Медицина

УДК 579:618.15-07

Лещинская М.А.

Луганский государственный медицинский университет

Влияние супернатантов культур грибов рода CANDIDA на перекисное окисление липидов в эпителиоцитах влагалища

Введение. Воспалительные заболевания половых органов занимают ведущее место в структуре гинекологической заболеваемости. Наибольший риск для здоровья имеют воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ): эндо- и миометрия, маточных труб, яичников, тазовой брюшины и клетчатки [3]. ВЗОМТ – это во многих случаях причина хронических тазовых болей, нарушения репродуктивной функции, осложнений беременности [4]. В 20-25% случаев клинической формой ВЗОМТ является вульвовагинальный кандидоз. Кандидозный вульвовагинит (КВВ) обнаруживается у 10-17% небеременных женщин, у 30-40% беременных женщин, а перед родами – в 45-50% случаев [1, 4]. На фоне КВВ нередки гестационные осложнения, осложнения в родах и послеродовом периоде, возрастает риск анте- и интранатального инфицирования плода. В сочетании с бактериальным вагинозом КВВ в мире диагностируют у 1 млрд. пациенток в год [2].

Основными клетками-мишенями при КВВ являются эпителиоциты влагалища, на поверхности которых происходит адгезия и размножение грибов рода Candida, а также развиваются все иммунные и биохимические реакции, оказывающие прямое воздействие на эпителиоциты влагалища и влияющие на их метаболический и функциональный потенциал. Основными факторами вирулентности грибов рода Candida являются афлотоксины и микоэстрогены, выделяющиеся в окружающую среду и непосредственно воздействующие на эпителиоциты влагалища [5].

Известно, что перекисное окисление липидов (ПОЛ) играет существенную роль в воспалительном процессе. ПОЛ активируется под влиянием гипоксии и интоксикации, и регулируется системой антиоксидантной защиты (АОЗ) [3]. Влияние супернатантов грибов рода Candida на ПОЛ в эпителиоцитах влагалища ранее не изучалось.

Работа является фрагментом комплексной плановой научной работы кафедр патофизиологии и микробиологии Государственного заведения «Луганский государственный медицинский университет» № 01110U007081 «Иммуносупрессивный и апоптогенный потенциал условно-патогенных бактерий и грибов».

Цель исследования: Определить влияние супернатантов культур грибов рода Candida на уровень ПОЛ в эпителиоцитах влагалища.

Материалы и методы исследования. Источником клинических штаммов грибов рода Candida служили 107 женщин, страдающих КВВ, находящихся на амбулаторном лечении в поликлинике Луганской областной клинической больницы в 2010-2011 гг. Возраст пациенток составлял от 27 до 39 лет (средний возраст – 33,5±1,7 лет).

Группой референтной нормы и источником эпителиоцитов влагалища явились 95 практически здоровых женщин в возрасте от 23 до 36 лет (средний возраст – 29,4±1,5 года), которые проходили плановые медицинские осмотры в той же поликлинике на протяжении 2010-2013 гг.

В результате микробиологического исследования от 107 женщин, больных КВВ, был изолирован 131 штамм грибов рода Candida. При этом у 85 пациенток (79,4%) имела место моно-инфекция, вызванная только одним видом грибов рода Candida, а именно исключительно C. albicans. У 22 пациенток (20,6%) КВВ протекал как микст-инфекция, в развитии которой принимали участие такие виды грибов рода Candida, как C. albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. glabrata и C. kruzei.

С целью более углубленной характеристики влияния грибов рода Candida – возбудителей КВВ, на уровень ПОЛ в эпителиоцитах влагалища был проведён их анализ.

Результаты исследования in vitro влияния супернатантов грибов рода Candida на уровень ПОЛ в нативных культурах эпителиоцитов влагалища практически здоровых женщин представлены в таблице.

Таблица 1. Влияние in vitro супернатантов культур грибов рода Candida на ПОЛ в эпителиоцитах влагалища здоровых женщин (М±m)

Показатель	Диеновые конъюгаты (мкмоль/л)	Малоновый диальдегид (мкмоль/л)
Референтная норма (n=49)	0,55±0,02	0,69±0,03
Супернатанты C. albicans (n=34)	0,76±0,03***	0,93±0,04***
Супернатанты C. tropicalis (n=33)	0,68±0,03***	0,84±0,03***
Супернатанты C. pseudotropicalis (n=33)	0,65±0,025**	0,82±0,03**
Супернатанты C. glabrata (n=32)	0,63±0,025*	0,78±0,03*
Супернатанты C. cruzei (n=31)	0,61±0,025	0,75±0,03

Примечание: * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 по отношению к референтной норме.

