым. Тимические дольки чаще содержали малое количество среднего размера телец Гассаля, в основном, аморфного и слоистого типов. У плодов от женщин с туберкулезной инфекцией средние размеры долек тимуса значительно превышали размеры долек контрольной группы: 367,62+45,6 УЕП (условных единиц площади) по сравнению с 192,92+23,4 УЕП, также наблюдалось большее среднее число телец Гассаля в дольке: 7,03+0,9 по сравнению с 2,36+0,6, размеры телец Гассаля достоверно не отличались в группах сравнения.

Положительная иммуногистохимическая реакция на выявление белка bcl-2 проявилась цитоплазматическим окрашиванием лимфоцитов преимущественно мозгового вещества долек тимуса, меньшее число иммунопозитивных клеток расположено в корковом веществе. Так, при туберкулезной инфекции матери в 66,7 % случаев наблюдалась слабоположительная иммуногистохимическая реакция на bcl-2 в лимфоцитах коркового вещества тимуса, в мозговом веществе в 33, 3% случаев реакция была положительная, в 66,7 % - слабоположительная, средний уровень экспрессии bcl-2 в корковом веществе составил 30,33+10,4 баллов, в мозговом веществе – 78,33+11,0 баллов. В контрольной группе результаты распределились следующим образом: слабоположительная иммуногистохимическая реакция на bcl-2 в лимфоцитах коркового вещества тимуса наблюдалась в 40 % случаев, уровень экспрессии bcl-2 составил 6,0+2,1 баллов, в лимфоцитах мозгового вещества тимуса в 40 % случаев была положительная иммуногистохимическая реакция на bcl-2, средний уровень экспрессии составил 43,0+14,7 балла.

Известно, что для кортикальных лимфоцитов характерен низкий уровень экспрессии bcl-2, так как в корковом веществе тимуса идут интенсивные процессы селекции и лимфоциты, лишенные специальных факторов защиты, подвержены апоптозу, в мозговом же веществе тимуса сконцентрированы более дифференцированные лимфоциты, проявляющие устойчивость к факторам индуцирующим апоптоз. В нашем случае в тимусах плодов от женщин, перенесших туберкулезную инфекцию уровень экспрессии bcl-2 был выше чем в контрольной группе как для лимфоцитов коркового, там и мозгового вещества тимуса.

Заключение. Таким образом, проведенные нами исследования показывают, что туберкулезная инфекция матери оказывает непосредственное воздействие на формирование центрального органа иммунной системы – тимуса, что проявляется склонностью к развитию гиперплазии органа и изменением процессов регуляции апоптоза. Морфологическая дефектность тимуса, возникающая при данной патологии течения беременности может послужить основой для врожденных иммунодефицитных болезней.

Литература:

1. Bishara H., Vinitsky O., Salim R., Keness Y., Chazan B., Miron D. Tuberculosis in pregnancy and puerperium // Harefuah. – 2013. – V. 152 (7). – P. 381-384.

2. Kazemnejad A., Arsang Jang S., Amani F., Omidi A. Global Epidemic Trend of Tuberculosis during 1990-2010: Using Segmented Regression Model // J Res Health Sci. – 2014. – V. 14 (2). – P. 115-121.

3. Якимова А. В. Туберкулез легких у беременных: морфологические особенности плаценты / А. В. Якимова, Л. А. Черданцева, А. П. Надеев, В. А. Шкурупий // Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера: Материалы III Российской научной конференции с международным участием – Новосибирск, 2006. – С. 168-169.

4. Игембаева К.С., Игембаева Р.С., Селиханова Н.К., Маликова З.Д. Эпидемиологические показатели туберкулеза за 35 лет (1975-2009 гг.) // Сборник тезисов VI Международной научно-практической конференции «Экология. Радиация. Здоровье.» - Семей, 2009. – С. 127.

5. Черданцева Л. А. Морфологические изменения в печени беременных мышей-самок линии C57Bl/6 при экспериментальном туберкулезе / Л. А Черданцева, А. В Якимова, А. П. Надеев, В. А Шкурупий // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – Приложение № 1. – С. 83-85.

6. Белиловский Е.М., Борисов С.Е., Дергачёв А.В. и др. Заболеваемость туберкулёзом в России: её структура и динамика. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. – 2003. - №7. - С.4-11.

7. Колесникова С.М., Левкова Е.А., Гребеняк О.А. Антенатальные аспекты формирования тимуса плода при различных типах гестации. // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2012. - №1. – С. 66-68.