Попов С.С.¹, Пашков А.Н.¹, Шульгин К.К.², Золоедов В.И.¹, Купцова Г.Н.¹

¹Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко,

²Воронежский государственный университет, Россия

Особенности изменения активности каталазы при сахарном диабете 2 типа, осложненным стеатогепатитом, при включении эпифамина в базисное лечение

Неалкогольный стеатогепатит чаще всего протекает доброкачественно и бессимптомно, однако, в ряде случаев развиваются цирроз печени, портальная гипертензия и печеночная недостаточность. Жировая дистрофия печени часто развивается у больных сахарным диабетом 2 типа с ожирением и дислипидемией. Накопление липидов в гепатоцитах может быть следствием избыточного поступления свободных жирных кислот в печень, а также усиления синтеза и снижения скорости β-окисления жирных кислот. [3]. При этом активизируется пероксидное окисление липидов, что приводит к усиленному образованию свободных радикалов и окислительному стрессу. К ферментам антиоксидантной защиты (АОЗ) организма относится каталаза. Данный фермент катализирует разложение пероксида водорода до воды, препятствуя образованию из Н₂О₂ гидроксильного радикала в реакции Фентона.

В данной работе для коррекции свободнорадикального гомеостаза мы использовали эпифамин. Препарат эпифамин, относится к классу цитомединов и является пептидным биорегулятором, тропным к эпиталамо-эпифизарной области, способным обеспечивать коррекцию содержания мелатонина в организме [1]. В наших предыдущих работах было выявлено положительное влияние эпифамина на антиоксидантную систему организма при лекарственном гепатите [2].

Таким образом, целью настоящей работы явилось исследование активности каталазы в сыворотке крови пациентов с неалкогольным стеатогепатитом, развивающимся на фоне сахарного диабета 2 типа, а также после проведения базисного лечения больных и комбинированной терапии, включающей прием эпифамина.

Материалы и методы. В клиническое исследование было включено 61 человек с неалкогольным гепатитом, развивающимся вследствие сахарного диабета 2 типа. Из них 20 мужчин (32,8%) и 41 женщина (67,2%). Возраст больных составлял от 45 до 80 лет: средний возраст – 62,5±17,5 года. Средняя продолжительность заболевания составляла 3,3±8,7 лет. Диагноз неалкогольного стеатогепатита был поставлен на основании клинических признаков заболевания, биохимического исследования крови, данных ультразвукового исследования печени. Из сопутствующих заболеваний чаще всего регистрировались следующие: ожирение – 61 больной (100%), гипертоническая болезнь – 51 больной (83,6%), хроническая сердечная недостаточность – 42 больных (68,9%), хронический гастрит – 30 больных (49,2%).

Контрольную группу составили 65 практически здоровых лиц с нормальными показателями общего и биохимического анализов крови.

Критериями исключения из исследования явились: вирусные гепатиты, злокачественные новообразования, острый инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения.

Больные были разделены на 2 группы. Первая группа пациентов (33 человека) находилась на базисном лечении: сахароснижающая терапия (таблетированные препараты сульфонилмочевины и бигуаниды), гепатопротекторы: карсил (эквивалент силимарина 35 мг) по 2 таблетки 3 раза в день во время еды, эссливер форте (эссенциальные фосфолипиды 300 мг) по 2 таблетки 3 раза в день в течение 10 дней. Вторая группа пациентов (28 человек) дополнительно к базисной терапии получала эпифамин (ООО «Клиника Института биорегуляции и геронтологии», Санкт-Петербург, Россия; удостоверение качества и безопасности №103, регистрационное удостоверение № 004471.Р.643.04.2003, биологически активная добавка) по 1 таблетке (10 мг) 3 раза в день за 10-15 минут до еды в течение 7 дней.

В ходе клинического исследования использовали сыворотку крови больных, находящихся на лечении в стационаре. Кровь для исследования забиралась в пробирки типа «вакутейнер» в утреннее время, натощак, из локтевой вены.

Активность каталазы определяли спектрофотометрически на спектрофотометре Hitachi U-1900 (Япония) при длине волны 410 нм, с помощью метода, основанном на способности пероксида водорода образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс. Активность фермента выражали в ферментативных единицах (Е) в расчете на мл сыворотки и в виде удельной активности. Общий белок определяли унифицированным методом по биуретовой реакции.

В работе использовали НАДН (Sigma, США), трис, ЭДТА («Reanal», Венгрия), остальные реактивы отечественного производства марки «хч» или «чда». Статистическая обработка материала включала использование стандартных методов вариационной статистики (расчет средних значений (М), ошибки средних значений (m), t-критерия Стьюдента) и непараметрического теста Вилкоксона с использованием прикладных программ “STATISTICA 6.0”. Достоверными считались различия при р≤0,05.

Полученные результаты и их обсуждение. При неалкогольном стеатогепатите, развивающемся при сахарном диабете 2 типа, активность каталазы, выраженная в Е на мл сыворотки крови, возрастала в 2,2 (р≤0,05) раза по сравнению с нормой. При этом удельная активность фермента повышалась в 1,4 (р≤0,05) раза.

После базисной терапии достоверных изменений, как удельной ферментативной активности, так и активности каталазы, выраженной в расчете на мл сыворотки, не наблюдалось.

После комбинированного лечения с эпифамином наблюдалось увеличение активности, выраженной в виде Е на мл сыворотки, в среднем на 7%, удельной активности - на 6%. Можно предполагать, что при приеме эпифамина, сопровождающемся возрастанием уровня мелатонина в организме, могла происходить индукция фермента под действием данного гормона [5]. Кроме того, в литературе имеются сведения о том, что мелатонин при окислительном стрессе защищает молекулу каталазы от свободнорадикального повреждения [4]. Вместе с тем, незначительные изменения активности каталазы могли определяться влиянием вышеотмеченных факторов, с одной стороны, и снижением степени мобилизации активности данного антиоксидантного фермента в условиях торможения свободнорадикальных процессов под действием эпифамина.

Таким образом, активность каталазы существенно возрастала в патологическом состоянии, что, по-видимому, отражало мобилизацию данного звена АОЗ в ответ на развитие оксидативного стресса в организме пациентов. При включении эпифамина в лечение наблюдалась тенденция дальнейшего возрастания каталазной активности, что могло иметь значение с точки зрения коррекции свободнорадикального гомеостаза при патологии.

Литература:

1. Арушанян Э.Б., Арушанян Л.Г., Симонов И.А. Физиологические и фармакологические особенности эпифизарных пептидов // Экспер. и клин. фармакол. – 2001. – Т. 64, №.4. – С.73–79

2. Попов С.С., Шульгин К.К., Пашков А.Н. Особенности функционирования глутатионовой системы и NADPH-генерирующих ферментов в крови больных лекарственным гепатитом при комбинированной терапии с эпифамином Биомедицинская химия  Т. 58, № 1  2012 С. 104-111

3. Dianzani M.U. Biochemical aspects of fatty liver. In: Meeks R.G., Harrison S.D., Bull R.J.. Hepatotoxicology. Boca Raton, FL: CRC Pr 1991;327-399

4. Pei Z., Pang S.F., Cheung T.F Administration of melatonin after onset of ischemia reduces the volume of cerebral infarction in a rat middle cerebral artery occlusion stroke model //Stroke – 2003. – V.32– p. 770–775.

5. Tomas-Zapico C, Coto-Montes A. A proposed mechanism to explain the stimulatory effect of melatonin on antioxidative enzymes. J Pineal Res 2005; 39: 99-104.