К. м. н. Т.В.Замечник, д.м.н. Л.Н.Рогова, д.м.н. С.И. Ларин.

Волгоградский государственный медицинский университет.

Ремоделирование тканей венозной стенки у пациентов с варикозной болезнью в стадии развития С4-С5 по СЕАР по данным иммуногистохимических исследований

Целью нашего исследования было изучение способности венозной стенки к ремоделированию при варикозной болезнью нижних конечностей (ВБВНК) на стадии С4-С5 по СЕАР.

Материалы и методы. В исследование были включены 22 пациента (33 конечности) в возрасте 52.2+2.32 лет, с ВБНК в бассейне большой подкожной вены (БПВ) на стадии С4-С5 по СЕАР. Во время оперативного лечения было взято для изучения 33 венозных фрагмента ствола БПВ на протяжении 5-7 см от сафено-феморального соустья. Также у пациентов с варикозной болезнью во время операции забирали кровь из локтевой вены и БПВ. Кровь забирали и у 7 здоровых добровольцев из локтевой вены и притока БПВ на медиальной поверхности стопы. В крови определяли содержание плазменного и эритроцитарного магния унифицированными методами [1].Исследование проводилось с учетом стандартов Хельсинской декларации и Международной конференции по гармонизации (ICH). Оценке подвергался дистальный участок удалённого фрагмента вены, который фиксировался в 10% нейтральном формалине не менее 7 суток. Процесс ремоделирования венозной стенки оценивался по интенсивности экспрессии металлопротеиназ ММР 9 и ММР19, как маркеров, отражающих состояние экстрацеллюлярного матрикса, CyclinD1 иKi67, как маркеров пролиферации клеток венозной стенки, актина, как маркера полноценности гладкомышечных клеток и CD 68, как маркера активированных макрофагов. Парафиновые срезы (толщиной 4-5 микрон) монтировали на стеклах, обработанных полилизином, затем подвергали депарафинизации в ксилоле и регидратации в спирте 96°. После промывания в дистиллированной воде проводили блокирование активности эндогенной пероксидазы, охлажденной 0,3% перекисью водорода в течение 10 минут с последующим ополаскиванием и промыванием в дистиллированной воде. Восстановление антигенной структуры ткани проводили с использованием Target Retrieval Solution (DAKO; pH=6,0) в СВЧ - печи (мощность 130Вт) в течение 25 минут с последующим остыванием при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем промывали в дистиллированной воде, наносили первичные антитела и инкубировали 30 минут при комнатной температуре во влажной камере. После ополаскивания и промывания в Tris-HCL буфере (рН=7,6) 2 раза по 5 минут инкубировали с EnVision (DAKO) 30 минут, ополаскивали и промывали в буфере аналогичным образом. Затем наносили диаминобензидин[2].Реакцию оценивали в баллах по количеству окрашенных клеток и интенсивности их окрашивания. Для статистической обработки результатов исследования крови использовали критерий Стьюдента, при иммуногистохимическом исследовании средние величины выражали в балах как Me [25 и 75 перцентиль]

Результаты. Число CyclinD1-позитивных клеток, обнаруженных во всех слоях сосудистой стенки, и интенсивность их окраски была оценена как 2[2;2,5], актин- позитивных как 0,5[0;0,5] , экспрессия ММР 19 как 0[0;0,5] баллов, экспрессия ММР 9 отсутствовала, обнаружены единичные Ki 67- и CD 68- позитивные клетки в наружном слое венозной стенки (рисунок 6). Содержание магния в плазме и эритроцитах из БПВ у пациентов с ВБ по сравнению со здоровыми было снижено на 10% и 30 % соответственно (t=2,78 и t=6,04, р< 0,05).

Выводы. Низкий уровень экспрессии металлопротеиназ и СD 68 свидетельствует о прекращении процессов воспаления и ремоделирования и развитии фиброза в интиме и медии варикозной вены. Крайне низкое содержание актина в мышечных клетках венозной стенки может быть признаком их атрофии и анаплазии. Слабовыраженная экспрессия маркеров клеточного роста и пролиферации Ki 67 при низкой концентрации циклинаD1 свидетельствуют об отсутствии митотической активности каких бы то ни было клеток венозной стенки. Низкий уровень магния плазменного и внутриклеточного подтверждают это предположение т.к. на различных культурах клеток показано, что при действии ростовых факторов на клетку увеличивается мембранная проницаемость для ионов магния и его внутриклеточная концентрация, поскольку магний необходим как кофактор и активатор ферментов, контролирующих ведущие звенья метаболизма, клеточный рост и пролиферацию[3]. Снижение синтетической и пролиферативной активности клеток венозной стенки приводит к нарушению нормальной архитектоники адвентициальной оболочки вен и утрате эластических свойств, развивается фиброз.

Литература.

1. Камышников В.С. Справочник по клинико-биологической лабораторной диагностике: В 2-х т./В.С. Камышников. -Минск: Изд - во Беларусь, 2000. -Т.1. - 495 с.

2. Кокосадзе Н.В. MALT-лимфома желудка: морфологические основы диагноза на материале гастробиопсии: Автореф. дис. канд. мед. наук./Н.В. Кокосадзе. - М., 2005. - 25с.

3. Старавойтов В.А., Рогова Л.Н., Смирнов А.В. «Патогенетическое обоснование применения магнийсодержащей лекарственной композиции при лечении экспериментальной язвы желудка».Ж. «Вестник новых медицинских технологий» , т.ХVI, № 2, 2009. С. 43-48.