Биологические науки/ 9.Биохимия и биофизика

Камилов Ф.Х., Тимирханова Г.А., Самородов А.В.,

Ахмерова А.З., Халиуллин Ф.А.

ГБОУ ВПО «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ

Антиагрегационная и антикоагуляционная активность производных солей (3-метилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл

Результаты настоящей работы являются продолжением исследования [3,4] производных ксантина с целью создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов-корректоров системы гемостаза.

Цель:

Оценить влияние 5 синтезированных производных ксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.

Объекты исследования - лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, этамзилат, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета [4,5].

Методы исследования:

Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре “Thromlite-1006A” на донорской крови человека [8]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали коллаген в концентрации 5 мкг/мл, производства “Технология-Стандарт”, г. Барнаул. Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2×10^-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [6].

Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A.Clauss [7]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10^-3 г/мл.

Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производства ОАО «Синтез», Россия), в качестве проагреганта – этамзилат (ООО «Опытный завод «ГНЦЛС», Украина), в качестве антиагрегантов – пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.

Обсуждение результатов:

Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в таблице 1.

Из данных таблицы 1 видно, что все производные ксантина в данной концентрации оказывают различное влияние на функциональную активность тромбоцитов.

Ряд соединений проявил выраженное проагрегантное действие. При предварительной инкубации С-63 и С-46 в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут коллаген-индуцированная агрегации усиливалась в среднем на 5,4% и 6,7% относительно контроля. Это превышает показатели препарата сравнения этамзилата.

Таблица 1

Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов.

№ п\п	Шифр	Коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов в присутствии соединения (% к контролю)
1.	С-46	105,4±1,2
2.	С-63	106,7±2,4
3.	С-52	91,3±1,8
4.	С-62	98,4±1,3
5.	С-57	94,6±2,1
6.	Кофеин-бензоат натрия	94,7±1,2
7.	Эуфиллин	97,5±1,3
8.	Пентоксифиллин	100,0±0,0
9.	Этамзилат	103,2±1,4

Примечание: данные достоверны (р<0,05);

Среди препаратов сравнения наибольшую антиагрегационную активность проявил кофеин-бензоат натрия. При предварительной инкубации кофеин-бензоата натрия в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут происходило снижение агрегации в среднем на 5,3% относительно контроля.

Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую антиагрегационную активность проявило соединение С-52. Введение 2×10^-3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 10,0% относительно контроля. Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения.

Результаты исследования влияния соединений на плазменный компонент гемостаза представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Влияние производных ксантина на плазменный компонент гемостаза

№	Шифры соединений	АПТВ, % к контролю	ПВ, % к контролю	Фибриноген, % к контролю
1.	С-46	102,7±1,0	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0
2.	С-63	101,4±1,2	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0
3.	С-52	102,4±0,7	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0
4.	С-62	110,3±1,5	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0
5.	С-57	107,1±1,5	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0
6.	Гепарин	154,7±3,7	100,0 ± 0,0	100,0 ± 0,0

Примечание: данные достоверны (р<0,05);

Соединения показали различное влияние на плазменный компонент гемостаза, проявляющееся изменением показателя внутреннего пути свертывания крови - АПТВ. На показатели ПВ и концентрацию фибриногена в данной концентрации, значимого влияния соединений не регистрировалось.

Среди впервые синтезированных производных ксантина найдены соединения, превосходящие по антиагрегационной активности и проагрегантному эффекту ряд применяемых в настоящее время препаратов. Полученные результаты свидетельствуют о более широком антитромботическом и гемостатическом потенциале новых производных ксантина, что убеждает в необходимости и актуальности дальнейших исследований среди производных ксантина.

Список литературы.

1. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1988. - 528 с.

2. Государственный реестр лекарственных средств. - М. - 2004. - Т. 2. - С. 1141-1142.

3. Тимирханова, Г.А. Поиск зависимости «структура-активность» производных ксантина в отношении адгезивно-агрегационной функции тромбоцитов / А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин, А.З. Саитгалина // Химия и медицина. Тезисы докладов VIII Всероссийской конференции. - Уфа, 2010. - С. 96-97.

4. Саитгалина, А.З. Синтез солей (3-метилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, и их влияние на агрегацию тромбоцитов / Г.А. Тимирханова, А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин // Башкирский химический журнал.- 2008.- Т. 15, № 3.- С. 63-65.

5. Губаева Р.А., Халиуллин Ф.А. Синтез 3-метил-1-пропил-7-(тиетанил-3)ксантинил-8-тио)уксусной кислоты и ее солей / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции // Сборник научных трудов (Пятигорская фармацевтическая академия).- Вып. 65- Пятигорск, 2010.- с.305-306.

6. Поляков, А.Е.. Метод исследования агрегационной функции тромбоцитов / А.Е. Поляков, В.А. Черняк // Лабораторное дело.- 1989.- № 10.- С. 19-20.

7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Хабриева Р.У.- 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 2005.- С. 461-476.

8. Воrn G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature- 1962-Vоl. 194 48З2-р. 924-929.