Ренева Л.В.¹, Д.м.н. Волкова Л.В.²

¹- ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России в г. Пермь «Пермское НПО «Биомед», ²- Пермский национальный исследовательский политехнический университет, Россия

Оценка антителообразования у активных доноров, иммунизированных столбнячным анатоксином

В настоящее время потребность отечественного фармацевтического рынка и практического здравоохранения в препаратах специфических иммуноглобулинов столь высока, что не может быть удовлетворена только за счет заготовки иммунной плазмы путем выявления доноров с «естественно» высоким содержанием антибактериальных и противовирусных антител [3]. Проведение иммунизации населения Российской Федерации в соответствии с календарем профилактических прививок, обеспечивая образование специфического, протективного иммунитета пациента, не решает в полной мере вопроса обеспечения сырьем для производства специфических иммуноглобулинов из плазмы таких доноров. Встает вопрос необходимости проведения иммунизации доноров с целью получения иммуноглобулинов направленного действия [1,2].

Целью настоящей работы явилось изучение специфической активности антител, длительности и напряженности поствакцинального иммунитета к анатоксину столбняка используемого для проведения иммунизации доноров. Было проведено обследование 9459 доноров плазмы для фракционирования за период с 2008-2011 гг. (возраст доноров находился в диапазоне от 18 до 60 лет), включало определение в сыворотке крови доноров, АТ к столбнячному токсину. При наличии известного прививочного анамнеза, иммунизаций вакцинами, в состав которых входил столбнячный компонент (АДС; АДС-М, АС 20 ЕС) более пяти лет назад, обнаружении в сыворотке крови доноров АТ к столбнячному токсину менее 4 ЕС/мл, проводили иммунизацию доноров АС для доноров, которая рассматривалась как ревакцинация. Лиц, отобранных для ревакцинации, подвергали углубленному комплексному лабораторному исследованию, в соответствии с приказами МЗ РФ. По результатам предвакцинального скрининга для проведения ревакцинации АС отобрали 3838 доноров в возрасте от 26 до 56 лет, из них 48% составляли мужчины и 52% женщины, доноров крови 64%, доноров плазмы 36%. Для иммунизации доноров использовали Анатоксин столбнячный очищенный адсорбированный жидкий для доноров (АС-анатоксин для доноров) в 1 дозе (1,0 мл) содержащий 40 ЕС столбнячного анатоксина. Вакцину вводили однократно. Интервал между иммунизациями составил не менее пяти лет (инструкция по применению вакцины № 01-11/59-06 от 14.04.2006 г.).

Для характеристики напряженности гуморального иммунитета были выбраны следующие диапазоны концентраций АТ: низкий уровень –от 0,1-3,5 МЕ/мл; средний уровень – от 3,5 до 5,0 МЕ/мл; высокий уровень – 5,0 МЕ/мл и более. Исходный фон АТ у доноров, отобранных для ревакцинации, составил 1,12+0,08 МЕ/мл, табл. 1.

Таблица 1

Динамика изменения уровня противостолбнячных антител

у иммунизированных доноров.

Время исследования, мес.	Уровень антител (МЕ/мл)
Исходный фон	1,12+0,08
1 месяц	4,90+0,04***
3 месяца	4,89+0,04***
6 месяцев	4,61+0,08***
1 год	4,02+0,12***
1,5 года	3,74+0,14***
2,0 года	3,54+0,15***
2,5 года	3,22+0,17***
3,0 года	3,04+0,21***
3,5 года	2,99+0,29***
4,0 года	2,34+0,39**

Примечание. ***- p<0,001, **- p<0,01 к исходному фону по критерию Стьюдента (с поправкой Бонферрони, учитывающей множественные сравнения).

Установлено, что в группе доноров, получивших ревакцинацию АС через 1 месяц после иммунизации, среднеарифметрическая концентрация антител составила 4,90+0,04 МЕ/мл. Отмечали среднегодовое снижений титра АТ в 1,17 раза. Через 4 года после проведенной вакцинации АС титр АТ у доноров снизился более чем в 2 раза. При оценке уровня сероконверсии среди доноров в зависимости от пола и возраста отмечали, что уровень сероконверсии составил 74,49%, причем среди мужчин 57,84%, а среди женщин. В общей структуре иммунизированных, наибольший удельный вес, 95,0% составили лица с высокими (5,0 МЕ/мл и более) концентрациями титра антител. В последующем отмечали изменение структуры в группе иммунизированных, число ревакцинированных лиц с наличием высоких уровней АТ снижалось, а с наличием низкого уровня АТ, наоборот, повышалось, что обусловлено как особенностями иммунной системы индивидиума, так и продолжительными донациями плазмы [1], табл. 2.

Таблица 2

Динамика уровня противостолбнячных антител у иммунизированных доноров.

Срок исследования	Уровень противостолбнячных антител, %
	Высокий	Средний	Низкий
Исходный фон	0,0	2,86	97,14
1 месяц	95,00	1,43	3,57
3 месяца	93,13	3,82	3,05
6 месяцев	77,42	11,29	11,29
1 год	52,80	18,40	28,80
1,5 года	44,64	17,86	37,50
2,0 года	33,00	27,00	40,00
2,5 года	28,77	16,44	54,79
3,0 года	23,53	17,65	58,82
3,5 года	22,22	14,82	62,96
4,0 года	7,14	14,29	78,57

При сравнении среднегеометрических концентраций АТ отмечено статистически значимое снижение концентраций поствакцинальных антител (p<0,001) через 1 год после проведенной иммунизации (рис. 1).