Как следует из данных, приведенных в таблице, взаимодействие in vitro супернатантов грибов рода Candida с эпителиоцитами влагалища, вызывает в указанных клетках активацию процессов ПОЛ, что проявляется в увеличении внутриклеточных концентраций, как промежуточных – диеновых конъюгат (ДК), так и конечных – малонового диальдегида (МДА), продуктов пероксидации липидов. При этом степень активности ПОЛ в эпителиоцитах влагалища была разной, в зависимости от видовой принадлежности использованных супернатантов. Наибольшие концентрации метаболитов ПОЛ в эпителиоцитах влагалища регистрировались при воздействии на указанные клетки-мишени супернатантов грибов C. albicans. Прооксидантный потенциал супернатантов снижался у других видов грибов рода Candida и был наименьшим у C. cruzei.

Более детальный анализ результатов исследования, представленных в таблице, позволил отметить следующее.

Результаты исследования. Взаимодействие супернатантов культур C. albicans с эпителиоцитами влагалища вызывало в них увеличение концентрации ДК в 1,38 раза (р<0,001), по сравнению с референтной нормой (0,76±0,03 и 0,55±0,02 мкмоль/л, соответственно). Средний уровень МДА в эпителиоцитах влагалища при этом составил 0,93±0,04 мкмоль/л, против 0,69±0,03 мкмоль/л для референтной нормы (степень увеличения – 1,35 раза, р<0,001). Приведенные показатели содержания ДК и МДА в эпителиоцитах влагалища, контактировавших in vitro с супернатантами C. albicans оказались наибольшими, по сравнению с аналогичными показателями, зарегистрированными в опытах с супернатантами других видов грибов рода Candida.

Так, внутриклеточная концентрация ДК и МДА в эпителиоцитах влагалища, контактировавших с супернатантами C. tropicalis, составляя в среднем 0,68±0,03 мкмоль/л для ДК и 0,84±0,03 мкмоль/л для МДА, оказались ниже аналогичных показателей в опытах с супернатантами C. albicans в 1,12 и в 1,11 раза ниже, соответственно (р<0,05 в обоих сравнениях). По отношению к референтной норме приведенные показатели были соответственно в 1,24 и в 1,22 раза выше (в обоих сравнениях р<0,001).

Прооксидантный потенциал супернатантов C. pseudotropicalis оказался ещё более низким, по сравнению с таковым для супернатантов C. tropicalis. А именно, под влиянием супернатантов C. pseudotropicalis внутриклеточная концентрация ДК в эпителиоцитах влагалища составила в среднем 0,65±0,025 мкмоль/л, против 0,76±0,03 мкмоль/л в опытах с супернатантами C. albicans и против 0,68±0,03 мкмоль/л в опытах с супернатантами C. tropicalis (степень различия – 1,17 и 1,05 раза, соответственно; р<0,05 и р>0,05). По отношению к референтной норме (0,55±0,02 мкмоль/л) зарегистрированный уровень ДК в опытах с супернатантами C. pseudotropicalis был выше в 1,19 раза (р<0,01).

В тоже время, под влиянием супернатантов C. pseudotropicalis внутриклеточная концентрация МДА в эпителиоцитах влагалища, составляя в среднем 0,82±0,03 мкмоль/л, оказалась выше показателя референтной нормы в 1,19 раза, но была в 1,13 раза ниже аналогичного показателя в опытах с супернатантами C. albicans (р<0,01 и р<0,05, соответственно). По сравнению с уровнем МДА в эпителиоцитах влагалища, подвергавшихся воздействию супернатантов C. tropicalis, уровень МДА в опытах с супернатантами C. pseudotropicalis был на 2,4% ниже, что статистически достоверным не являлось.

В присутствии супернатантов культур C. glabrata внутриклеточная концентрация ДК составила в среднем 0,63±0,025 мкмоль/л, оказавшись тем самым в 1,15 раза выше показателя референтной нормы (р<0,05). Указанный уровень ДК оказался также ниже, чем в подобных опытах с супернатантами C. albicans, C. tropicalis и C. pseudotropicalis в 1,21 раза, в 1,08 и в 1,05 раза, соответственно (р<0,05, р>0,05 и р>0,05).

