Медицина.Клиническая медицина

ВитютьневаЛ.М .,Витренко А.П.,Сахибназарова В.М.

СУЧАСНІМЕТОДИ ЛАБОРАТОРНОІ ДIАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЬОЗУ

З 1995 року в Україні проголошена епідемія туберкульозу. Захворюваність на туберкульоз стрімко збільшувалась і перевищилаепідемічний поріг – 50 випадків на 100 тис. населення. З 1995 року рівеньзахворюваності на туберкульоз збільшився майже удвічі і в 2005 році, колиреєстрували найвищий рівень цього показника, становив – 84,1 випадків на 100тис. населення. В результаті реалізації Загальнодержавної програми протидіїзахворюванню на туберкульоз на 2007 – 2011 роки в Україні досягли суттєвихпозитивних зрушень щодо епідеміологічної ситуації з туберкульозу.З 2006 року відзначається повільне зменшення показників захворюваностітасмертності. У 2011 році захворюваність на туберкульоз становила–67,2випадків на 100 тис. населення, смертність від туберкульозу – 15,3 на 100тис.населення.

Основним методом лабораторноі діагностики туберкульозу єбактеріоскопічний метод, згідно якому необхідно забезпечити 2-х разовий збір і транспортуваннямокротиння в лабораторію з мікробіологічної діагностики ТБ І рівня (пунктмікроскопії мокротиння) для дослідження на КСБ методом мікроскопії мазка (уразі наявності кашлю). Пацієнту, який має результати рентгенівського дослідження грудної клітки з підозрою на ТБ, теж треба провести збір мокротиння для мікробіологічногодослідження.

Припрямійбактеріоскопії препарат забарвлюють за методом Циля - Нільсена. Для цьогоготують тонкий мазок на предметномусклі, далівисушуютьйого при кімнатнійтемпературі і фіксують над полум’ямспиртівки. На фіксований препарат кладутьсмужкуфільтрувальногопаперу, яку заливаютькарболовим фуксином Циля. Мазок нагрівають над полум’ям до появи пари (2-3 рази). Далізнімаютьфільтрувальнийпапір, препарат промиваютьдистильованою водою, опускають у розчин солянокислого спирту, або 5%-й розчинсірчаноїкислоти на 3 хв. При цьомувсібактерії і морфологічніелементихаркотиння, кріммікобактерійтуберкульозу, знебарвлюються. Післяцього препарат ретельнопромивають водою і забарвлюють 0,51%м розчином метиленового синьогопротягом 1-2 хв. Далі препарат промивають водою, висушують на повітрі . Забарвленіпрепаратимікроскопують за імерсійноюсистемою.МБТзабарвлюються у червоний, а навколишній фон і некислотостійкімікроорганізми - у синійколір.Длявиявленнябактеріоскопічним методом МБТ у препаратінеобхідно, щоб у 1 мл харкотиннямістилося не менше 100 000 мікробнихтіл. При меншійкількостімікобактерійдослідженняможедатинеправдивийнегативний результат.

Виявленнябактеріоскопічним методом МБТ збільшується на 14-20 % при застосуваннілюмінесцентноїмікроскопії. Для забарвлення препарату використовуютьфлюорохроми -органічнібарвники, щофлюоресціюють при освітленніультрафіолетовими, фіолетовимиабосинімипроменями. Такими барвниками є аурамін, родамін С. Мазок харкотиннязабарвлюютьсумішшю 0,05 г аураміну і 1000 мл дистильованої води, злегкапідігрівають, промивають водою, знебарвлюють 3%м хлороводневокислим спиртом, зновупромивають і наносятьметиленовийсиній на 1-2 хв. Препарат досліджують за допомогоюлюмінесцентногомікроскопа. МБТ світятьсязолотистожовтимкольором на темному фоні.

Серед нових методів виявлення МБТ або їх антигенних структур у патологічному матеріалі заслуговують на увагу нові високочутливі методи - молекулярногенетичні методи та імуноферментнийаналіз.Середмолекулярногенетичнихметодів для діагностики туберкульозу найчастше застосовується метод ДНК-зондування та полімеразноланцюгової реакції (ПЛР). Ціметодибазуються на принципікомплементарностінуклеотидних основ у побудовідвоспіральноїмолекули ДНК. При проведенніДНКзондування у випадкунаявності в досліджуванійпробіспецифічноїділянки ДНК мікобактерійутворюєтьсягібрид (дволанцюговий фрагмент) досліджуваної ДНК і ДНКзонду.

Воснові ПЛР лежитьбагаторазовезбільшення фрагмента ДНК (ампліфікація). Для ампліфікації за допомогою ПЛР використовують два олігонуклеотидніпраймери (затравки), якіфланкуютьспецифічнуділянку геному мікобактеріальноїклітини. Процесампліфікаціїполягає в циклах температурноїденатурації ДНК, щоповторюються, відпалупраймерів з комплементарнимипослідовностями і наступнійдобудовіцьоголанцюга ДНК - полімеразою. Збільшений в 10-6 разів фрагмент ДНК виявляєтьсяелектрофорезом в агарозномугелі. Зніманнярезультатіввідбуваєтьсяпід пластинами трансілюмінатора в ультрафіолетовомусвтлі.

ДНК-зондування і ПЛР дозволяють виявити мікобактерії в діагностичному матеріалі протягом 2-4 діб з максимально високою чутливістю , а також ідентифікувати тип мікобактерій.Актуальність методу ПЛР у діагностиці туберкульозу полягає в його ефективності стосовно збудників з високою антигенною мінливістю (у тому числі L-форм). Їхвиявленняпотребуєтривалогокультивуванняабоскладнихживильнихсередовищ. Крімцього, методи ПЛР перспективні при проведенніміжвидової та штамовоїідентифікаціїмікобактерій для диференціаціїтуберкульозних та нетуберкульознихмікобактерій (збудниківмікобактеріозів), для експресвиявленнялікарськоїстійкостімікобактерій.

Лiтература

1. Наказ Міністерстваохорониздоров'яУкраiни

№ 620 2104р.