Попов С.С.¹, Пашков А.Н.¹, Шульгин К.К.², Величко М.В.², Семенова О.С.^{1 1}Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко,

²Воронежский государственный университет, Россия

Активность супероксиддисмутазы у больных сахарным диабетом 2 типа, осложненном стеатогепатитом, при базисном лечении и комбинированной терапии с эпифамином

У больных сахарным диабетом 2 типа, сопряженным с ожирением, в ткани печени, как правило, повышено содержание свободных жирных кислот. Кроме того, известно, что при ожирении помимо возрастания уровня свободных жирных кислот в жировой ткани и крови развивается резистентность к инсулину. Накопление свободных жирных кислот может быть причиной нарушения функции печени, поскольку жирные кислоты химически активны и стимулируют свободнорадикальное окисление (СО) биомолекул. Образующиеся при этом активные формы кислорода (АФК) могут повреждать биологические мембраны гепатоцитов, что вызывает воспалительные процессы в печени, и как следствие неалкогольный стеатогепатит [6, 7]. В результате нарушения равновесия между избыточным образованием АФК и активностью антиоксидантной защиты (АОЗ) организма развивается оксидативный стресс. К ферментативному звену антиоксидантной системы относится супероксиддисмутаза (СОД), которая катализирует превращение супероксидного анионрадикала с образованием пероксида водорода.

В связи с необходимостью поиска новых эффективных средств для антиоксидантной терапии приобретает актуальность исследование антирадикальной активности гормона диффузной нейроэндокринной системы – мелатонина. Известно, что данный гормон играет роль регулятора многих физиологических функций: участвует в формировании суточных биоритмов, торможении некоторых функций гипофиза, регуляции иммунных реакций, оказывает снотворный и седативный эффекты [1]. В данной работе мы использовались эпифамин. Препарат эпифамин относится к классу цитомединов и является пептидным биорегулятором, тропным к эпиталамо-эпифизарной области и способным обеспечивать коррекцию содержания мелатонина в организме. В предыдущих работах нами было выявлено существенное влияние эпифамина на антиоксидантную систему организма при алкогольном гепатите [4].

Таким образом, целью настоящей работы явилось исследование активности СОД в сыворотке крови больных неалкогольным стеатогепатитом, развивающимся на фоне сахарного диабета 2 типа, при базисном лечении и комбинированной терапии, включающей прием эпифамина.

Материалы и методы. В клиническое исследование было включено 61 человек с неалкогольным гепатитом, развивающимся вследствие сахарного диабета 2 типа. Из них 20 мужчин (32,8%) и 41 женщина (67,2%). Возраст больных составлял от 45 до 80 лет: средний возраст – 62,5±17,5 года. Средняя продолжительность заболевания составляла 3,3±8,7 лет. Диагноз неалкогольного стеатогепатита был поставлен на основании клинических признаков заболевания, биохимического исследования крови, данных ультразвукового исследования печени. Из сопутствующих заболеваний чаще всего регистрировались следующие: ожирение – 61 больной (100%), гипертоническая болезнь – 51 больной (83,6%), хроническая сердечная недостаточность – 42 больных (68,9%), хронический гастрит – 30 больных (49,2%).

Контрольную группу составили 65 практически здоровых лиц с нормальными показателями общего и биохимического анализов крови.

Критериями исключения из исследования явились: вирусные гепатиты, злокачественные новообразования, острый инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения.

Больные были разделены на 2 группы. Первая группа пациентов (33 человека) находилась на базисном лечении: сахароснижающая терапия (таблетированные препараты сульфонилмочевины и бигуаниды), гепатопротекторы: карсил (эквивалент силимарина 35 мг) по 2 таблетки 3 раза в день во время еды, эссливер форте (эссенциальные фосфолипиды 300 мг) по 2 таблетки 3 раза в день в течение 10 дней. Вторая группа пациентов (28 человек) дополнительно к базисной терапии получала эпифамин (ООО «Клиника Института биорегуляции и геронтологии», Санкт-Петербург, Россия; удостоверение качества и безопасности №103, регистрационное удостоверение № 004471.Р.643.04.2003, биологически активная добавка) по 1 таблетке (10 мг) 3 раза в день за 10-15 минут до еды в течение 7 дней.

