Меньшикова Н.С., Кублинский К.С., Ткачёв В.Н., Агаркова Т.А., Евтушенко И.Д., Новицкий В.В., Наследникова И.О.

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Иммуногенечтические аспекты генитального эндометриоза: роль аллельного подлиморфизма гена

IL10

Введение. В структуре гинекологической патологии генитальный эндометриоз стабильно занимает третье место среди заболеваний женских половых органов после воспалительных процессов и миомы матки. При проведении диагностической лапароскопии по поводу болей и бесплодия эндометриоз выявляется в 20-90% случаев. В последние годы отмечается тенденция к возрастанию частоты генитального эндометриоза в среднем на 1-9%, в связи с чем высказывается мнение, что эндометриоз должен быть отнесён к числу болезней цивилизации.

Большинство исследователей называют эндометриоз «болезнью теорий», поскольку существуют многочисленные теории патогенеза, каждая из которых со своих позиций объясняет происхождение и развитие этого заболевания. Однако ни одна из гипотез полностью не объясняет многообразия форм проявлений и локализаций этой патологии. В патогенезе генитального эндометриоза важная роль принадлежит нарушениям иммунного гомеостаза. В последние годы большое внимание уделяется изучению роли цитокинов в механизмах формирования эндометриоидных очагов. Методами молекулярной медицины установлено, что гены цитокинов характеризуются наличием одного или нескольких структурных полиморфизмов, которые не приводят к значимым изменениям первичной структуры белка, и соответственно, очевидным патологическим последствиям, однако оказывают влияние на функциональную активность или уровень экспрессии кодируемых белков. Иммуногенетические маркеры могут быть выявлены задолго до клинической манифестации заболевания, что позволит сформировать группы риска, организовать их мониторинг, а в случае заболевания, прогнозировать характер течения и предложить индивидуально обоснованную терапию.

Цель исследования: провести анализ распределения аллельных вариантов и генотипов полиморфизма С-592A гена IL10 при генитальном эндометриозе.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В программу исследования были включены 240 пациенток репродуктивного возраста от 19 до 43 лет (средний возраст 30,6±1,2 года), которые были госпитализированы в гинекологическую клинику ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России в 2009-2012 гг. для выполнения лечебно-диагностической и оперативной лапароскопии и гистероскопии. Лапароскопию и гистероскопию выполняли по стандартной методике с использованием аппаратуры фирмы «KarlStorz» (Германия).

Основную группу составили 140 женщин с генитальным эндометриозом. Диагноз эндометриоза был поставлен в результате осмотра брюшины и органов малого таза на наличие эндометриоидных очагов в ходе эндоскопических методов исследования, с последующим гистологическим подтверждением. При поступлении в клинику пациентки предъявляли жалобы на бесплодие (средняя продолжительность 3,6±1,1 лет), которое у 98 пациенток было первичным, а у 42 женщины – вторичным. Кроме того, 68% пациенток данной группы предъявляли жалобы на болевой синдром, 74% – на дисменорею, 38% – на диспареунию, 36% – на нарушение менструального цикла по типу мено- и метроррагии. Наиболее часто, в 85% случаев, во время лапароскопии диагностировались малые формы эндометриоза, в то время как эндометриоидные кисты – в 64%, из них двусторонние в 30% случаев. Частота ретроцервикального эндометриоза не превышала 13%.

В группу сравнения вошли 100 женщин, у которых при проведении эндоскопического исследования был исключен генитальный эндометриоз. Показанием для вмешательства было бесплодие. Объем оперативного вмешательства для всех пациенток данной группы был одинаков и представлен диагностической лапароскопией и гистероскопией.

У всех женщин было получено добровольное информированное согласие на забор и использование крови для проведения исследований. Кровь для молекулярно-генетических методов исследования получали из кубитальной вены в стандартных условиях у всех пациенток утром в день операции. Стабилизированные образцы крови хранили при –70°С до момента исследования. Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфного участка С-592A гена IL10, локализованного в промоторном участке, проводили с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), в пробирках типа «Эппендорф» путём ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе при использовании амплификатора «Терцик МС2» («ДНК-технология», Россия). После проведения ПЦР 8 мкл амплификата разделяли в 2% агарозном геле, содержащем 0,5 мг/мл этидиум бромида, при напряжении 150 B в течение нескольких мин для последующей визуализации в ультрафиолетовом свете, подтверждающей наличие продукта амплификации. В качестве маркера размера ДНК использовали плазмиду pUC19, расщепленную рестриктазой MspI («Сибэнзим», Россия).

Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с эндометриозом сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах женщин, используя критерий χ² с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации разных генотипов и аллелей с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) с расчетом для него 95% доверительного интервала (CI).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Современная медицинская наука уделяет большое внимание вопросам своевременной диагностики заболевания и поиску новых этиопатогенетических критериев и терапевтических стратегий. Особый интерес представляет оценка генетического риска и возможной предрасположенности к развитию эндометриоза. Исследования последних лет доказывают, что подверженность заболеванию зависит от определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон. Поиск маркеров предрасположенности к эндометриозу среди аллелей генов цитокинов – новый, перспективный раздел исследований.

В ходе проведенного нами анализа распределения аллелей и генотипов полиморфизма С-592A гена IL10 среди женщин группы контроля было выявлено преобладание генотипов СС (35%) и CА (40%) над вариантом АА, который был выявлен у 25% обследованных. Среди пациенток с генитальным эндометриозом генотип СС промоторного региона С-592A гена IL10 встречался у 42% обследованных, вариант СА – у 47%, генотип АА – у 11%. Зарегистрированное у пациенток с эндометриозом статистически значимое увеличение частоты встречаемости генотипов СС и СА (χ²=1,76; р=0,05) промоторного региона С-592A гена IL10, по сравнению с аналогичными параметрами у женщин контрольной группы, указывало на положительную ассоциацию с эндометриозом (OR=2,36 и OR=1,31 соответственно). При этом аллель А (OR=0,54) и гомозиготный генотип АА (OR=0,38) полиморфизма С-592A гена IL10 обусловливали протективный эффект в отношении эндометриоза.

Наличие аллеля С полиморфизма С-592A гена IL10 в генотипе может обусловливать повышение продукции противовоспалительного IL-10, что сопровождается угнетением пролиферации Т-лимфоцитов и снижением уровня цитокинов Th1-пути. Это способствует росту и инвазии новых эндометриоидных гетеротопий.

Приведенные нами данные свидетельствуют о предрасположенности женщин с аллельным вариантом и генотипом гена IL10 к эндометриозу. Дальнейшее изучение полиморфизма генов иммунорегуляторных молекул в патогенезе генитального эндометриоза, наряду с достижениями современной геномики, представляется весьма перспективным, поскольку может позволить, с одной стороны, давать индивидуальный генетический прогноз относительно риска развития заболевания и тяжести его протекания, с другой стороны, подбирать специфическую терапию, включая персонифицированную иммунокоррекцию.

ВЫВОДЫ:

1. У пациенток с генитальным эндометриозом преобладают генотипы СС и СА полиморфизма С-592A гена IL10.

2. Подверженность генитальному эндометриозу положительно ассоциирована с генотипами СС и СА промоторного региона С-592A гена IL10.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Адамян Л.В., Кулаков В.И., Андреева Е.Н. Эндометриозы. – М.:Медицина, 2006. – 416с.

2. Айламазян Э.К., Потин В.В., Тарасова М.А. и др. Генитальный эндометриоз // Гинекология от пубертата до постменопаузы. – М.: МЕДпресс-информ, 2007.- С.284-302.

3. Дамиров М.М. Генитальный эндометриоз – болезнь активных и деловых женщин. Москва, Бином-Пресс, 2010. – 192с.

4. Ищенко А.И., Кудрина Е.А. Эндометриоз: диагностика и лечение. – М.:МИА, 2008. – 176с.

5. Козлов В.А., Сенников С.В.. Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты // – Новосибирск: Наука, 2004. – 324 с.

6. Симбирцев А.С., Громова А.Ю.. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления // Иммунология. – 2005. – №1. – С.67.

7. Allaire C. Endometriosis and infertility: a review // J. Reprod. Med. – 2006. – V.51.№3. – Р. 164-168.

8. Harada T., Iwabe T., Terakawa N. Role of cytokines in endometriosis // Fertil. Steril. – 2001. – V.76.№1. – Р. 1-10.

9. Iwabe T., Harada T., Terakawa N. Role of cytokines in endometriosis-associated infertility // Gynec. Obstet. Invest. – 2002. – V.53.№1. – Р. 19-25.

10. Koninckx P.R., Kennedy S.H., Barlow D.H. Pathogenesis of endometriosis: the role of peritoneal fluid // Gynecol. Obstet. Investing. 1999. Vol. 47. N1. – P.23-33