Биологические науки/9. Биохимия и биофизика

Кусаинова Д.С.

Место работы Карагандинский Государственный Медицинский Университет.

Исследование плазмы крови больных гломерулонефритом методом окрашенной клиновидной дегидратации

В гистологии известно применение красителей для определения локализации различных групп веществ [1]. При этом неорганические и органические вещества изучаемых объектов вступают в химическую реакцию с различными реактивами, образуя окрашенные продукты реакции. По формирующейся окраске можно судить не только о наличии, но и о количественном содержании исследуемого вещества [2].

Наиболее информативными были результаты, полученные с окрашиванием плазмы крови амидочерным 10В. Специфично окрашивались только протеины, при отсутствие окраски пептидов, и имело место максимальное количество концентрических зон окраски различных групп белков, то есть наиболее точно осуществлялась их дифференциация [3].

Материалы и методы: В качестве объекта исследования использовали плазму крови 8 больных хроническим гломерулонефритом. Хронический гломерулонефрит был диагностирован д.м.н., проф. В. Б. Молотовым-Лучанским.

Среди окрашенных тезиограмм плазмы крови больных гломерулонефритом были обнаружены довольно разрозненные картины, не позволяющие выделить четкие морфотипы (рис1).

Рисунок 1. Окрашенные амидочерным 10В тезиограммы плазмы крови больных гломерулонефритом.

Среди окрашенных тезиограмм плазм крови больных гломерулонефритом можно было выделить следующие общие признаки:

1) Можно выделить 3-4 концентрические зоны – краевая, центральная и промежуточная, состоящая из двух подзон.

2) Отсутствовали радиальные трещины и центральная точка растрескивания.

3) Отсутствовали конкреции в центральной зоне фации.

4) В большинстве случаев в центральной зоне наблюдались кристаллические структуры

5) Наблюдалось незначительное увеличение краевой зоны.

6) В большинстве случаев в краевой зоне имелись конкреции, заполняющие всю площадь сектора.

Механизм реакции амидочерного 10В с белками до конца не исследован. Считается, что при взаимодействии красителя с белками возможно образование ионной химической связи и физической адсорбции. Ионные связи могут образовываться между кислыми группами молекулы красителя и основными группировками белков (аминогруппы лизина, гуанидиновая группа аргинина, имидазольное кольцо гистидина). Различные белки могут связывать разное количество красителя, что, по-видимому, приводит к широкому спектру окраски комплекса белок-краситель (от черного до красного цвета) [4]. Связывание с белками амидочерного 10В весьма специфично: нуклеиновые кислоты, полисахариды (хондроитин сульфат), аминокислоты и некоторые другие азотсодержащие вещества не дают окрашенных производных [5].

Согласно литературным данным в тезиографической картине плазмы крови после окрашивания амидочерным 10 В складывалась следующая картина расположения групп белков: альбумины – краевая зона; α и β-глобулины (ЛПВП и ЛПНП) – промежуточная зона, γ-глобулины (иммуноглобулины) – центральная зона [6].

Было сделано предположение об увеличение содержания альбуминов, α и β-глобулинов, снижении содержания минеральных компонентов в плазме крови.

Увеличение содержания α и β-глобулинов вполне объяснимо с точки зрения патогенеза данного заболевания. Увеличение же краевой зоны окрашенной тезиограммы плазмы крови больных гломерулонефритом можно объяснить конгломерацией минеральных компонентов с белковыми структурами, а именно альбуминовой фракцией. О чем и свидетельствуют измененные формы конкреций в краевой зоне плазмы крови окрашенной тезиограммы больных гломерулонефритом.

Выводы:

В ходе проведенной работы были выявлены данные, имеющие научную значимостью, но практического применения они пока не нашли, требуются дальнейшие исследования.

Список литературы:

1. Л.М. Обухова «Сравнительный анализ применения красителей для выявления белков при исследовании биологической жидкостей методом клиновидной дегидратации» // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского, 2008, № 2, с. 103–106

2. Пирс Э. «Гистохимия теоретическая и прикладная». // М.: Иностранная литература, 1962. 962 с.

3. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. «Основы гистологии с гистологической техникой». // М.: Медицина,1982. 304 с.

4. Шишкин С.С. Использование связывания красителей для количественного определения содержания белка в растворах (обзор)// Вопросы медицинской химии. 1982. Т. 28. № 5. С. 134–141.

5. Фрайштат Д.М. Реактивы и препараты для микроскопии: Справочник. М.: Химия, 1980. 480 с.

6. Л.М. Обухова, К.Н. Конторщикова «Определение локализации групп белков в высохшей капле сыворотки крови при помощи красителей» // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского, 2008, № 3, с. 116–119