Асп. Чечёткина У.Е.¹, к.б.н. Евтеева Н.И. ²

¹ Нижегородский госуниверситет им. Н.И. Лобачевского, Россия

² Нижегородская медицинская академия Росздрава, Россия

Микроорганизмы рода Enterobacter – представители кишечной микрофлоры медоносных пчёл

Микроорганизмы рода Enterobacter выделяются из почвы и воды, сохраняют жизнеспособность в широком диапазоне абиотических факторов среды, нередко обладают патогенностью для многих беспозвоночных и позвоночных животных, и человека. Способность утилизировать углеводы, спирты, аминокислоты; участие в процессах нитрификации, денитрификации, аммонификации позволяет им занимать различные местообитания (1).

В настоящее время бактерии рода Enterobacter идентифицированы как агенты внутрибольничных инфекций с возрастающей резистентностью к большинству используемых в практике антимикробных препаратов (2). Эти микроорганизмы выделяются при гнойно-воспалительных заболеваниях, особенно у лиц с иммунодефицитным состоянием и у недоношенных детей, при инфекциях желудочно-кишечного тракта, мочевыводящих и желчевыводящих путей, легких и сепсисе (3).

В числе резервуаров энтеробактерий наряду с человеком и позвоночными животными ряд авторов называют и представителей беспозвоночных, прежде всего – насекомых. В патологии насекомых отмечаются виды Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae (4). При анализе обножки и трутневого расплода медоносных пчёл выделены бактерии рода Enterobacter, что позволяет предположить их присутствие в микробоценозе пчёл (5). На сегодняшний день имеются отдельные случаи обнаружения энтеробактеров у медоносных пчёл, но целенаправленного исследования до сих пор не проводилось. Таким образом, представляет интерес изучение кишечной микрофлоры медоносных пчел как возможного местообитания бактерий рода Enterobacter.

В настоящей работе проведено исследование кишечной микрофлоры пчёл на присутствие микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae и бактерий р. Enterobacter. Пробы пчел отбирали на пасеках Нижегородской области в летний и зимний период. Непосредственно перед бактериологическим посевом насекомых усыпляли хлороформом, обрабатывали в 70% этаноле и промывали в физиологическом растворе. Затем из пяти особей насекомых извлекали кишечники и растирали в физ. растворе. Из исходных суспензий готовили десятикратные разведения до 10^-6 включительно. Все манипуляции проводили с соблюдением правил асептики. Полученные суспензии засевали на дифференциально-диагностические среды Эндо и Chromocult («Merсk», Германия). Посевы инкубировали при 37ºC в течение 24 ч. Идентификацию выделенных микроорганизмов проводили в соответствии со схемами, представленными в определителе бактерий Берджи (6).

Спектр энтеробактерий в составе кишечного микробоценоза пчёл в период активного медосбора оказался достаточно разнообразным и включал 19 видов, представителей 10 родов семейства Enterobacteriaceae, среди них наиболее часто изолированы Enterobacter, Klebsiella, Pantoea (рис.).

В кишечной микрофлоре пчел обнаруживались несколько видов рода Enterobacter: Enterobacter cloacae, Enterobacter gergoviae, Enterobacter sakazakii, Enterobacter intermedium, что свидетельствует о благоприятной для этих бактерий среде обитания. Причём довольно часто (в 90% проб) энтеробактеры обнаруживались именно в летний период, что на наш взгляд, связано с активным посещением пчелами медоносных растений. В исследованиях проведенных нами ранее показана способность бактерий р. Enterobacter входить в состав микрофлоры цветов некоторых медоносных растений, например, липы сердцевидной, малины обыкновенной, кипрея узколистного, одуванчика лекарственного (7).

В летний период пчёлы активно собирают пыльцу и нектар медоносных растений, богатые различными углеводами. По своему составу нектары представляют водные растворы сахарозы, глюкозы, фруктозы с небольшим содержанием органических кислот, спиртов, минеральных солей, ферментов и различных сложных ароматических веществ. В среднем в нектаре преобладающими видами углеводов являются сахароза и фруктоза (8). Для их сбраживания могут быть использованы ферменты, продуцируемые микроорганизмами.

Возможно, такое массивное обнаружение энтеробактеров связано с их функциями в кишечнике пчёл, а именно с их высокой ферментативной активностью (6). Микроорганизмы р. Enterobacter способны утилизировать глюкозу и сахарозу, составляющие основной летний рацион пчёл.

Зимой популяция энтеробактеров поддерживается на минимальном уровне и активную роль берут другие микроорганизмы р. Klebsiella (рис.).

Рис. Спектр родов энтеробактерий, обнаруженных в кишечнике медоносных пчёл.

В смыве со стенок и дна улья нами изолированы бактерии родов Citrobacter и Enterobacter, что косвенно свидетельствует о сохранении этих бактерий в улье в течение длительного времени и относительной устойчивости к антибактериальному действию прополиса.

В ходе проведенных исследований обнаружено присутствие бактерий р. Enterobacter в составе кишечной микрофлоры медоносных пчел, преимущественно в летний период. Отсутствие видимой патологии для насекомых позволяет рассматривать данные микроорганизмы как представителей нормальной микрофлоры, а кишечник насекомых как возможное местообитание данных бактерий.

Литература:

1. Современная микробиология. Прокариоты: в 2 т. / под ред. Й. Ленгелера и др. – М.: Мир, 2005. – 654 с.

2. Weinstein R.A. Epidemiology and control of nosocomial infections in adult intensive care units // Am. J. Med., 1991. Vol. 91. P. 179 – 184.

3. Ansari A.L., Mc. Natara N.E.B, Cunny K.J. et al. Experience with Enterobacter bactaeremia in a Dublin teaching hospital // J. Hosp. Infect, 1994. Vol. 27. P. 69 – 72.

4. Штейнхауз Э. Микробиология насекомых. М.: Иностранная литература, 1950. 767 с.

5. Хисматуллин Р.Г. Свойства природных компонентов пчеловодства в процессах бактерицидной реакционности пчел, в технологиях косметических производств: Автореферат. дис. ... канд. техн.наук. М.: Моск. гос. ун-т пищ. пр-в., 2002. 23 с.

6. Определитель бактерий Берджи: В 2т. / Под ред. Дж. Хоулта и др. М.: Мир, 1997.

7. Евтеева Н.И., Речкин А.И. Поиск новых резервуаров для персистенции и участников циркуляции энтеробактерий в естественных экосистемах // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. Н.Новгород, 2007. № 6. С. 99 – 103.

8. Глухов М.М. Медоносные растения. М.: Колос, 1974. 295 с.