ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЯ У АКТИВНЫХ ДОНОРОВ ПЛАЗМЫ ИММУНИЗИРОВАННЫХ ВАКЦИНОЙ ПРОТИВ ГЕПАТИТА В.

Ренева Л.В.¹,.Волкова Л.В ²

¹- ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России в г. Пермь «Пермское НПО «Биомед», l.v.reneva@mail.ru, wolkowalw@mail.ru; ²- Пермский государственный технический университет.

Потребность отечественного здравоохранения в специфических иммуноглобулинах постоянно возрастает, поскольку, массовое применение антибактериальной терапии привело не только к появлению резистентных к антибактериальной терапии микоорганизмов, но и сопровождается большим количеством осложнений при их применении, таких как дисбактериоз, разного рода аллергическими реакциями и др. Ряд авторов связывает это с изменениями иммунного статуса населения (Аверченков и др., 2004; Анастасиев, 2000; Белобородов и др., 2001; Шарыгин, 2003). Применение же специфических иммуноглобулинов лишено осложнений и противопоказаний, свойственных антибактериальным препаратам. Успешное лечение некоторых заболеваний невозможно без применения компонентов крови и препаратов, изготовленных на их основе (Анастасиев, 2000; Клюева др., 2010; Мелкозерова, 2002). Удовлетворение потребности здравоохранения в препаратах плазмы крови остается нерешенной глобальной проблемой, в том числе по причине недостатка плазмы для фракционирования (Русанов, 2007; Тхай и др., 2012). Основой производства направленных иммуноглобулинов является иммунная плазма, содержащая высокий титр специфических антител. Получить необходимые объемы высокоиммунного сырья проводя отбор донаций, имеющих необходимую активность, используя только скрининг, не удается. В эндемичных районах по клещевому энцефалиту, где массовым образом проводится иммунизация населения от клещевого энцефалита таких, как Урал, Сибирь, Дальний Восток количество лиц имеющих высокий титр антител выше, чем в центральных районах России, но и в данных регионах объемы заготовки такой плазмы не достаточны для покрытия потребностей здравоохранения. Еще сложнее обстоит дело с получением высокоиммунной плазмы с высокой активностью титров к гепатиту В и столбняку. В таких случаях получить необходимые объемы сырья для производства направленных иммуноглобулинов невозможно без проведения активной иммунизации доноров. В настоящее время разработана единственная схема иммунизации доноров, это иммунизация стафилококковым анатоксином с целью получения иммунного сырья для производства стафилококкового иммуноглобулина (инструкция от 1977г.). В связи с вышеизложенным, представляет интерес изучение антителопродукции у доноров вакцинированных различными вакцинами с использованием разных схем иммунизации с целью определения наиболее оптимальной схемы иммунизации доноров, позволяющей получить максимальный по выраженности и длительности антителопродукции иммунный ответ. Определение критериев отбора доноров, для проведения иммунизации, с прогнозированным высоким уровнем антителопродукции с целью получения высокоиммунной плазмы для получения специфических иммуноглобулинов.

Целью настоящего исследования явилось изучение антителопродукции, длительности и напряженности поствакцинального иммунитета против гепатита В у активных доноров, плазма которых используется в технологии производства направленных иммуноглобулинов. Было проведено предвакцинальное обследование анти-HBs в сыворотке крови 27883 доноров иммунной плазмы для фракционирования, за период с 2008-2012гг. Возраст доноров находился в диапазоне от 18 до 60 лет. По результатам предвакцинального скрининга, для проведения вакцинации, было отобрано 978 доноров, не имеющих в сыворотке крови анти-HBs, из них 47% составляли мужчины и 53% женщины, доноров крови 64%, доноров плазмы 36%. Для характеристики напряженности гуморального иммунитета были выбраны следующие диапазоны концентраций анти-HBs: низкий уровень – до 0,1 МЕ/мл; средний уровень – от 0,1 до 1,0 МЕ/мл; высокий уровень –1,0 до 10,0 МЕ/мл, очень высокий уровень –10,0 МЕ/мл и более.

Установлено, что в группе лиц, вакцинированных по стандартной схеме, через 1 месяц после завершенного курса вакцинации уровень сероконверсии составил Среднегеометрическая концентрация АТ составляла 5,6±0,3 МЕ/мл. В этой группе иммунизированных, наибольший удельный вес (53%) составляли лица с высокими (1,0-10,0 МЕ/мл) концентрациями АТ, 34,6% очень высокими, что свидетельствовало о высокой иммуногенности вакцины.

