УДК 582.284:619:616.33/34

 

Д.б.н. Чхенкели В.А.1,2,  Анисимова А.В.1,2

1ФГБОУ ВПО Иркутская государственная сельскохозяйственная академия, г. Иркутск
2Иркутский филиал ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, г. Иркутск

 

АНТИМИКРОБНАЯ И ИММУНОПРОТЕКТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА ТРАМЕТИН ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САЛЬМОНЕЛЛЕЗЕ

 

Снижение заболеваемости и предупреждение гибели молодняка сельскохозяйственных животных является одной из главных задач, стоящих перед ветеринарной наукой и практикой.  Одной  из основных причин, тормозящих полное сохранение молодняка, являются массовые желудочно-кишечные заболевания новорожденных животных [4].

Для лечения и профилактики острых желудочно-кишечных заболеваний широко используются антибиотики, сульфаниламидные препараты, нитрофураны, лекарственные растения в комплексе с иммуномодулирующими средствами, препаратами крови, витаминами. Однако это не всегда дает положительный эффект [5].

Опыт более чем полувекового использования антибиотиков в лечении инфекционных заболеваний показывает, что у патогенных микроорганизмов рано или поздно вырабатываются механизмы устойчивости к используемым препаратам [2].  В связи с этим внедрение в практику средств, обеспечивающих надежное антимикробное действие и обладающих антивирусной и иммуномодулирующей активностью, остается перспективным направлением современного фармацевтического поиска [4].

В последние десятилетия особый интерес представляет изучение возможности использования ксилотрофных базидиомицетов в качестве продуцентов биологически активных веществ и разработки на их основе ветеринарных препаратов различного назначения [3,4,6].

В Иркутском филиале ГНУ ИЭВС и ДВ Россельхозакадемии был разработан препарат Траметин, обладающий антимикробным и иммуностимулирующим действием, получаемый с использованием современных методов биотехнологии.

Цель работы: Изучить антимикробную и иммунопротекторную активность препарата Траметин при экспериментальном сальмонеллезе.

 

Материалы  и методы исследования

В работе  использовали  препарат Траметин  на основе гриба – ксилотрофа Trametes pubescences (Schumach.:Fr.) Pilat.  штамм 0663.

Экспериментальные исследования выполнялись в лаборатории биотехнологии и болезней молодняка ИФ ГНУ ИЭВС и ДВ Россельхозакадемии. 

Антимикробную и иммунопротекторную активность Траметина in vivo изучали на белых нелинейных мышах из вивария НИИ медицины труда и экологии человека Ангарского филиала ФГБУ «Восточно – Сибирского научного центра экологии человека» при моделировании сальмонеллёзной инфекции на базе вивария кафедры анатомии и ветеринарно – санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО ИрГСХА. Экспериментальный сальмонеллез моделировали на 48 белых нелинейных мышах. При заражении вводили внутрибрюшинно 0,5 мл  бактериальной суспензии патогенного штамма Salmonella еnteritidis ТИ, выделенного и идентифицированного в бактериологическом  отделе  ФГБУ Иркутская межобластная ветеринарная лаборатория (в дозе 1 млрд. микробных тел голову). При этом мышь фиксировали головой вниз, чтобы сместился кишечник. Инъекцию делали в нижнюю треть живота, сбоку от белой линии живота. Траметин  вводили мышам через 3 сут. после заражения. Препарат вводили per os  в дозах 150, 250, 300 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали тримеразин в дозе 300 мг/кг, согласно инструкции по применению.  1 г тримеразина содержит действующие вещества: сульфамеразин - 0,1 г; триметоприм - 0,02 г.

При моделировании экспериментального сальмонеллёза мыши были разделены на 6 групп по 8 особей: 1 -я группа – контрольная, интактная; 2 -я группа – контрольная, зараженная; 3 –я группа – введение траметина в дозе  150 мг/кг в течение  7 сут.; 4 -я группа – введение траметина в дозе  250 мг/кг в течение  7 сут.; 5 –я  группа -  введение траметина в дозе  300 мг/кг в течение  7 сут.; 6  -я группа  – ведение препарата тримеразин в дозе 300 мг/кг в течение 7 сут. За животными вели наблюдение, отмечали клиническую картину и фиксировали число погибших животных через 2 и 7 сут. после начала введения препаратов. При этом  проводили убой животных по 4 головы из каждой группы, определяли некоторые гематологические показатели и показатели неспецифического иммунитета. Гематологические показатели определяли с использованием автоматического гематологического анализатора Abacus Junior (Diatron, Австрия) по 18 параметрам,  включая дифференцировку лейкоцитов.

Оценку фагоцитарной активности нейтрофилов проводили по следующим показателям: фагоцитарная активность (ФА), индекс фагоцитоза (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарная ёмкость (ФЕ), опсонический индекс (ОИ). Состояние неспецифической резистентности оценивали по реакции фагоцитоза, согласно стандартной методике опсоно – фагоцитарной реакции (ОФР) [1]. В качестве тест – культуры использовали референтный штамм Staphylococcus aureus АТСС 25923.

