Кузнецова О.М., Назаренко А.Ю., Березов Т.Т.

ФГБОУ ВПО Российский университет дружбы народов, Россия

Матриксные металлопротеиназы при раке молочной железы в ткани опухоли и гистологически неизмененной ткани

В процессах инвазии, метастазирования и неоангиогенеза задействовано несколько классов протеиназ, прежде всего мультигенное семейство матриксных металлопротеиназ (ММП), названных так благодаря их способности специфически гидролизовать все основные белки внеклеточного матрикса. В ходе нашего исследования были определены концентрации ММП2, ММП7 и ММП9 в тканях опухоли и неизмененной ткани молочной железы.

Материалы и методы. В настоящее исследование включены 50 женщин, больных раком молочной железы (РМЖ). Средний возраст обследованных больных раком молочной железы составил 55 лет. У 22,2% пациенток выявлена I стадия, у 53,3% – II стадия и у 24,4% – III стадия заболевания. У 48,9% больных РМЖ при первичном обследовании выявлены метастазы в регионарные лимфатические узлы, при этом отдаленные метастазы в момент начала лечения отсутствовали. У 52% пациенток выявлены опухолевые эмболы в кровеносных сосудах первичной опухоли. Размер первичной опухоли колебался от 1 до 8,5 см. Иммуноферментный анализ ММП в экстрактах тканей проводили с помощью стандартных наборов для прямого иммуноферментного анализа: «Human/Mouse/Rat MMP-2 (total)», «Human MMP-7 (total)», «Human MMP-9 (total)» (все – Quantikine^Ò, R&D Systems, США). Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микропланшет EL_X800 (Bio-Tek Instruments, Inc., США). Концентрацию исследованных показателей в тканях определяли в нанограммах (нг) на 1 мг общего белка. Белок определяли по методу Лоури.

В качестве контроля содержание исследуемых белков определяли в экстрактах из участков гистологически неизмененной ткани молочной железы, удаленных от края опухоли на расстоянии 3,0 см. Иммуногистохимическое исследование рецепторов выполнено на парафиновых срезах ткани опухолей с помощью биотинстрептавидинового иммунопероксидазного метода с моноклональными антителами к рецепторам эстрогенов (РЭ), рецепторам прогестерона (РП) и HER-2/neu фирмы «Dako» (Дания). Оценку реакции в клетках первичных злокачественных опухолей молочной железы проводили полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания и количества антиген-позитивных клеток.

Иммуногистохимическую реакцию оценивали по интенсивности экспрессии РЭ и РП в цитоплазме и ядрах опухолевых клеток, а в соответствии с результатами пациенты были разделены на группы: 1) группа - отсутствие экспрессии рецепторов (РЭ-, РП-); 2) – наличие экспрессии рецепторов (РЭ+, РП+). По интенсивности экспрессии белка HER-2/neu в мембранах клеток опухоли больные были разделены на группы: 1) группа - отсутствие экспрессии белка - «-/+»; 2) группа - наличие экспрессии белка – «++/+++». Результаты реакций с антигеном выражали в процентах с учетом количества окрашенных клеток на 100 учтенных опухолевых клеток в 5 репрезентативных полях зрения, при этом учитывали только среднюю и высокую степени интенсивности окрашивания компонентов опухолевой клетки.

Результаты и выводы. Количественное содержание ММР2 в нг/мг белка составило 10,5 (7,2-17,0) в неизмененной ткани и 40,1(26,2 – 56,4) в опухоли (медиана - квартили); ММР7 0,2 (0,1- 0,3) и 0,7 (0,4 – 1,6) соответственно; ММР9 2,7 (0 – 15,5) и 8,2 (0,3 – 19,1). Анализ полученных результатов выявил у преобладающего числа больных раком молочной железы достоверное повышение содержания ММР2 и ММР7 в первичной опухоли по сравнению с неизмененной тканью молочной железы. Различия в содержании ММР9 в неизмененной ткани и опухоли больных РМЖ были недостоверны. Содержание ММР2 в первичной опухоли повышается пропорционально возрасту больных раком молочной железы, в то же время содержание ММР7 и ММР9 не связано с возрастом больных раком молочной железы. При анализе содержания металлопротеиназ 2, 7 и 9 типа в опухоли больных раком молочной железы с учетом репродуктивной функции пациенток также не установлено достоверных различий (р>0,05). Однако наибольшие уровни металлопротеиназы 2 типа выявлены в ткани опухолей больных раком молочной железы в постменопаузе. Достоверной связи между содержанием металлопротеиназ 2, 7 и 9 типов в опухоли больных раком молочной железы и стадией заболевания не установлено. Наибольшие медианы содержания металлопротеиназ 2, 7 и 9 обнаружены в первичной опухоли больных раком молочной железы с наличием множественных метастазов в регионарных лимфатических узлах, однако различия статистически недостоверны (p>0,05). Не установлено достоверной связи между содержанием металлопротеиназ 2 и 7 типа со степенью злокачественности опухоли. В то же время, содержание ММР9 в опухоли больных раком молочной железы достоверно увеличивалось при повышении степени ее злокачественности. Не выявлено достоверных различий в показателях ММР2, ММР7 и ММР9 при наличии опухолевых эмболов в кровеносных сосудах опухоли у больных РМЖ. Содержание всех металлопротеиназ в опухоли больных РМЖ увеличивалось при размере опухоли более 4,0 см. Более высокое содержание ММР2 при наличии в опухоли больных РМЖ рецепторов половых стероидных гормонов (РЭ и РП). Напротив более высокие показатели ММР7 и ММР9 обнаружены в опухолях, не содержащих РЭ и РП, а также при выявлении экспрессии HER-2/neu.

Многофакторный анализ показал, что в наибольшей степени повышение ММР2 в опухоли молочной железы было связано с рецепторным статусом опухоли и репродуктивным статусом больной (p<0,05), и в меньшей степени с другими клинико-морфологическими характеристиками самой опухоли (р>0,05). При этом, более высокое его содержание обнаружено при РЭ-, РП- и HER-2/neu+ опухолях, а также размерах новообразования более 4,0 см. Повышение содержания ММР9 в первичной опухоли больных РМЖ наиболее тесно было связано со степенью злокачественности новообразования (р=0,011).