Рогова Л.Н., Шестернина
Н.В., Поветкина В.Н., Шепелева Т.И.
Волгоградский
государственный медицинский университет
Активность протеолитических
ферментов слизистой оболочки желудка при разных значениях pH у крыс со стрессовой язвой желудка
Одним из ведущих механизмов в сдвиге баланса
между факторами агрессии и механизмами защиты тканей ЖКТ является повышение активности факторов пептической
агрессии, включающей пепсиногены желудочного сока и протеолитические свойства
тканей желудка [1, 2].
На протеолитическую активность оказывают влияние лизосомальные
внутриклеточные протеазы - катепсины. Было установлено, что эти ферменты
участвуют в разнообразных биологических процессах, включая деградацию белков [1]. Известно, что в условиях стресса чрезвычайного
по силе или продолжительности происходит ишемическое и свободно-радикальная деструкция тканей. При этом закономерно
изменяется рН и создаются условия для
активации ряда лизосомальных гидролаз.
Целью исследования было выявление
влияния стресса на протеолитическую активность тканей желудка при формировании
эрозивно-язвенного дефекта.
Задачи: 1) Определение протеолитической
активности слизистой желудка из поврежденных тканей и прилежащих к зоне
язвенного дефекта при разных значениях рН в исходном состоянии и на фоне
стресса.
2)
Проведение сравнительного исследования протеолитической активности в
тканях зоны изъязвления и тканях, прилежащих к ней, при разных значениях рН в исходном состоянии и на фоне стресса.
Материал и
методы
Исследование было выполнено на 11 белых крысах
линии Вистар под нембуталовым наркозом (40мг/кг). В экспериментальной серии
моделировали иммобилизационную стрессовой язву по Брехману И.И. (1973). В качестве контроля использовали показатели, полученные от животных в исходном
состоянии.
Пробы тканей получали через трое суток с момента
моделирования язвы из зоны изъязвления
и прилежащих к дефекту тканей из антральной зоны на малой кривизне желудка.
Протеолитичекую активность определяли по методу
Аnson M., Minsky
A. в модификации Амирова А.Ш. (1988) и измеряли в единицах
экстинции. Статистическая обработка данных производилась с помощью пакета
программ OfficeXP и Statistica 6.0.
Результаты
и обсуждение.
При
стрессовой язве через 3 сут с момента моделирования в тканях язвенного дефекта
при рН 6,5 пептическая активность несколько уменьшалась: с 0,04±0,007 до
0,026±0,004 ед. экст. (Р>0,1).
Также незначительно изменялись изучаемые свойства при рН 3,5 - с
0,6±0,04 до 0,48±0,025 ед. экст. (Р˂0,05). Значимо снижалась протеолитическая активность при рН 4,5: с 0,09±0,007 до 0,038±0,003 ед.
экст. (Р˂0,001), при, при рН 1,5 – с 0,45±0,05 до 0,31±0,02 ед. экст.
(Р˂0,05).
В
тканях желудка, прилежащих к зоне изъязвления, протеолитическая активность при
рН 6,5 практически не изменялась: и 0,03±0,005 ед. экст. в исходном состоянии и
0,035±0,0043 ед. экст . после моделирования (Р>0,1). При рН 4,5 она
уменьшалась с 0,09±0,008 до 0,053±0,002 ед. экст. (Р˂0,001), при рН 3,5- с
0,6±0,03 до 0,51±0,025 ед. экст. (Р˂0,05), при рН 1,5 с 0,44±0,04 до
0,35±0,02 ед. эскт.(Р>0,1).
При стрессовом изъязвлении в тканях зоны
изъязвления при рН 4,5; 3,5 и 1,5 и тканях, прилежащих к язве, при рН 4,5 и 3,5
были выявлены значимые изменения. При изучаемых значениях рН было показано уменьшение протеолитичекой активности,
связанное, очевидно, с «опустошением» клеток. Стрессовая ишемия, видимо,
приводит к выходу лизосомальных ферментов из клеток. Известно, что катепсины
лизосомального происхождения преимущественно активируются при рН от 3,0 до 4,5,
а пепсин - при рН ниже 2,0 [3]. Это даёт основание полагать что, в тканях зоны
изъязвления снижение пептический активности происходит за счёт катепсинов и
нарушения синтеза пепсина, а в тканях прилежащих к язвенному дефекту,
преимущественно за счет лизосомальных гидролаз. Сравнительный анализ
показателей протеолитической активности в тканях из предполагаемой зоны
изъязвления и тканей, прилежащих к ней, полученных у животных в исходном
состоянии, не выявил значимых отклонений. При сравнительном анализе тканей из названных зон, взятых у крыс со
стрессовой язвой, показал, что гидролитические свойства слизистой желудка уменьшаются в большей
степени в тканях язвенного дефекта при рН 4,5 по отношению к прилежащим тканям
(Р˂0,05).
Выводы. 1. На фоне острого стресса протеолитичеcкая активность снижается в тканях края язвенного дефекта при рН 4,5; 3,5 и
1,5, а в зоне, прилежащей к язве, при рН 3,5 и 4,5, при других исследуемых
значениях рН намечается только тенденция к снижению.
2. Сравнительный анализ протеолитической активности
слизистой оболочки желудка, полученной из края зоны язвенного дефекта, и из
прилежащих к ней тканей у крыс со стрессовой язвой показал значительное
снижение изучаемого свойства в зоне изъязвления при рН 4,5.
Литература.
1. Васильева О.С.
Комплексное участие цистеиновых катепсинов в раковой прогрессии // Исследовано
в России. -2009. - N. 55. – с.677
2. Никольский В.И.,
Сергатский К.И. Этиология и патогенез острых гастродуаденальных изъязвлений,
осложненных кровотечением //Вестник хирургической гатроэнтерологии. -2009.- N.
4. – с. 54
3. Титова Н.М., Савченко А.
А., Замай Т. Н. и др. Биохимия и молекулярная биология. Версия 1.0 [Электронный
ресурс]: конспект лекций. – Электрон. дан. (10 Мб). – Красноярск : ИПК СФУ. –
2008. – с.131-147