В последующем отмечалось снижение числа вакцинированных лиц имеющих высокий уровень АТ, в группе привитых по стандартной схеме начиная с 3-го месяца после завершенного курса вакцинации, а число лиц с наличием низкого и среднего уровня анти-HBs АТ, наоборот, повышалось.

Удельный вес лиц, имеющих высокий и очень высокий титр АТ к вирусу гепатита В через 3 месяца составил 68±0,7%; через 6 месяцев - 60,1±2,3%; через 1 г. – 55±0,3 %. В результате проведенных исследований установлено, что только 47,3±0,2 % вакцинированных по стандартной схеме доноров сохраняли высокий титр специфических АТ через 2 г. после проведенной иммунизации; 27,9±4,2 % сохраняли высокий титр специфических антител через 3 года и только 25±1,1% сохраняли высокий титр специфических АТ через 4 года после окончания цикла вакцинации (рис. 1).

%

Срок наблюдения

Рис. 1. Динамика сохранения высоких титров АТ (выше 1,0 МЕ/мл) к гепатиту В у привитых по стандартной схеме вакцинации

Таким образом, выявлено статистически значимое (p<0,05) снижение напряженности поствакцинального иммунитета среди иммунизированных, по стандартной схеме вакцинации, доноров.

Следующим этапом исследования явилось изучение влияния возраста и пола доноров на выработку АТ к вирусу гепатита В (рис. 2).

Анализ результатов эффективности вакцинации доноров различных возрастных групп, свидетельствовал что высокая эффективность наблюдалась у доноров 20–30 лет, у мужчин - 83,4±0,2%, у женщин данного возраста - 66,7±0,2% (p<0,05). Среди женщин 40-50 лет удельный вес лиц имеющих высокие титры антител составил -71±0,3%. Определение уровня АТ, через месяц после окончания цикла иммунизации показало, что более высокий удельный вес лиц, имеющих высокие титры антител, 70,3±0,3% (p<0,05) определялся в возрасте 20-30 лет.

возраст

%

Рис. 2. Анализ результатов эффективности вакцинации в зависимости от пола и возраста.

Анализ влияния групповой принадлежности на выработку АТ к вирусу гепатита В показал, что наиболее выраженный иммунный ответ на вакцинацию, через месяц после окончания цикла иммунизации, наблюдали у женщин, имеющих четвертую группу крови, наименьший иммунный ответ наблюдали у мужчин третьей группы крови (рис. 3).

Группа

крови

%

Рис. 3. Влияние групповой принадлежности доноров на выраженность иммунного ответа.

Динамика изменения уровней АТ против вируса гепатита В при применении экстренной схемы введения вакцины (0–1–2), прививки выполняли с интервалом 1 месяц с последующей однократной ревакцинацией через 12 месяцев, показала, что среди привитых (30 человек) по экстренной схеме после завершения курса иммунизации уровень сероконверсии составил 82,0±0,1%. Удельный вес лиц, имеющих высокий и очень высокий титр антител к вирусу гепатита В через 3 месяца после окончания цикла вакцинации составил 62±2,4%; через 6 месяцев 34,1±0,4%; через 1 год – 23,5±1,1%. В структуре вакцинированных доноров по экстренной схеме, наибольший удельный вес приходился на долю лиц со средними (0,1–1,0 МЕ/мл) концентрациями поствакцинальных антител (62,3±2,2%), высокие (1,0-10,0 МЕ/мл) концентрации анти-HBs антител имели лишь 11,6±1,1%, а очень высокие (10,0 и более) 1,4±0,2% доноров, 27±0,2% имели низкий уровень антител (0,01-0,1 МЕ/мл), а 2,0±0,2% не дали ответ на проведенную вакцинацию. Экстренная схема вакцинации против гепатита В предусматривала проведение ревакцинации, через год после окончания цикла вакцинации. Группу подлежащих бустер-вакцинации составили 27 человек. При сравнении среднегеометрических концентраций антител к HBsAg у вакцинированных по экстренной схеме отмечено статистически значимое снижение концентраций поствакцинальных АТ в зависимости от срока после полного курса иммунизации. В результате проведенных исследований, отмечали статистически значимое (p˂0,05) снижение удельного веса лиц с со средними, высокими, и очень высокими концентрациями АТ. Установлено, что только 37,3±3,2% вакцинированных по экстренной схеме доноров сохраняли высокий титр специфических АТ через 2 года после проведенной иммунизации; 18,6 ±4,4% сохраняли высокий титр специфических антител через 3 года и только 12,4±0,1% сохраняли высокий титр специфических антител через 4 года после окончания цикла вакцинации (рис. 4).

