Д.м.н. Чистяков С.И., д.б.н. Балашов В.П.

НИ ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет», Россия

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ ФОСФОРИЛУСКУСНОЙ КИСЛОТЫ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ СТРЕСС-ПРОТЕКТОРОВ В АНЕСТЕЗИОЛОГИИ

Периоперационный стресс в анестезиологии и реаниматологии на сегодняшний день остается серьезнейшей проблемой из-за последствий, к которым приводят его различные осложнения в до- и послеоперационном периоде[1].Учитывая, что существующие современные препараты не всегда обеспечивают надежную профилактику стресс-индуцированных состояний в анестезиологической практике, актуальность поиска эффективных и безопасных средств для профилактики и лечения периоперационного стресса очень высока.

Эксперименты проведены на 62 белых мышах. Стресс воспроизводился иммобилизацией мышей по 3 часа в сутки в течение 3 суток [4]. Животных на 4 сутки забивали декапитацией под эфирным наркозом. Учитывая, что одним из проявлений стресса является повреждение слизистой оболочки желудка (СОЖ), мы изучали морфологические изменения в СОЖ как маркер стресса. Гистологические микропрепараты СОЖ окрашивали альциановым синим для выявления кислыхмукополисахаридов, являющихся компонентом защитного слизисто-бикарбонатного барьера[3]. Данный метод позволял оценить способность секреторных клеток к слизеобразованию и определить степень сохранности слизистого барьера желудка.

Микроскопию проводили при помощи светового микроскопа Jenaval (Австрия) при малом (10х10х1,25) и большом увеличении (10х40х1,25). Фотосъёмку препаратов производили цифровой камерой САМ V 200 (Австрия) с обработкой изображения в AdobePhotoshop 7.0 и морфометрическим исследованием в программе Видеотест – Мастер Морфология (2005). Показатели “площадь защиты” рассчитывали в процентах от площади кадра препарата СОЖ. В качестве стресс-протекторного средства использовали трифторуксуснокислую соль 4 – диметиламинофенил – 2 – хлорэтокси-фосфорилацетилгидразида с лабораторным шифром (ХС 3635). Вещество вводили в «профилактическом» (до воспроизведения стресса) и «лечебном» (после воспроизведения стресса) режимах в дозе 4,3 мг/кг внутрибрюшинно. В качестве препарата сравнения использовали Н₂-блокатор фамотидин [2], вводился также внутрибрюшинно в дозе 0,125 мг/кг до моделирования стресса, т.е. в «профилактическом» режиме.

Микроскопия показала, что в СОЖ интактного животного при окраске альциановым синим выявляются кислые мукополисахариды, вырабатываемые слизеобразующими клетками и являющиеся основным компонентом слизистого барьера желудка. В железах слизь выявляется в основном в верхних и средних отделах. Количество секрета в слизистых клетках различается в разных участках СОЖ. В некоторых участках отмечена интенсивная реакция с красителем, а в некоторых лишь лёгкое прокрашивание апикальных поверхностей клеток (рис. 1).

Рис. 1. Слизистая оболочка желудка интактного животного (х 180); окраска: альциановый синий.

Стресс-индуцированная гастропатия характеризовалась угнетением выработки слизи железами желудка (рис. 2; А, Б). Уменьшение количества слизи отмечалось как на поверхности слизистой оболочки, и в её базальной части.

А Б

Рис. 2. Слизистая оболочка желудка мышей группы стресс-контроля (х 180); окраска: альциановый синий. А и Б – различные участки СОЖ

Гастропротекторное действие фамотидина, очевидно, не распространяется на активность слизеобразующих элементов СОЖ. Количественное выражение этот факт нашел в показателе «площадь защиты» (таблица 1), который составил 0,21%, что практически не отличается от уровня стресс-контроля (0,23 %).

Таблица 1.

Степень сохранности слизистого барьера желудка при воздействии фамотидином и ХС 3635

	Интактные животные	Стресс-контроль	Стресс + Фамотидин	Стресс + ХС3635проф.
Площадь защиты, %	0,81±0,023	0,23±0,051ª	0,21±0,064	0,72±0,072*

Примечание: а – отличия от соответствующих показателей у интактных животных достоверны при р<0,05; * – отличия от соответствующих показателей животных группы стресс-контроля достоверны при р<0,05.

При хорошей сохранности слизистой оболочки на её поверхности отмечались лишь единичные "островки" слизи при практически полном отсутствии её резервов в глубоких слоях (рис.3; А, Б).

А Б

Рис.3. Слизистая оболочка желудка на фоне фамотидина при стресс-индуцированном повреждении (А – х 180; Б – х 400); окраска: альциановыйсиний.

«Профилактическое» введение ХС 3635 улучшало состояние слизистого барьера в виде увеличения количества слизи в просвете желёз и на поверхности СОЖ и на этом фоне – повышение сохранности клеток СОЖ (рис. 4; А, Б).

А Б

Рис.4. Участки слизистой оболочки желудка на фоне профилактического введения ХС 3635 при стресс-индуцированной гастропатии. Окраска: альциановый синий: (А - х 180, Б - х 400).

Это подтверждается и показателем «площадь защиты» (таблица 1), который увеличился втрое по сравнению с уровнем стресс-контроля и достоверно не отличался от показателя интактных животных.

При «лечебном» режиме введения ХС 3635 (рис.5) показатель «площадь защиты» возрастал до 0,5% (р>0,05) (рис. 6), однако не достигал значений интактных животных, что свидетельствует лишь о тенденции к улучшению состояния слизистого барьера.

Рис.5. Участок слизистой оболочки желудка на фоне «лечебного» введения ХС 3635 при стресс-индуцированной гастропатии (х 180). Окраска: альциановый синий.

Площадь

защиты,

*

а

Рис.6. Количественная характеристика состояния защитного слизистого барьера желудка при стрессе и на фоне введения ХС 3635 в профилактическом и лечебном режимах (4,3 мг/кг); а – отличия от значения “интактные” достоверны при p<0,05; * - отличия от значения “стресс” достоверны при p<0,05.

Таким образом, изученные нами протекторные свойства производного фенилфосфорилуксусной кислоты на примере слизеобразования в эпителии желудка на фоне стресс-индуцированной гастропатии и её коррекции подтверждает наличие у соединения 3635 стресс-протекторных свойств, проявляющихся увеличением слизеобразующей активности эпителиоцитов и степени сохранности слизистого барьера желудка.

Литература:

1. Гвак Г.В. Хирургический стресс. Клинико-лабораторные параллели в условиях активации естественных стресс-лимитирующих систем/Г. В. Гвак, В.Г. Еременко, Е.А. Иванов, В.А. Сманцер // Анестезиол. и реаниматол. – 2004. – № 4. – С. 33 – 35.

2. Логинов А.Ф. Возможности блокаторов Н₂-гистаминовых

рецепторов в современной гастроэнтерологии / А.Ф. Логинов, Е.А. Белоусова // Consiliummedicum. – 2003. – Т.5. – №10. – С. 23-27.

3. Семченко В.В. Гистологическая техника: учебное пособие. – 3-е изд., доп. и перераб. / В.В. Сёмченко, С.А. Барашкова, В.Н. Ноздрин и соавт. // Омск – Орел: Омская областная типография. – 2006. – 290 с.

4. Desiderato O. Development of gastric ulcers in rats following stress termination / O. Desiderato, J. MacKinnon, H. Hissom // J. comp. physiol. Psychol. – 1974. – Vol. 87. – P. 208 – 214.