Ветеринария / 1.

асп. Черевиченко В.А.¹, д.в.н. Анников В.В.¹, к.т.н. Родионов И.В.²

Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова¹

Саратовский государственный технический университет²

Иммунологическое обоснование эффективности применения ронколейкина в лечении хронического остеомиелита животных

В последние годы все больше внимания уделяется изучению иммунного статуса организма как первопричине, определяющей возникновение и течение патологического процесса (И.П. Савицкая, А.А. Воробьев, 1988г.). Важность изучения состояния клеточного и гуморального иммунитета при костно-гнойной инфекции определяется участием в ней микробного фактора, длительным и склонным к рецидивированию течением воспалительного процесса, а также постепенным истощением защитных сил организма (В.Г. Морозов, 1990г.). Большинство исследователей единодушны во мнении, что у больных хроническим остеомиелитом наблюдается значительное угнетение функционального состояния иммунной системы, что выражается в снижении основных регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, в том числе Т-цитотоксических, и нарушении процессов дифференцирования клеток при недостаточности функции нейтрофильных фагоцитов (Б.А. Жанкин, 2004г.).

Возникновению иммунодефицитного состояния могут способствовать общесоматическое состояние больного, имеющиеся эндогенные очаги инфекции, сопутствующие заболевания (Б.А. Жанкин, Т.Ж. Султанбаев, 2004г.). Кроме того, хирургические манипуляции, использование средств для общей анестезии также оказывают иммунодепрессивное действие на ослабленный организм больного животного. Указанные меры ставят под сомнение эффективность секвестротомии, как основного метода лечения животных с хронической костно-гнойной патологией. В связи с этим целесообразно разрабатывать такие терапевтические способы лечения, которые не вызывают побочных эффектов со стороны макроорганизма и одновременно стимулируют нарушенные звенья иммунной системы, настраивая организм на выздоровление.

В специальной литературе имеются сведения о положительном опыте применения иммуномодуляторов цитокинового ряда в комплексном лечении людей, больных остеомиелитом (Л.Г. Григорянц, 1990г., Б.А. Жанкин, Т.Ж. Султанбаев, 2004г., В.И. Марченко, 2007г.). Между тем, в существующих научных источниках ветеринарного характера отсутствуют сообщения, касающиеся использования цитокиновых иммуномодуляторов в лечении костно-гнойной патологии у животных.

Поэтому целью настоящих исследований явилась оценка иммунологических показателей и их изменений в процессе лечения животных, больных хроническим остеомиелитом.

В данной научной работе отдавалось предпочтение рекомбинантному интерлейкину-2 человека, известному в России под коммерческим названием «ронколейкин». Указанный препарат обладает иммунокоррегирующими свойствами, направленными на формирование антибактериального иммунитета и улучшение процессов восстановления поврежденных тканей. При устойчивом иммунодефиците ронколейкин может выступать в качестве эффективного иммунореабилитатора.

Методика исследования

При клинических экспериментах использовались взрослые кролики породы «нидерландская красная», имеющие массу 3,5 – 4,0 кг, которые распределялись на три опытные группы по пять животных в каждой.

У кроликов всех опытных групп моделировался остеомиелит по известной методике Кошкина В.И. и Нагибина В.И.(1970 г.). Выбор антибиотика осуществлялся согласно результатам антибиотикочувствительности микрофлоры, выделенной из очага остеомиелита.

Первой группе животных вводился ронколейкин подкожно в дозе 20 тыс. МЕ на килограмм живого веса на 1, 2, 3 и 6 сутки болезни. Введение данного препарата сочеталось с внутримышечной инъекцией антибиотика цефазолина в дозе 0,15 г на голову 2 раза в сутки в течение 7 дней подряд. При этом ронколейкин выступал как стимулятор интерферонообразования, а также фактор роста, дифференцирования и активности Т- и В-лимфоцитов.

Второй группе животных применялся только антибиотик цефазолин с сохранением дозы, способа и кратности введения, что и животным первой группы.

Третья группа животных с характерными признаками остеомиелита была контрольной, лечение этим животным не проводилось.

Результаты исследования и их анализ

Иммунологическое исследование всех опытных групп животных осуществлялось согласно методическим рекомендациям в реакции спонтанного розеткообразования перед экспериментом и на 45-е сутки моделирования остеомиелита, а также на 6, 14 и 20-е сутки после проведения курса терапии.