Рис. 1. Динамика уровня противостолбнячных антител у иммунизированных доноров (***- p<0,001 к 1 месяцу после вакцинации по критерию Стьюдента)

При изучении влияния пола и возраста иммунизированных доноров на выработку АТ установлено, что не смотря на более низкий исходный фон титра АТ у женщин 0,74±0,1 МЕ/мл, против 1,23±0,09 МЕ/мл у мужчин, женщины более активно отвечают на иммунизацию и у них наблюдается менее выраженное снижение титра АТ в течение времени. Динамика уровня АТ в зависимости от пола представлена в табл. 3

Таблица 3

Динамика уровня противостолбнячных антител (МЕ/мл) у иммунизированных доноров в зависимости от пола

Срок исследования	Мужчины	Женщины
Исходный фон	1,23+0,09	0,74+0,11**
1 месяц	4,88+0,05	4,97+0,03
3 месяца	4,90+0,05	4,88+0,07
6 месяцев	4,63+0,09	4,58+0,14
1 год	3,97+0,13	4,23+0,21
1,5 года	3,65+0,16	4,08+0,25
2,0 года	3,40+0,17	4,03+0,28
2,5 года	3,17+0,19	3,53+0,46

**- р<0,01 по критерию Стьюденту по сравнению с группой мужчин. % сероконверсии у мужчин – 59,26, у женщин – 90,63.

При оценке влияния возраста иммунизированных доноров на выработку АТ показано, что значимых различий у мужчин и женщин одной возрастной группы не выявлено, поэтому мужчины и женщины рассмотрены в месте. Уровень сероконверсии для группы 20-40 лет составил – 70,21%, 41-50 лет – 65,15%, 51-60 лет – 62,96%, что свидетельствует о более выраженном иммунном ответе на иммунизацию у молодых доноров в возрасте до 40 лет (табл.4).

Таблица 4

Динамика противостолбнячных антител (МЕ/мл) у иммунизированных доноров в зависимости от возраста

Срок исследования	Возраст, лет
	21-40 (1)	41-50 (2)	51-60 (3)
Исходный фон	1,14+0,15	1,10+0,11	1,13+0,18
1 месяц	4,89+0,08	4,87+0,06	5,0+0,02
3 месяца	4,78+0,12	4,96+0,02	4,92+0,08
6 месяцев	4,64+0,15	4,62+0,11	4,54+0,19
1 год	4,27+0,19	3,99+0,16	3,73+0,28
1,5 года	4,17+0,21	3,67+0,19	3,27+0,34
2,0 года	3,53+0,26	3,53+0,20	3,59+0,36
2,5 года	3,04+0,41	3,40+0,22	3,20+0,50
3,0 года	2,64+0,51	3,12+0,27	2,96+0,38

Анализ влияния групповой и резус принадлежности иммунизированных доноров на выработку АТ показал, что наименее выраженный иммунный ответ через 1 месяц после иммунизации наблюдался у доноров женщин второй группы крови и мужчин четвертой группы крови. Наибольший иммунный ответ на вакцинацию обнаружен у женщин первой и третьей групп крови и мужчин первой и второй групп крови. При изучении динамики изменения титра АТ в зависимости от резус принадлежности доноров достоверных различий не было выявлено. Сравнительный анализ влияния групп крови на уровень выработки АТ представлен в табл. 5.

Динамика сохранения высоких титров АТ (выше 5,0 МЕ/мл) у иммунизированных доноров в зависимости от группы крови (%)

Срок наблюдения (месяц).	Группа крови
	I	II	III	IV
Исходный фон	0,0	0,0	0,0	0,0
1	95,24	97,37	92,00	92,86
3	94,92	94,29	87,50	92,31
6	76,36	71,43	81,82	91,67
12	49,12	52,78	61,90	54,55
18	47,92	40,63	42,86	45,45
24	34,09	26,67	38,89	37,50
36	33,24	22,30	32,86	31,15

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что уровень сероконверсии после проведенной иммунизации АС для доноров, составил среди мужчин 57,84%, среди женщин 91,13%, что свидетельствует о высокой иммуногенности АС используемого при иммунизации доноров. Наибольший иммунный ответ на вакцинацию дали женщины первой и третьей групп крови и мужчины первой и второй групп крови в возрасте от 20 до 40 лет. Только 4,14% ревакцинированных АС анатоксином доноров сохранили высокий титр специфических антител через четыре года после проведенной иммунизации. Литература:

1. Ионова А.И. Влияние аппаратного плазмацитафереза на состояние иммунной системы и некоторые другие показатели гомеостаза доноров: Автореф. дис. канд. биол. наук. Л., 1991. - 19 с.

2. Ренева Л.В., Волкова Л.В., Казьянин А.В. Посвакцинальный иммунитета к гепатиту В у доноров плазмы // Вестн. Уральской медицинской академической науки. – 2013. – № 1 (43). – С.73-76.

3. Русанов В.М., Левин И. Лечебные препараты крови. - Москва: ИД Медпрактика, 2004. 284с.