Биологические науки/11. Биоинженерия и биоинформатика

д. с.-х. н. Айбазов М.М.

к.б.н. Аксенова П.В.

к.б.н. Коваленко Д.В.

Ставропольский НИИ животноводства и кормопроизводства, Россия

Техника пересадки эмбрионов у коз

Технология трансплантации эмбрионов позволяет решить задачу ускоренного размножения ценных в племенном отношении животных, получения от них как можно большего количества потомков. Если с помощью искусственного осеменения можно получить от племенного козла до 800-900 потомков в год, то, при получении потомков от племенной самки нас ограничивают физиологические барьеры. Коза не сможет в естественных условиях выкормить более 2 козлят, поэтому, даже при фармакологической индукции полиовуляции, имплантируются и разовьются в плод не более 2-3 эмбрионов.

Сущность трансплантации заключается в гормональной обработке ценного в племенном отношении животного-донора с целью получения возможно большего количества яйцеклеток, его оплодотворения, извлечения эмбрионов и введения их нескольким, менее ценным животным-реципиентам.

Видовые особенности продуктивных животных обуславливают развитие различных подходов, как к гормональной обработке, так и к методике операций. Техника извлечения и трансплантации эмбрионов у коз, основанная на результатах собственных многолетних экспериментов, состоит в следующем.

Извлечение эмбрионов у коз (фото 1-12).

Оперативный доступ к внутренним половым органам для извлечения эмбрионов у коз проводят лапаротомией, под общим наркозом. Техника сводится к следующему. Животных фиксируют на операционном столе в спинном положении с приподнятым тазом. Подготавливают операционное поле. После дезинфекции операционного поля 5% спиртовым раствором йода намечают линию разреза.

Фото 1. Варианты оперативного доступа

Разрез, длиной 5-7 см, можно делать двумя способами: краниально от переднего края молочной железы по белой линии живота (красная линия) или отступая 2-3 см от белой линии влево либо вправо (синяя линия) (фото 1). Наш опыт свидетельствует о предпочтительности первого подхода.

В случае, если вскрытие брюшной стенки производят по белой линии, разрезают кожу с подкожной клетчаткой, ткани белой линии (апоневроз) и брюшину (фото 2-3).

Фото 2. Разрез кожи с подкожной клетчаткой	Фото 3. Прохождение апоневроза	Фото 4. Извлечение матки; поиск яичника по рогу матки

При парамедианном разрезе последовательно рассекают кожу, подкожную клетчатку, желтую брюшную фасцию, апоневрозы наружного и внутреннего косых брюшных мускулов. Тупым концом скальпеля разъединяют прямой брюшной мускул по ходу мышечных волокон, а брюшину с поперечной фасцией живота рассекают ножницами на всю длину операционного разреза.

Фото 5. Осмотр и описание яичников	Фото 6. Введение канюли в яйцевод через воронку

Фото 7. Прокол рога матки

Через разрез в брюшную полость вводят указательный и средний пальцы, с помощью которых отыскивают матку и осторожно извлекают ее наружу вместе с яичниками (фото 4). После осмотра яичников и регистрации числа овуляций (путем подсчета количества желтых тел) (фото 5) осуществляют вымывание эмбрионов.

В качестве промывной жидкости используют фосфатно-солевой буферный раствор Дюльбекко (ФБР), либо HEPES-KSOM (если клетки предназначены для трансгенеза).

Для вымывания эмбрионов используют полистироловые катетеры. Хирург вводит катетер в яйцевод через его воронку и фиксирует пальцами (фото 6). В это время ассистент стилетом прокалывает стенку соответствующего рога матки. Прокол делают по большой кривизне, ближе к яйцеводу, с учетом места локализации эмбрионов (фото 7). Далее ассистент вводит тупую

Фото 8. Система для промывание яйцевода	Фото 9.Извлечение эмбрионов в пробирку

иглу системы для вымывания эмбрионов (фото 8) в прокол, одновременно пальцами другой руки пережимает полость рога за проколом, предотвращая поступление промывной жидкости в остальную часть матки. Шприцом системы накачивают промывную жидкость, так, чтобы через верхушку рога она посту

пала в яйцевод. Промывную жидкость с эмбрионами собирают со стороны яйцевода в пластиковые пробирки (фото 9).

После промывания матку вправляли в брюшную полость, рану зашивают послойно (фото10-12).

Фото 10. Обвивной шов брюшины и апоневроза	Фото 11. Присыпка раны антибиотиками	Фото12. Кожный шов

Пересадка эмбрионов козам-реципиентам.

Пересадку эмбрионов реципиентам можно осуществлять двумя способами: нехирургическм (посредством лапароскопии с использованием комплекта эндоскопического оборудования) либо хирургическим (лапаротомия).

При пересадке эмбрионов оперативным путем лапаротомией извлекают матку и отыскивают яичники. Необходимо убедиться, что у реципиента действительно произошла овуляция, об этом судят по наличию желтого тела. Далее, вблизи яичника отыскивают воронку яйцевода. Через воронку в ампулярную часть яйцевода осторожно вводят катетер и фиксируют его пальцами. Через катетер под слабым давлением (шприцом без иглы, либо специальной канюлей) вводят эмбрионы. В каждый рог вводят 1-2 эмбриона.

При трансплантации эмбрионов указанным способом возникновение беременности, завершающейся родами, составляет 48,6-59,3%.