Медицина. Экспериментальная и клиническая фармакология

Заико М.В., к.б.н. Козин С.В.

ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России

Изучение влияния Спленактива на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками крови с помощью метода иммуноферментного анализа

Одним из путей решения проблемы регуляции иммунных процессов является использование фармакологических препаратов из селезенки. С этой целью был разработан новый оригинальный препарат под рабочим названием Спленактив (СА) на основе гомогената селезенки крупного рогатого. При изучении иммунотропных свойств СА проводилась, в частности, оценка его влияния на синтез цитокинов иммунокомпетентными клетками крови в модельной системе in vitro [4].

Цитокины представляют собой группу полипептидных медиаторов, участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма [3]. В настоящее время известно более 200 веществ, относящихся к семейству цитокинов. К ним относят интерфероны, колониестимулирующие факторы, хемокины, трансформирующие ростовые факторы, фактор некроза опухоли и некоторые другие. Цитокины определяют выживаемость клеток, стимуляцию или ингибицию их роста, дифференцировку, функциональную активацию и апоптоз клеток. Способность регулировать перечисленные функции обусловлена тем, что после взаимодействия цитокинов с комплементарными рецепторами на поверхности клеток, сигнал через элементы внутриклеточной трансдукции передается в ядро, где активируются соответствующие гены. Белки, продукты активированных цитокинами генов, экспрессируются клетками и регулируют перечисленные выше процессы [3].

В настоящее время разработано множество различных методов определения цитокинов. Цитокины можно оценивать по специфической биологической активности в различных биологических средах, определять их количественно с помощью ряда методов иммуноанализа. Также можно изучать внутриклеточное содержание цитокинов и продукцию в тканях методами проточной цитофлюориметрии, вестернблотинга и иммуногистохимии in situ. Каждый метод имеет свои недостатки и свои достоинства, свою разрешающую способность и точность определения [2].

Наиболее широкое распространение для определения уровня цитокинов в различных биологических жидкостях в настоящее время получили твердофазные иммуноферментные методы. Их преимуществами является быстрота и относительная простота в исполнении. Порог чувствительности для таких тест-систем достигает 0,5 пкг/мл [1].

При изучении влияния Спленактива на продукцию цитокинов в модельной системе in vitro нами была использована методика определения синтеза цитокинов клетками периферической крови в спонтанной культуре [4]. Клеточную взвесь инкубировали с раствором препарата Спленактив в концентрациях 0,7 мг/мл и 3,2 мг/мл в течение 24 часов. После чего надосадках опытных и контрольных культур определяли концентрации провоспалительных интерлейкин-1b (ИЛ-1b) и фактор некроза опухоли a (ФНОa), противовоспалительных антагонист рецептора интерлейкина 1 (ИЛ-1Ra) и интерлейкин-10 (ИЛ-10) и регуляторного интерферон g (ИФНg) цитокинов методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью тест-систем ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург) в соответствии с рекомендациями производителя. Результаты фиксировались по оптической плотности спектрофотометрическим методом с длиной волны 450 нм. Расчет количества цитокинов проводился по калибровочной кривой и выражался в пг/мл.

Результаты исследования содержания цитокинов в культуре крови представлены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние Спленактива в концентрациях 0,7 мг/мл и 3,2 мг/мл на продукцию цитокинов клетками крови здоровых доноров, пг/мл (Me[Q1-Q3]).

Цитокины, пг/мл	Спонтанная продукция (контроль)	Индуцированная продукция		Сыворотка крови
		Спленактив
		C = 0,7 мг/мл	C = 3,2 мг/мл
Провоспалительные цитокины
ИЛ1b	81 [47-127]	98 [69-149]^*	276 [179-422]^*;**	23-37
ФНОa	136 [70-151]	221 [115-333]^*	337 [210-441]^*^;**	26-40
Противовоспалительные цитокины
ИЛ-10	76 [44-116]	67 [45-90]	89 [63-109]	37-50
ИЛ1RA	218 [155-275]	252 [170-360]	344 [220-442]^*	210-260
Регуляторные цитокин
ИФН g	150 [123-179]	198 [165-225]^*	177 [169-191]^*	82-100

Примечание: Значимость различий по критериям Вилконсона Манна-Уитни (р<0,05): * - значимые отличия по отношению к значению в контроле; ** - значимые отличия по отношению к значению Спленактива в концентрации 0,7 мг/мл.

Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод, что Спленактив оказывал выраженное стимулирующее влияние на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками крови. Это с высокой степенью вероятности свидетельствует о его регуляторном действии на иммунную систему. Полученные результаты говорят о перспективности дальнейшего изучения иммунотропных свойств препарата Спленактив.

Литература:

1. Демьянов А.В., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Диагностическая ценность исследований уровней цитокинов в клинической практике // Цитокины и воспаление. 2003. Т. 2, № 3. С. 20-33.

2. Сенников, С.В. Методы определения цитокинов / С.В. Сенников, А.Н. Силков // Цитокины и воспаление. – 2005. – Т. 4, №1. – С. 22-27.

3. Симбирцев А.С. Цитокины — новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление, 2002 - Т.1, №1,. - С. 9-17.

4. Заико М.В. Влияние органопрепарата Спленактив на продукцию цитокинов клетками крови // Сборник всеукраинской науч-практич. конф. «Современные аспекты медицины и фармации-2014». Запорожье. 2014. С.17.