Ветеринария/1.Ветеринарная медицина

 

Капустина О.А., Гаранкина А.Ю.,

д.б.н. Карташова О.Л., д.в.н. Жуков А.П.

 

Оренбургский государственный аграрный университет, Россия

 

Изучение антагонистической активности микроорганизмов, входящих в состав ветеринарных пробиотиков, в отношении  условно-патогенных микроорганизмов

 

Пробиотики не только являются предметом всесторонних научных изысканий, но и представляют собой важный товар на мировом рынке. На сегодняшний день широкому кругу потребителей доступны сотни пробиотических продуктов питания и пищевых добавок, производители которых обещают решение самых разнообразных проблем со здоровьем. Однако доступные пробиотики зачастую характеризуются низким качеством [2]. Микроорганизм, указанный в составе препарата, может отсутствовать в продукте, либо присутствовать в небольшом количестве, не всегда обладает заявленным спектром антагонистической активности. В результате снижается эффективность препарата, что вызывает нарекания со стороны специалистов [1]. Эти факторы усложняют выбор наиболее эффективного пробиотика для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта. Актуальным является исследование, направленное на изучение антагонистической активности микроорганизмов, входящих в состав ветеринарных пробиотиков, как одной из   наиболее   важных   биологических   характеристик   данных штаммов.

В связи с этим целью нашей работы явилось исследование антагонистической активности штаммов, входящих в состав ветеринарных пробиотиков, в отношении условно-патогенных микроорганизмов.

Материалы и методы. Материалом исследования послужили 24 штамма условно-патогенных микроорганизмов: гемолитическая E. сoli (6 штаммов), грибы рода Candida (6 штаммов), бактерии рода Staphylococcus (6 штаммов) и Kledsiella (6 штаммов), предоставленные лабораторией по изучению механизмов персистенции микроорганизмов ИКВС УрО РАН, 3 штамма бактерий рода Lactobacillus sp., выделенных из ветеринарных пробиотиков Лактоферон, Лактоамиловорин и Лактобифадол, 3 штамма E. сoli, выделенных из пробиотиков Микроцикол, Колибактерин, Бификол.

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств [6]. Антагонистическую активность пробиотических штаммов изучали модифицированным вариантом чашечного метода выявления отсроченного антагонизма по Frederiq [4] и методом прямого антагонизма [3].  

Статистическую обработку проводили с использованием параметрических методов. Достоверность различий оценивали по критерию Стъюдента  [5].

Результаты. В  ходе исследования на основании морфологических,  тинкториальных,  культуральных и  биохимических  свойств было выявлено, что штаммы, выделенные из пробиотиков Лактобифадол и Лактоферон относятся к виду L. аcidophilus, из препарата Лактоамиловорин -                          L. аmylovorum,  из Микроцикола, Колибактерина и Бификола - E. сoli.

При изучении антагонистической активности методом отсроченного антагонизма было  выявлено, что все три пробиотических штамма E.coli проявили антагонистическую активность только в отношении условно-патогенных E.coli со средним значением коэффициента антагонистической активности: 2,1±0,26 для Микроцикола, 1,1±0,18 для Колибактерина и 1,12±0,22 для Бификола. В отношении Klebsiella spp. проявил антагонизм только штамм E.coli, выделенный из Микроцикола  со средним значением коэффициента 1,7± 0,35 (рис. 1). Антагонистической активности в отношении Staphylococcus spp. и грибов рода Candida выявлено не было.

При изучении антагонистической активности пробиотических штаммов лактобацилл в отношении условно-патогенных микроорганизмов методом отсроченного антагонизма ни к одному штамму условно-патогенных микроорганизмов  явления антагонизма выявлено не было.

 

                               А                                                         Б

Рис. 1. Антагонистическая активность пробиотических

штаммов E. coli  в отношении: А- E. coli; Б- Klebsiella spp.

 

Антагонистическая активность пробиотических штаммов бактерий рода Lactobacillus sp. была выявлена только при использовании метода прямого антагонизма. Так, наиболее выраженный антагонизм проявили штаммы лактобацилл, выделенных из Лактобифадола и Лактоферона в отношении бактерий рода Staphylococcus sp., снижая численность последних практически до 0 КОЕ/мл. Штамм L. аcidophilus, выделенный из Лактобифадола, снижал численность бактерий рода Klebsiella sp. с 2,8±0,001 *105 до 1,14±0,297 *105 КОЕ/мл, грибов рода Candida sp. с 3,18±0,019 *105 до 1,36±0,081 *105 КОЕ/мл и  Е. coli  с 3,18±0,034 *105 до 1,34±0,238 *105 КОЕ/мл. Штамм L. аcidophilus, выделенный из Лактоферона, снижал численность грибов рода Candida sp. и Е. coli в 6 и 4,5 раза соответственно (до 0,6±0,16 *105 и 0,7±0,09 *105 КОЕ/мл), у бактерий рода Klebsiella sp. - в 1,5 раза (1,8±0,22*105 КОЕ/мл).

Подпись: 105 КОЕ/мл
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Рис. 2 Антагонистическая активность пробиотических штаммов бактерий рода Lactobacillus в отношении и условно-патогенных микроорганизмов

 (*р < 0,01; ** р < 0,05)

 

Штамм L. аmylovorum, выделенный из Лактоамиловорина,  снижал численность бактерий рода Staphylococcus sp. в 4,7 раза (с 4,24±0,43 *105 до 0,90±0,020 *105 КОЕ/мл), Klebsiella sp. - в 2,8 раза (1,07±0,295 *105 КОЕ/мл),  Candida sp. - в 1,6 раза (2,03±0,138 *105 КОЕ/мл). На численность Е. coli штамм L. аmylovorum влияния не оказывал (рис.2).

Условно-патогенные микроорганизмы, в свою очередь, на численность пробиотических лактобацилл влияния не оказывали.

 

 

Выводы.

1.                      Метод прямого антагонизма имеет качественные преимущества при оценке антагонистической активности Lactobacillus в отношении условно-патогенных микроорганизмов по сравнению с методом отсроченного антагонизма.

2.                      Пробиотические штаммы E.coli антагонистически активны в  отношении условно-патогенных E.coli.

3.                      Максимальная антагонистическая активность пробиотических Lactobacillus sp. отмечена в отношении бактерий рода Staphylococcus.

4.                      Выявлено, что L. аcidophilus  проявляют большую антагонистическую активность в сравнении с L. аmylovorum. 

 

Литература:

  1. Алешкин, В.А. Новое направление бактериотерапии - комплексные
    пробиотики    /    В.А.    Алешкин,    Н.Т.    Тихонова //    Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования: Сб. мат. конф. - М.- 2002. - С.47.
  2. Алямкин Ю. Пробиотики вместо антибиотиков — это реально. / Ю. Алямкин // Птицеводство. - 2005. - №2. - С. 17-18.

3.       Ермоленко, Е.И. Взаимодействие С. albicans и Lactobacillus plantrum in vitro  / Е.И. Ермоленко, С.Х. Ждан-Пушкина, А.Н. Суворов // Проблемы медицинской микологии. - 2004. - Т.6. - №2. - С. 49-54.

4.       Кудлай, Д.Г. Бактериоциногения / Д.Г. Кудлай, В.Г. Лихо дед. - М.:
Медицина, 1966. - 203 с.

5.     Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М.: Высш. школа, 1980. - 293 с.

6.     Определитель бактерий Берджи.- М.: Мир,1997-432с.