Панченко
С.В., Корниевская В.Г., Фурса Н.С.*, Бородин Л.И.,
Стешенко Я.Н., Корниевский Ю.И
Запорожский
государственный медицинский университет
*Ярославская
государственная медицинская академия
ИЗУЧЕНИЕ
АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА НАДЗЕМНЫХ
ОРГАНОВ ВАЛЕРИАНЫ ГРОССГЕЙМА
Аминокислоты –
высокоактивные вещества, принимающие участие во многих жизненно важных
процессах. Аминокислоты играют большую роль в жизни человека и растений [2].
Аминокислоты – эффективные антиоксиданты, отдельные из них находят применение в
медицине. Важный источник энергии головного мозга и ЦНС – аланин. Он укрепляет
иммунную систему путем выработки антител, активно участвует в метаболизме
сахаров и органических кислот. Так, глютаминовая кислота – компонент различных
средств при заболеваниях ЦНС (последствия травм, кровоизлияний или при воспалительных заболеваниях головного
мозга, при эпилепсии). Она принимает участие в поддержании дыхания клеток
мозга, стимулирует окислительные процессы, играет непосредственную роль в
метаболизме серого и белого вещества мозга.
Соли аспарагиновой кислоты показаны в лечении заболеваний
сердечно-сосудистой системы, метионин – в лечении и профилактике цирроза
печени, диабете и др.[3]. Некоторые из
них обладают гепатопротекторными и антиоксидантными свойствами, оказывают
мембраностабилизирующий эффект, позитивно влияют на процесс энергообеспечения в
гепатоцитах [1]. По важности роли, которую играют аминокислоты в функционировании всех
живых организмов, они занимают одно из первых мест. Вместе с тем аминокислотный состав валерианы Гроссгейма изучен
в недостаточной мере.
Цель настоящего
исследования – проанализировать состав и количественное определение аминокислот
в сырье валерианы Гроссгейма на
аминокислотном анализаторе «Hitachi 835»
(Япония).
МАТЕРИАЛЫ
И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Образцы сырья были заготовлены: V.
grosshemii Worosch (в. Гроссгейма) АР Крым, Крымский заповедник, Альминское
лесничество, июнь 2012 г., V. grosshemii Worosch. (в. Гроссгейма) опытный
участок пгт.Томаковка Днепропетровская обл., июнь 2012 г.
Получали водную вытяжку в соотношении
1:15. 1 г сырья заливали 15 мл воды, нагревали на кипящей водяной бане 20 мин в колбе с обратным холодильником.
Вытяжку охлаждали, процеживали в колбу. Для проведения нингидриновой реакции
смешивали равные объемы исследуемой водной вытяжки и свежеизготовленного 0,1%
водного раствора нингидрина, нагревали и при охлаждении наблюдали появление
красно-фиолетовой окраски, которая свидетельствовала о наличии аминокислот.
Количественное определение аминокислот
проводили на аминокислотному анализаторе «Hitachi 835» (Япония) на стальной колонке 0,26 х15 см,
заполненной катионообменной смолой марки 2619 (Hitachi custom lot-Exchande Resin).
Калибровку прибора проводили с использованием стандартной смеси аминокислот,
которая содержала по 3 нм каждой кислоты. Разделение аминокислот проводили в
трех буферных системах натрий - цитратных растворов 0,18 Н рН 3,25 ; 0,3 Н рН
3,9 ; 1,6 Н рН 4,75. Нингидриновый реактив готовили с использованием метилового
эфира этиленгликоля. Цитратные буферные растворы подавали в колонку по
стандартной программе со скоростью 20 мл/час. После выхода из аналитической
колонки разделенные аминокислоты смешивали с нингидриновым реактивом в
смесительном блоке в соотношении 2:1. Реакция аминокислот с нингидриновым
реактивом проходила по 4 мин при 100ºС в реакционном нагревателе.
