Каримов Х.Я., Махмудов Ж.Ю., Алимов Т.Р.

НИИ Гематологии и переливания крови МЗ РУз, Узбекистан ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА CD34+ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК И ЕГО МОНИТОРИНГ ПРИ ПОДГОТОВКЕ К ТЕРАПИИ МИЕЛОМНОЙ БОЛЕЗНИ АУТОЛОГИЧНЫМИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИМИ КЛЕТКАМИ

Достижения современной медицины в лечении гемобластозов невозможны без использования молекулярно-генетического и иммунофенотипического методов. При подготовке к терапии аутологичными гемопоэтическими стволовыми клетками (ТАГСК), успешно применяемой в последнее время в онкогематологической практике иммунофенотипический метод, в частности, имеет особое значение.

Определение качественных характеристик и подсчет числа предшественников гемопоэза CD34+ и CD45+, их соотношения в периферической крови пациента перед проведением аутологичной ТГСК позволяет получить ценную информацию о его готовности к проведению лечения данным методом. От результатов иммунофенотипического исследования во многом зависит успешность вышеуказанной терапии.

Цель исследования. Освоение и внедрение в клиническую практику метода определения концентрации клеток предшественников гемопоэза СD34+ у пациентов с миеломной болезнью, готовящихся к ТАГСК.

Материал и методы

В клинике НИИГиПК МЗ РУз была проведена терапия гемопоэтическими стволовыми клетками (ГСК), у 6 пациентов, находившихся на лечении в отделении гематологии с диагнозом миеломная болезнь. Забор ГСК был произведен у всех больных в среднем на протяжении 2-х дней в зависимости от концентрации CD34+ в периферической крови.

Иммунофенотипирование ГСК производилось на автоматическом цитофлюориметре BD FACSCalibur Flow Cytometer (США), с использованием программного обеспечения BD CellQuest Pro Software и набора моноклональных антител BD Stem Cell Enumeration (США). Также жизнеспособность отобранных клеточных элементов после разморозки исследовалась при помощи окрашивания клеток трепановым синим.

Статистическая обработка полученных данных с расчетом средней арифметической с её ошибкой (M±m), осуществлялась при помощи программного обеспечения Microsoft excel.

Результаты и обсуждение

В ходе иммунофенотипирования клеток крови пациентов проводилось следующее исследование: в I группе –периферической крови пациентов до афереза, во II группе – отобранных в ходе афереза клеточных элементов периферической крови пациентов. Также после замораживания отобранных ГСК пациентов и последующего размораживания исследовался процент жизнеспособных клеток.

Результаты проведенной работы показывают, что количество собранных клеточных элементов крови после афереза было достаточным для проведения ТГСК. Количественные показатели периферической крови пациентов позволяли провести выделение и сбор ГСК, необходимых для проведения терапии гемопоэтическими клетками.

В периферической крови пациентов после стимуляции «Нейпогеном» (Granocyte34), перед проведением процедуры отбора ГСК, количество CD34+ клеток в периферической крови пациентов составило в среднем 4,73±0,15 млн. на кг массы тела больного. Эффективность мобилизации ГСК в аферезном материале (гемакон) составила в среднем 5,59±0,18 млн CD34+ клеток в пересчёте на 1 кг веса больного. Пороговым значением считается 2-6 CD34+ клеток млн. на кг массы тела больного. Жизнеспособность отобранных клеток предшественников гемопоэза CD34+ составляла порядка 74,5%, что превышает необходимый минимум, достаточный для проведения ТАГСК.

Подсчёт жизнеспособных колоний CD34+ клеток необходим для определения возможности проведения ТАГСК, поскольку данный показатель напрямую характеризует успешность проведения трансплантации.

Вывод: Таким образом, успешно освоена и внедрена методика иммунофенотипирования методом проточной цитофлуорометрии, являющаяся одним из ключевых звеньев проведения терапии аутологичными гемопоэтическими стволовыми клетками.