Медицина/7

Филиппов В.М., Полишко Т.Н., Кузнецова Л.В., Перерва И.В.

Украинская психиатрическая больница со строгим наблюдением

Кристаллографический метод исследования мочи

Специальные методы исследования больных, применяемые с диагностической целью в медицинской практике, часто технически трудно выполнимы и не исключают возможности осложнения. Это определяется необходимостью поиска новых малотравматических и достаточно информативных для практического здравоохранения методов обследования.

Весьма перспективными являются изучение, разработка и внедрение новых физико-химических методов, в частности кристаллографического метода исследования.

Методы качественного определения химических веществ по их кристаллографическим признакам используются в фармакологии и судебной медицине с 1962 г. В 1968 г. М.П.Кузмин и И.В.Галкин применили кристаллографический метод для определения изменений в пищевых продуктах. В медицинской практике кристаллографическое исследование крови было предложено (1964 г.) у больных с гипертрофией и карциномой простаты.

Кристаллографический метод был впервые использован В.Я.Неретиным и В.А.Кирьяковым в 1977 г. Для исследования спинномозговой жидкости больных с различными поражениями спинного и головного мозга. Однако при выращивании кристаллов они пользовались сложной вакуумной аппаратурой, неприемлемой в каждодневной лабораторной практике.

Предлагаемый нами метод технически прост и доступен для любых лабораторий. Он дает возможность кристаллографического исследования и других биологических субстратов.

Материалом для кристаллографического исследования могут служить спинномозговая жидкость, моча, мокрота, слюна, плевральная и асцитическая жидкости, кусочки опухоли.

Кристаллографический метод исследования рекомендуется для определения характера патологического процесса (опухолевый, воспалительный, аллергический), он достаточно чувствителен и является перспективным для оценки эффективности проводимого лечения.

Необходимая посуда, реактивы, оборудование

1. Термостат суховоздушный

2. Центрифуга

3. Штативы

4. Чашки /Петри

5. Воронки

6. Химические стеклянные стаканчики

7.Фарфоровая ступка с пестиком

8.Мерные (маркированные) пипетки и пробирки

9. Фильтры обеззоленные

10.Микроскоп

11.Хлорная медь

12.Спирт 96%

13.Очищенный и прокаленный речной песок.

Методика обработки исследуемого материала и выращивания кристаллов

Спинномозговую, плевральную жидкости, мочу предварительно центрифугируют при 100 об/мин в течение 10 мин. Для исследования берется надосадочная жидкость. Слюна не центрифугируется. К 2 мл исследуемого субстрата капельно при постоянном встряхивании добавляют 10 мл 2% спиртового раствора хлорной меди. Полученную смесь оставляют в стеклянном стаканчике в обычных условиях при комнатной температуре на 15 мин., затем пропускают ее через тонкопористый беззольный фильтр. Образовавшийся фильтрат переливают в чашку Петри и ставят в термостат. Выращивание кристаллов происходит в термостате при 37 С и постоянной влажности, создаваемой динамической системой в течение 5-6 часов. Для контроля в термостат параллельно ставят 10 мл чистого спиртового раствора хлорной меди в чашке Петри.

Для кристаллографического исследования опухолей используются спиртовые вытяжки из опухолевой и околоопухолевой ткани, измельчают, смешивают и затем растирают с речным песком (очищенным, вымытым и прокаленным) в соотношении 1:2. Затем добавляют 96% спирт в соотношении 1:10 и тщательно растирают. Полученную смесь оставляют в обычных условиях при комнатной температуре на 1,5 часа. Затем фильтруют через фильтровальную бумагу. 2 мл фильтрата используют для выращивания кристаллов

Образовавшиеся в чашках Петри кристаллы изучают макро- и микроскопически. Макроскопически отмечают количество центров кристаллизации и характер кристаллографического рисунка.

Микроскопически изучают структуру кристаллов и ее изменение.

Фотографирование производят через микроскоп с помощью фотонасадки при увеличении в 60 раз.

Кристаллографическое исследование мочи

Кристаллограмма мочи здорового человека характеризуется темными лучами цилиндрической формы, исходящими из центров кристаллизации, но более грубыми и широкими, чем в кристаллограмме спинномозговой жидкости. Количество центров кристаллизации насчитывало от 5 до 20.

У больных с различными аллергическими состояниями (крапивница, отек Квинке, поллиноз в стадии обострения) лучи кристаллов располагаются хаотично, часто перекрещиваются. На основных лучах параллельными рядами располагаются мелкие кристаллы в виде отростков: дендритные формы кристаллов.

Отмечено своеобразное строение кристаллограмм при острой (ОПН) и хронической (ХПН) почечной недостаточности.

У больных с ОПН количество центров кристаллизации колеблется от 3 до 50. Макроскопически у них отмечается преимущественно «паутинообразный» рисунок. Микроскопически кристаллографическая картина характеризуется кристаллами неправильной цилиндрической и игольной формы, собирающимися в центрах кристаллизации. Встречается «поломка» лучей. По мере проведения соответствующего патогенетического лечения количество центров кристаллизации в моче этих больных нормализуется и кристаллы постепенно приобретают правильную геометрическую форму.

У больных с ХПН при кристаллографическом исследовании мочи наблюдается значительное увеличение количества центров кристаллизации (от 300-400 до 1000). Макроскопически кристаллы с очень четкими контурами. Микроскопически они располагаются очень тесно по отношению друг к другу. Лучи кристаллов короткие, широкие, переплетающиеся между собой.

У больных с трансплантированной трупной почкой количество центров кристаллизации колеблется от 5 до 8. Микроскопически на фоне геометрически правильных кристаллов отмечается их поломка, септирование лучеобразных кристаллов, расходящихся из центра кристаллизации.

В процессе проводимого лечения кристаллограммы больных с ХПН характеризуются снижением числа центров кристаллизации, увеличением их размеров. Форма кристаллов приближается к нормальной. Однако, наряду с геометрически правильными кристаллами, часто встречаются участки их поломки, а также пучки кристаллов, разбросанные в различных направлениях. Таким образом, кристаллограммы больных с ХПН и ОПН различаются по количеству центров кристаллизации, а также по характеру кристаллографического рисунка. В то ж время следует отметить корреляцию между тяжестью состояния больных с ОПН и ХПН и выраженностью поломки и распада кристаллов.

У больных с опухолевыми заболеваниями почек количество кристаллизации уменьшено. В кристаллографическом рисунке отмечается значительная поломка лучей кристаллов, перекресты, распад, обнаруживаются отдельно лежащие крестообразные фигуры.

Таким образом, практическое применение кристаллографического метода исследования биологических субстратов заключается в возможности дифференциальной диагностики различных патологических процессов (опухолевых, воспалительных, аллергических). Метод позволяет также определить границы опухолей, в частности при сравнении кристаллографического рисунка опухолевой ткани и ткани, пограничной с опухолью. Он технически прост и доступен любой лаборатории.