Колориметрические измерения окрашенных комплексов, образовавшихся в результате
реакции с нингидрином, проводилось непрерывнно и одновременно при двух длинах
волн. Первичные амины образовывали соединения пурпурной окраски, которое
измерялось при длине волны 570 нм , а вторичные (пролин и оксипролин ) -
соединения желтого цвета , которые измеряли при длине волны 440 нм.
Количественная оценка содержания аминокислот проводилась автоматически с
измерением пиков идентифицированных компонентов. Расчет каждого из них проводили
в аномалиях в аликвотах, непосредственно использовали для анализа.
РЕЗУЛЬТАТЫ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Сравнительная характеристика аминокислот стеблей и
листьев валерианы Гроссгейма дикорастущей и культивируемой представлены в
табл.1 и табл.2.
Таблица 1. Содержание (мг в 100 мг) заменимых аминокислот в
листьях и стеблях валерианы Гроссгейма
|
Амино-кислота |
Мол. вес |
Valeriana grossheimii
Worosch. |
Амино-кислота |
Мол. вес |
Valeriana grossheimii
Worosch. |
|
|||||||||
|
КС |
КЛ |
Т Л |
ТС |
КС |
КЛ |
ТЛ |
ТС. |
|
|||||||
|
Моноаминомонокарбоновые кислоты |
Диаминомонокарбоновые кислоты |
|
|||||||||||||
|
Ala |
89,1 |
0,65 |
0,70 |
1,25 |
0,59 |
Arg |
174,2 |
0,30 |
0,48 |
0,31 |
0,24 |
|
|||
|
Gly |
75,1 |
1,20 |
2,03 |
1,84 |
0,87 |
|
|||||||||
|
Ser |
105,1 |
0,67 |
1,04 |
1,21 |
0,57 |
Сумма кислот |
0,30 |
0,48 |
0,31 |
0,24 |
|
||||
|
Туг |
181,2 |
0,19 |
0,33 |
0,48 |
0,23 |
Гетероциклические
кислоты |
|
|
|||||||
|
Cys |
240,3 |
0,06 |
0,10 |
0,22 |
0,10 |
His |
155,2 |
0,33 |
0,51 |
0,63 |
0,30 |
|
|||
|
Сумма кислот |
2,77 |
4,20 |
5,00 |
2,36 |
Pro |
115,1 |
0,43 |
0,68 |
0,83 |
0,39 |
|
||||
|
Моноаминодикарбоновые кислоты |
|
||||||||||||||
|
Asp |
133,1 |
0,91 |
1,44 |
2,27 |
0,84 |
Сумма кислот |
0,76 |
1,19 |
1,46 |
0,69 |
|
||||
|
Glu |
147,1 |
0,18 |
0,39 |
0,35 |
0,20 |
Сумма заменимых кислот |
4,92 |
7,70 |
9,39 |
4,33 |
|
||||
|
Сумма кислот |
1,09 |
1,83 |
2,62 |
1,04 |
|
||||||||||
Таблица 2. Содержание (мг в 100 мг) незаменимых аминокислот в
листьях и стеблях валерианы Гроссгейма
|
Амино-кислота |
Мол. вес |
Valeriana grossheimii Worosch. |
Аминокислота |
Мол. вес |
Valeriana grossheimii Worosch. |
||||||||||
|
КС |
КЛ |
ТЛ |
ТС |
КС |
КЛ |
Т Л |
ТС |
||||||||
|
Моноаминомонокарбоновые кислоты |
Диаминомонокарбоновые кислоты |
||||||||||||||
|
Val |
117,1 |
0,32 |
0,50 |
0,61 |
0,29 |
Lys |
146,2 |
0,38 |
0,59 |
0,98 |
0,53 |
||||
|
Met |
149,2 |
0,23 |
0,36 |
0,43 |
0,15 |
Сумма д/кислот |
0,38 |
0,59 |
0,98 |
0,53 |
|||||
|
Thr |
119,1 |
0,48 |
0,75 |
0,46 |
0,31 |
Сумма незаменимых кислот |
2,57 |
4,03 |
4,87 |
2,41 |
|||||
|
Phe |
165,2 |
0,27 |
0,43 |
0,90 |
0,43 |
||||||||||
|
Iso-Ley |
131,2 |
0,33 |
0,65 |
0,63 |
0,30 |
||||||||||
|
Ley |
131,2 |
0,56 |
0,75 |
0,86 |
0,40 |
||||||||||
|
Сумма кислот |
2,19 |
3,44 |
3,89 |
1,88 |
Общая сумма |
7,49 |
11,73 |
14,26 |
6,74 |
||||||
Примечание: КС – Крым стебли; КЛ – Крым листья; ТС – п.г.т.Томаковка
Днепропетровская обл.стебли; ТЛ – п.г.т.Томаковка Днепропетровская обл. листья.