Изучение микрофлоры  кишечника мышей  проводили с использованием стандартных микробиологических методов выделения и учёта микроорганизмов  и микробиологических сред российского производства (НИЦФ, СПб; Махачкала, Оболенск).

Результаты и их обсуждение

При моделировании экспериментального сальмонеллёза в ходе проведения эксперимента  отмечали падёж животных во второй группе: на 3 -й день после заражения пало 4 мыши, на 4 -й  - ещё 2 мыши. При вскрытии  животных  обнаружили воспаление кишечника, множественные внутренние кровоизлияния, дистрофию печени, увеличение селезёнки. У мышей 3 –й и 6 –й групп при вскрытии отмечали увеличение печени и селезёнки.

Результаты гематологических исследований представлены в таблице 1.  Установлено, что траметин в дозе 250 мг/кг оказывает более значимое действие  на инфекционный процесс, что приводит к нормализации гематологических показателей крови.

Таблица 1 - Изменение некоторых гематологических показателей при экспериментальном сальмонеллёзе

Пока-затель

Группы

1

2

3

4

5

6

1

2

3

4

5

6

 

Через 5 сут. после заражения (через 2 суток лечения)

Через  10 суток после заражения (через 7 суток после лечения)

WBC,

109

7,5

±0,2

12,5

±0,3

11,5

±0,3

8,25

±0,4

7,89

±0,3

13,0

±4,2

8,0±0,4

12,4±0,2

9,5±

0,4

8,68±0,2

7,82±0,9

17,7±0,2

RBC, 1012

8,6±

0,4

8,17

±0,7

9,62±1,1

9,21±0,9

9,25±0,7

8,94±0,4

8,61±0,3

7,95±0,6

9,96±0,8

9,75±1,2

9,6±0,7

8,1±

0,4

HGB

122±

0,3

132

±2,1

142±1,3

145±0,9

142±1,2

138±2,3

115±0,4

138±0,3

145±0,2

152±0,3

145±1,1

142±2,1

PLT, 109

225±

2

433

±4

352±6

264±8

424±2

199±1

252±3

248±5

246±4

244±2

240±1

219±3

Примечание: * - описание экспериментальных групп в тексте; WBC –лейкоциты, клеток/л; RBC – эритроциты, клеток/л; HGB –концентрация гемоглобина, г/л;  PLT – тромбоциты, клеток/л.

 

В таблице 2 показано влияние траметина и тримеразина на фагоцитарную активность.

Таблица 2 - Влияние препаратов траметин и   тримеразин  на  показатели фагоцитоза

Экспериментальные  группы

ФА

ФИ

ФЧ

ФЕ

ОИ

1

18

0,4

2,4

0,8

1,4

2

16

0,3

2,1

0,7

1,2

3

22

1,0

4,1

1,5

1,8

4

25

1,4

5,6

1,6

2,3

5

27

1,8

5,9

1,8

2,6

6

18

0,5

2,3

0,9

1,4

Примечание: ФА - фагоцитарная активность; ФИ - индекс фагоцитоза; ФЧ - фагоцитарное число; ФЕ -  фагоцитарная ёмкость; ОИ - опсонический индекс; * - номера групп в тексте.

 

 Полученные данные свидетельствуют о том, что траметин усиливает фагоцитарную активность нейтрофилов, что приводит к повышению неспецифической резистентности организма, а, следовательно, к повышению способности противостоять возбудителю заболевания на первых этапах развития инфекционного процесса. Препарат тримеразин таким действием не обладает, что, впрочем, и не предполагалось наблюдать, учитывая известные биологические свойства  этого препарата.

Динамика  кишечного микробиоценоза при использовании  траметина и тримеразина представлена в таблице 3. Анализ  полученных данных свидетельствует о том, что при использовании траметина в дозах от 150 до 300 мг/кг   (от 2 до 7 сут.) грубых изменений нормальной микрофлоры (молочнокислых бактерий,  бифидобактерий, В. subtilis) не происходит, количество бактерий группы бактерий группы кишечной палочки (БГКП) сокращается на 11,5 - 22,5 %, сальмонелл  -  на 98,5 – 100,0 %.

Таблица 3  - Динамика  кишечного микробиоценоза при использовании  препарата траметин  и  тримеразина

Микроорганизмы

Экспериментальные группы

Продолжительность применения препаратов, сут.