Рис. 4. Динамика сохранения высоких титров (выше 1,0 МЕ/мл) к гепатиту В у привитых по экстренной схеме вакцинации.

Через 4 года, после окончания цикла иммунизации отмечено преобладание удельного веса лиц с низкими (0,01–0,1 МЕ/л) уровнями поствакцинальных антител. Таким образом, среди привитых по экстренной схеме через 4 года 93,6 ±2,2% доноров имели низкий уровень АТ против гепатита В, поэтому их плазму нельзя было использовать для производства иммуноглобулина против гепатита В.

Сравнительная оценка динамики изменения уровней анти-HBs АТ у доноров при вакцинации по стандартной и экстренной схемам показала, что среди вакцинированных по обеим схемам выявлено увеличение удельного веса лиц с отсутствием высокого и очень высокого уровней АТ и уменьшение доли лиц с высокими титрами (рис. 5).

Рис. 5. Сравнительная оценка изменения высоких уровней (более 1,0 МЕ/мл) анти-HBs антител у доноров при вакцинации по стандартной и экстренной схемам.

Показатели эффективности вакцинации у лиц, иммунизированных по стандартной схеме были статистически значимо выше, среднегеометрическое титра АТ при иммунизации по стандартной схеме 5,6±0,3 МЕ/мл, против 3,4±0,6 МЕ/мл. (p<0,01), чем у иммунизированных по экстренной схеме. Можно предположить, что это связано, по-видимому, с большим интервалом между второй и третьей вакцинациями, а также особенностью течения процесса специфического антителообразования, характеризующегося медленным нарастанием концентраций антител в ответ на введение рекомбинантного HBsAg.

По результатам сравнительных наблюдений, отмечено, что через 4 года 75,0±3,2 % вакцинированных по стандартной схеме и 93,6 ± 1,3%, вакцинированных по экстренной схеме не имели необходимого титра АТ (более 1,0 МЕ/мл), у данных лиц определялся низкий уровень АТ, который являлся защитным (протективным) но тем не менее, плазма этих доноров не могла быть использована для производства иммуноглобулина против ВГВ (рис. 5).

В целом тенденция снижения уровня антителопродукции была значительно более выражена в группе привитых по экстренной схеме, что подтверждало вывод о необходимости введения дополнительной бустерной дозы вакцины иммунизированным по схеме 0–1–2 мес. и проработке вопроса необходимости дальнейших ревакцинаций, определения частоты проведения ревакцинаций доноров вакцинированных по профилактической схеме с целью получения плазмы с высокими титрами анти HBsAg АТ.

Кроме того, наблюдали ежегодное статистически достоверное снижение средних геометрических титров анти-HBs антител в динамике (3 месяца, 6 месяцев,1 год, 2 года, 3 года 4 года) p<0,01, что составляло по стандартной схеме вакцинации 5,9±0,4 МЕ/мл, 3,8±1,1 МЕ/мл – 1,8±0,4 МЕ/мл, 1,4±0,4 МЕ/мл, 0,6±0,1 МЕ/мл, 0,1±0,1 МЕ/мл против 2,2±0,3 МЕ/мл 1,2±0,4 МЕ/мл, 0,6±0,1 МЕ/мл, 0,4±0,2 МЕ/мл, 0,2±0,1 МЕ/мл, 0,1±0,1 МЕ/мл – по экстренной.

Проведенное исследование выявило ежегодное падение уровня антител при использовании обеих схем вакцинации против ВГВ. В связи с чем, возникает вопрос о необходимости ревакцинации лиц, имеющих анти-HBs антитела в недостаточной концентрации для производства специфического иммуноглобулина, ниже 1,0 МЕ/мл, через 3 года после первичного курса иммунизации.

В результате проведенного исследования установлено, что экстренная схема вакцинации от ВГВ создает более низкий и менее продолжительный уровень поствакцинальных антител у большей части иммунизированных доноров по сравнению со стандартной схемой вакцинации.

Использование профилактической схемы вакцинации позволяет получить более выраженный иммунный ответ на вакцинацию особенно у мужчин и женщин имеющих первую группу крови в возрасте от 20 до 30 лет и у женщин имеющих четвертую группу крови в возрасте 40-50 лет. Мужчины имеющие третью группу крови в возрасте 40-50 лет дают наименьший по выраженности и продолжительности иммунный ответ.

Установлено, что через три года после проведенной вакцинации с использованием профилактической схемы, количество доноров имеющих титры противогепатитных АТ в концентрации достаточной для использования их плазмы для производства специфического иммуноглобулина уменьшается более чем в 2 раза.