Модельный остеомиелит развивался в течение 1-1,5 месяцев, при этом все лабораторные животные хорошо переносили процесс моделирования, сохраняли подвижность. При визуальном осмотре отмечалось, что животные щадили пораженную конечность, путем пальпаторного обследования фиксировался плотный инфильтрат. В процессе иммунологического исследования у животных, больных остеомиелитом были выявлены глубокие нарушения в иммунной системе (табл.).

Как показывают результаты, относительное количество Т-лимфоцитов в периферической крови животных к 45 суткам моделирования остеомиелита снижалось с 37,3% (среднее значение по всем группам) до уровня 23,4% (среднее значение по всем группам) (табл.). В процессе экспериментального моделирования во всех группах животных наблюдалась тенденция к стабильному снижению В-лимфоцитов так, что до заражения уровень их содержания в среднем составлял 12,9%, а к 45-м суткам болезни – 9,3%. По данным иммунологических показателей все кролики нуждались в иммунной реабилитации.

Таблица

Иммунологические показатели в процессе моделирования хронического остеомиелита и после курса терапии у кроликов

Показатель	1 группа		2 группа		3 группа – контроль
	Т-лимфоциты,%	В-лимфоциты, %	Т-лимфоциты,%	В-лимфоциты, %	Т-лимфоциты,%	В-лимфоциты, %
До модельного заражения	37,3±1,20	13,1±1,12	35,4±1,18	12,7±0,98	37,3±1,20	12,9±1,06
Через 45 суток после заражения	23,4±0,23	9,2±0,13	21,3±0,19	9,4±1,16	24,6±1,12	9,4±0,98
На 6-е сутки после курса терапии	29,3± 1,42	14,8±1,12	25,1±0,87	9,6±1,04	21,3±0,78	9,2±1,18
На 14-е сутки после курса терапии	32,14±1,59	17,6±1,43	26,3±0,76	9,6±0,68	21,1±1,16	9,4±1,12
На 20-е сутки после курса терапии	39,6±1,64	22,3±1,18	20,6±0,87	8,8±0,07	19,8±0,64	8,3±0,87

После окончания курса лечения у кроликов первой группы, которым вводился ронколейкин в комплексе с цефазолином, наблюдалось более благоприятное течение процесса по сравнению со второй опытной группой животных, которым вводился только цефазолин. Это выражалось в ранней нормализации температуры тела, исчезновении рентгенологических признаков воспаления и развитии грануляционной ткани.

Полученные данные позволяют считать, что применение препарата-корректора ронколейкина в комплексном лечении хронического остеомиелита на 6 сутки курса терапии приводит к достоверному повышению уровня содержания Т-лимфоцитов до 1,3 раза в периферической крови первой группы больных животных. У животных второй группы, которым ронколейкин не применялся, через 6 суток после окончания лечения уровень Т-лимфоцитов повышался в 1,2 раза. В В-клеточном звене иммунитета у кроликов, в комплексном лечении которых применялся ронколейкин, также наблюдалось увеличение количества В-лимфоцитов в 1,6 раза, и практически не изменилось их содержание у животных, которым инъецировался только цефазолин. Так, уровень Т-лимфоцитов на 20-е сутки после окончания курса терапии составлял 39,6% в крови кроликов первой опытной группы и 20,6% в крови кроликов второй группы. Относительное содержание В-лимфоцитов к этому периоду составило 22,3% и 8,8%, соответственно. У кроликов третьей контрольной группы относительное содержание Т- и В-лимфоцитов резко снизилось к 45 суткам эксперимента и продолжало постепенно уменьшаться на протяжении всего экспериментального периода. К концу срока наблюдения этот уровень составил 19,8% и 8,3%, соответственно, что свидетельствует о глубоком угнетении иммунной системы животных.

Таким образом, изучив особенности иммунного статуса животных, больных хроническим остеомиелитом, можно заключить:

1. Хронический остеомиелит характеризуется снижением относительного количества Т- и В-лимфоцитов.

2. Благоприятное течение процесса обусловлено положительной динамикой относительного содержания Т- и В-лимфоцитов до уровней, характерных для здоровых животных. Установленное снижение абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов в 1,6-2 раза свидетельствует о глубокой иммунной депрессии опытных животных.

3. Коррекция выявленных нарушений возможна только при помощи препарата направленного действия (иммуномодулятора), в роли которого может эффективно выступать ронколейкин.