В тоже время, внутриклеточная концентрация МДА в эпителиоцитах влагалища в конце опыта с супернатантами C. glabrata составила в среднем 0,78±0,03 мкмоль/л, против 0,69±0,03 мкмоль/л для референтной нормы (степень увеличения – 1,13 раза, р<0,05). Зарегистрированный уровень МДА был также в 1,19 раза ниже, чем это имело место с супернатантами C. albicans, а также в 1,08 и в 1,05 раза ниже, чем в опыте с супернатантами C. tropicalis и C. pseudotropicalis, соответственно (в последних двух сопоставлениях различия статистически недостоверны).

Наименьший прооксидантный потенциал демонстрировали супернатанты культур C. cruzei. Под их влиянием внутриклеточная концентрация ДК, составляя в среднем 0,61±0,025 мкмоль/л, недостоверно (в 1,11 раза) превышала показатель референтной нормы, а также на 3-25,6% была ниже аналогичных показателей, зарегистрированных в опытах с супернатантами других видов грибов рода Candida.

Внутриклеточное содержание МДА в эпителиоцитах влагалища под воздействием супернатантов культур C. cruzei увеличивалось, относительно референтной нормы в 1,09 раза, составляя в среднем 0,75±0,03 мкмоль/л, что статистически достоверным не являлось. Зарегистрированный уровень МДА был также на 4-24% ниже подобных показателей, отмеченных в опытах с супернатантами C. glabrata, C. pseudotropicalis, C. tropicalis и C. albicans.

Таким образом, результаты исследования, приведенные выше, позволяют утверждать, что супернатанты культур грибов рода Candida обладают выраженным прооксидантным действием при взаимодействии in vitro с культурами эпителиоцитов влагалища, полученных от здоровых женщин. Прооксидантное действие супернатантов грибов рода Candida выражается в усилении процессов ПОЛ, что ведёт к увеличению внутриклеточных концентраций, как промежуточных – ДК, так и конечных продуктов – МДА, пероксидации липидов. Наибольший прооксидантный потенциал присущ супернатантам культур C. albicans, наименьший - супернатантам культур C. cruzei.

В целом, результаты исследования, приведенные в настоящей статье, доказывают, что супернатанты грибов рода Candida обладают выраженной биологической активностью, способной изменять интимные биохимические процессы в эпителиоцитах влагалища, что, по всей вероятности, составляет существенное звено в патогенезе вульвовагинита, вызванного условно-патогенными грибами рода Candida.

Выводы.

1. Супернатанты культур грибов рода Candida обладают выраженным прооксидантным действием при взаимодействии in vitro с культурами эпителиоцитов влагалища. Прооксидантное действие супернатантов грибов рода Candida выражается в усилении процессов ПОЛ, что ведёт к увеличению внутриклеточных концентраций, как промежуточных – ДК, так и конечных продуктов – МДА, пероксидации липидов.

2. Супернатанты грибов рода Candida обладают выраженной биологической активностью, способной изменять интимные биохимические процессы в эпителиоцитах влагалища, что составляет существенное звено в патогенезе вульвовагинита, вызванного условно-патогенными грибами рода Candida.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Байрамова Г.Р. Кандидозная инфекция. Полиеновые антибиотики в лечении вагинального кандидоза / Байрамова Г.Р. – Гинекология. № 6. том 3. 2001. С. 212–14.

2. Бойчук А.В. Мікст-інфекція в акушерстві та гінекології та сучасні підходи до її лікування / Бойчук А.В. – Здоровье женщины. – 2006. – № 3 (27). – С. 43-46.

3. Жилка Н.Я. Репродуктивне здоров’я в Україні / Жилка Н.Я. – Нова медицина. – 2005. – № 2 (19). – С. 4-5.

4 Прилепская В.Н. Клиника, диагностика и лечение вульвовагинального кандидоза (клиническая лекция) / Прилепская В.Н. – Гинекология. № 6. том 3. 2001. С. 201–5.

5. Bingham J.S. What to do with the patient with recurrent vulvovaginal candidiasis / Bingham J.S. – Sex. Transm. Inf. 1999. 75. 225–7.