В ходе клинического исследования использовали сыворотку крови больных, находящихся на лечении в стационаре. Кровь для исследования забиралась в пробирки типа «вакутейнер» в утреннее время, натощак, из локтевой вены.

Активность СОД определяли на спектрофотометре Hitachi U-1900 (Япония) по ингибированию скорости восстановления нитросинего тетразолия в неэнзиматической системе феназинметасульфата и НАДН при длине волны 540 нм [3]. За единицу активности СОД принимали количество фермента, необходимого для 50%-го ингибирования восстановления нитросинего тетразолия. Активность фермента выражали в ферментативных единицах (Е) в расчете на мл сыворотки и в виде удельной активности. Общий белок определяли унифицированным методом по биуретовой реакции [2].

В работе использовали НАДН (Sigma, США), трис, ЭДТА («Reanal», Венгрия), остальные реактивы отечественного производства марки «хч» или «чда». Статистическая обработка материала включала использование стандартных методов вариационной статистики (расчет средних значений (М), ошибки средних значений (m), t-критерия Стьюдента) и непараметрического теста Вилкоксона с использованием прикладных программ “STATISTICA 6.0”. Достоверными считались различия при р≤0,05.

Полученные результаты и их обсуждение. При неалкогольном стеатогепатите, развивающемся при сахарном диабете 2 типа, активность СОД, выраженная в Е на мл сыворотки крови, уменьшалась в 1,44 (р≤0,05) раза по сравнению с нормой. При этом удельная активность фермента снижалась на 30,6% (р≤0,05). Выявленные изменения могут быть связаны с повышением уровня антител к СОД в условиях патологии, что может приводить к угнетению антиоксидантной активности фермента [5].

После стандартной терапии происходило повышение как активности СОД, выраженной в виде Е на мл сыворотки, (в среднем на 9,7%), так и удельной ферментативной активности (в среднем на 6,4%) по сравнению с соответствующими показателями, полученными до проведения лечения.

После комбинированного лечения с эпифамином наблюдалось увеличение активности СОД, выраженной на Е на мл сыворотки, на 10,7% (р≤0,05); удельная активности фермента возрастала в среднем на 9,6%.

Таким образом, согласно полученным результатам, при неалкогольном стеатогепатите, развивающемся на фоне сахарного диабета 2 типа, прием эпифамина способствует более существенному изменению активности СОД в сторону нормы. Это, вероятно, может происходить из-за снижения уровня антител к ферменту и, как следствие, стимуляции ферментативной активности, обеспечивающей торможение процессов СО.

Литература:

1. Арушанян Э.Б., Арушанян Л.Г., Симонов И.А. Физиологические и фармакологические особенности эпифизарных пептидов // Экспер. и клин. фармакол. – 2001. – Т. 64, №.4. – С.73–79.

2. Матасова Л.В.  Лабораторные работы и задачи по биохимии/ Воронеж.: ВГУ, 2006.

3. Матюшин Б.Н. Определение супероксиддисмутазной активности в материале пункционной биопсии печени при ее хроническом поражении // Лаб. дело. 1991. № 7. С. 16-19.

4. Попов С.С., Шульгин К.К., Пашков А.Н. Особенности функционирования глутатионовой системы и NADPH-генерирующих ферментов в крови больных лекарственным гепатитом при комбинированной терапии с эпифамином Биомедицинская химия т. 58, № 1 , 2012 с. 104-111.

5. Шилова Л. Н., Емельянов Н. Н. Значение антител к эритроцитарной супероксиддисмутазе в изменении ее активности при системной склеродермии В. 3 (39). 2011, 39-41.

6. Neuschwander-Tetri B.A., Roll F.J. Chemotactic activity for human PMN generated during ethanol metabolism by rat hepatocytes: role of glutathione and glutathione peroxidase. Biochem Biophys Res Commun 1990;167:1170—6.

7. Powell E.E., Cooksley W.G., Hanson R., Searle J., Halliday J.W., Powell L.W. The natural history of nonalcoholic steatohepatitis: a follow-up study of forty-two patients for up to 21 years. Hepatology 1990;11:74—80.