Анализируя полученные данные табл.1 видно,
что заменимые аминокислоты в листьях и стеблях в. Гроссгейма располагаються в такой последовательности: по
степени уменьшения глицин, аспарагинова кислота, серин, аланин, пролин,
гистидин, аргинин, тирозин, глутаминова кислота, цистин.
Анализируя полученные данные табл.2 видно,
что незаменимые аминокислоты в листьях и стеблях в. Гроссгейма располагаються в такой последовательности:
по степени уменьшения лейцин, треонин, изолейцин, лизин, валин, фенилаланин,
метионин.
Сумма заменимых и незаменимых аминокислот
преобладает в культивируемой в. Гроссгейма.
Cледовательно,
анализ аминокислотного состава листьев и стеблей валерианы Гроссгейма вызывает не только интерес для расширения представлений об их
биологически активных веществах, но и для виявления родственных связей между
видами валерианы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. В листях и стеблях валерианы Гроссгейма с помощью
аминокислотного анализатора «Hitachi»
выявлено 17 аминокислот, среди которых 7 незаменимых (Val, Met, Ley, Thr, Phe, Iso-Ley, Lys) и 10
заменимых (Aln, Arg, Asp, His, Gly, Glu, Pro, Cys, Ser, Tyr).
2. Установлено, что среди незаменимых аминокислот
валерианы Гроссгейма доминировал лейцин, а заменимых – глицин и
аспарагиновая кислота.
ЛИТЕРАТУРА
1. Глутаргин как гепатопротекторное средство в
комплексной терапии больных урогенитальным хламидозом / Г.И. Мавров [и др.] //
Вестник дерматологии и венерологии.- 2004.- №2.- С.43-45.
2. Кретович В.Л. Биохимия растений: учебник /
В.Л.Кретович.-М.: Высшая школа,1980.- 448с.
3. Фурса Н.С. Хромато-масс-спектрометрический анализ
компонентного состава этанольного извлечения семян сорта Воронежский амаранта
печального до и после экстракции гексаном / Н.С.Фурса, А.А.Парфенов, Ю.А.
Джурко, И.М.Коренская // Вестник Воронеж. гос.ун-та. Серия: Химия. Биология.
Фармация.- 2013. - №1. - С. 240-247.
Cведения об авторах:
Панченко
С.В., старший лаборант кафедры фармакогнозии, фармакологии
и ботаники Запорожского государственного медицинского университета;
Корниевская В.Г., к.фарм.н., доцент кафедры фармакогнозии,
фармакологии и ботаники Запорожского государственного медицинского университета;
Фурса Н.С., д. фарм. н., профессор кафедры
фармакогнозии и фармацевтической технологии Ярославской государственной
медицинской академии;
Бородин Л.И., к.фарм.н.,доцент кафедри фармакогнозии,
фармхимии, ЭОФ факультета последипломной подготовки ЗГМУ;
Стешенко Я.М., студентка 2 курса
фармацевтического факультета ЗГМУ
Корниевский Ю.И., к.фарм.н., доцент кафедры фармакогнозии,
фармакологии и ботаники Запорожского государственного медицинского университета.
E-mail:kornievsk@gmail.com