2

7

1

2

3

4

Молочнокислые

 бактерии

1

8,15±0,24

8,20±0,17

2

8,58±0,19

8,94±0,23

3

8,94±0,23

9,02±0,26

4

9,02±0,26

9,35±0,35

5

8,48±0,17

8,03±0,12

6

9,56±0,17

7,28±0,22

Бифидобактерии

1

9,09±0,23

10,01±0,17

2

6,68±0,14

7,91±0,23

3

7,93±0,28

9,87±0,42

4

10,56±0,24

10,58±0,23

5

10,01±0,17

10,43±0,21

6

6,63±0,12

6,92±0,25

1

2

3

4

БГКП

1

6,18±0,20

6,34±0,28

2

7,56±0,64

7,93±0,32

3

7,58±0,33

7,02±0,19

4

8,00±0,05

6,18±0,20

5

7,84±0,23

6,15±0,13

6

7,65±0,19

7,34±0,28

1

2

3

4

Энтерококки

1

6,30±0,19

6,31±0,23

2

6,28±0,34

6,31±0,16

3

6,01±0,62

6,06±0,21

4

5,98±0,19

5,65±0.31

5

6,06±0,21

5,98±0,19

6

6,30±0,19

4,73±0,22

Стафилококки

1

1,19±0,24

1,20±0,15

2

1,22±0,26

1,95±0,18

3

2,24±0,34

1,59±0,33

4

1,29±0,27

1,24±0,18

5

1,23±0,32

1,17±0,16

6

2,19±0,27

1,54±0,15

Дрожжи

1

2,21±0,31

2,25±0,19

2

2,68±0,11

2,91±0,24

3

2,78±0,68

2,94±0,22

4

2,68±0,14

2,77±0,25

5

2,70±0,11

2,97±0,25

6

2,78±0,13

2,99±0,28

Bacillus subtilis

1

3,05±0,04

4,14±0,18

2

3,08±0,07

4,10±0,19

3

2,95±0,13

2,76±0,12

4

2,32±0,21

2,24±0,22

5

2,21±0,24

2,17±0,37

6

2,02±0,43

1,94±0,21

Грибы

1

2,85±0,19

3,01±0,11

2

2,07±0,34

2,20±0,18

3

2,58±0,72

3,72±0,16

4

3,76±0,18

3,90±0,26

5

3,81±0,04

3,92±0,27

6

3,72±0,16

3,98±0,21

Сальмонеллы

1

-

-

2

10,28±0,25

10,85±0,43

3

10,76±0,43

1,25±0,56

4

10,28±0,25

0,95±0,27

5

9,32±0,12

-

6

10,32±0,25

-

 

При использовании тримеразина в дозе 3 г /кг   (от 2 до 7 сут.)   количественно изменяется вся микрофлора: сокращается как количество нормальной микрофлоры, так и патогенных бактерий, возрастает количество дрожжей и грибов. Так, при использовании траметина в дозах 150 - 300 мг/кг количество дрожжей возрастает на 23,1 - 29,3 %,  плесневых грибов - 23,6 - 32,2 %, при использовании тримеразина в дозе 300 мг/кг – на 23,1 и 32,2 %, соответственно.

Заключение

 При проведении экспериментальных исследований установлено, что препарат Траметин обладает высокой антимикробной активностью в отношении  возбудителя сальмонеллеза. При  введении  препарата  per os в дозах от 150 до 300 мг/кг   (от 2 до 7 сут.) грубых изменений нормальной микрофлоры (молочнокислых бактерий,  бифидобактерий, В. subtilis) не происходит, а количество сальмонелл  сокращается   на 98,5 - 100 %. Применение препарата в дозе 250 мг/кг  приводит к нормализации гематологических показателей.  Траметин усиливает фагоцитарную активность нейтрофилов, что свидетельствует об его значительной иммунопротекторной активности.

 

Литература:

1.     Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, С.С. Гительсон. – М.: Агропромиздат, 1989. – 272 с.

2.     Садыкова В.С. Антимикробная активность грибов рода Trichoderma и Trametes в отношении условно-патогенных микроорганизмов рода Stafylococcus / Садыкова В.С., Ковалева Г.К., Чижмотя Н. [и др.] / Сибирский медицинский журнал. – 2006. – Т. 66, вып. 8 – С. 18 – 20.

3.     Чхенкели В.А. Биологически активные вещества Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel. и их использование / В.А. Чхенкели: Монография - Новосибирск: РАСХН. СО РАСХН, ИФ ИЭВСиДВ 2006. – 287 с.

4.     Чхенкели В.А. К вопросу изучения лечебной эффективности препарата, получаемого на основе дереворазрушающего гриба Trametes pubescens (Schumach.:Fr.) Pilat / Чхенкели В.А., Чхенкели Л.Г., Горяева Н.А. [и др.] / Вестник ИрГСХА. – 2009. - № 34. – С. 68 - 75.

5.     Чхенкели В.А. Лечебно-профилактическая эффективность препарата Леван-2 на основе продуктов глубинного культивирования базидиомицета Trametes pubescens (Schumach.:Fr.) Pilat. При колибактериозе телят / Чхенкели В.А., Мартынова А.Ю., Горяева Н.А. [и др.] / Вестник ИрГСХА. – 2011. - № 43. – С. 118 – 125.

6.     Чхенкели В.А. Получение и использование в ветеринарии препаратов на основе дереворазрушающих грибов из рода Trametes: методические рекомендации / В.А. Чхенкели, В.Л. Тихонов, Н.А. Шкиль. - Иркутск: Российская академия сельскохозяйственных наук, СО; Иркутский филиал ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии. -2009. - 32 с.