Медицина/8. Морфология

 

Д.м.н. Тихонов И.В., к.б.н. Казаков О.В.

 

ЗАО «Санаторий-профилакторий «Станкостроитель», Барнаул, Россия,

ГУ Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск, Россия.

 

Регионарные лимфатические узлы простаты при экспериментальном дисциркуляторном простатите и в условиях его коррекции КВЧ- и низкоинтенсивным лазерным излучением

 

Проблема хронического простатита имеет огромное социальное значение. По данным ряда авторов, воспалительные процессы предстательной железы занимают одно из первых мест среди патологии мужских мочеполовых органов и составляют 21% от всех урологических заболеваний [7]. Основным фактором, способствующим развитию хронического простатита, является застой венозной крови в малом тазу [5]. Это сопровождается эндотоксикозом, приводит к нарушению деятельности микроциркуляторного русла, лимфатической системы [2, 4]. Нами была разработана экспериментальная модель дисциркуляторного простатита (ЭДП) в результате формирования экспериментального венозного застоя в малом тазу (Тихонов И.В., 2008) у лабораторных животных. Актуальным представляется проведение морфологического исследования регионарного лимфатического русла простаты в результате коррекции ЭДП факторами физического воздействия: низкоинтенсивным гелий-неоновым лазерным излучением (Ge-Ne НИЛИ) и электромагнитным излучением крайневысокочастотного диапазона (ЭМИ КВЧ), которые ранее уже использовались при лечении больных хроническим простатитом [1, 3, 8, 9].

Исследование подвздошных лимфатических узлов (в качестве регионарных лимфатических узлов простаты) позволило бы выявить структурно-клеточные преобразования в лимфатическом регионе, дренирующем тазовые конечности и органы малого таза лабораторных животных через обширные лимфатические сплетения, расположенные около семенниковой или яичниковой вен. Подвздошные лимфатические узлы являются узлами II-го порядка для лимфы прошедшей через тазовые, ягодичные и подколенные лимфатические узлы [10].

Целью данной работы явилось структурное исследование подвздошных лимфатических узлов при коррекции ЭДП в условиях венозного застоя в малом тазу Ge-Ne НИЛИ и ЭМИ КВЧ.

Материалы и методы исследования

Исследование проводили на 150 нелинейных крысах-самцах Вистар массой 220-260 г. Все экспериментальные исследования осуществлялись в соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755). Животные были разбиты на 5 групп по 30 в каждой: 1 группа -  интактные животные (контроль); 2 группа - экспериментальные животные на 21 сутки ЭДП в условиях венозного застоя органов малого таза без коррекции; 3 и 4 группа - экспериментальные животные с ЭДП на 21 сутки, которым ежедневно, начиная со второй недели, в проекции простаты производилось чрезкожное воздействие ЭМИ КВЧ (3-я группа) и Ge-Ne НИЛИ (4-я группа); 5 группа - экспериментальная группа ложнооперированных животных на 21 сутки эксперимента. Формирование ЭДП проводилось под нембуталовым наркозом (40 мг/кг веса внутрибрюшинным введением) по оригинальной методике (Тихонов И.В., 2008). Для создания венозного застоя в малом тазу проводили срединную лапаротомию у животных, затем послойно выделяли общие подвздошные вены в месте бифуркации нижней полой вены; дистальнее определяли и тупым способом выделяли внутренние подвздошные вены с обеих сторон и производили их лигирование. Осуществляли гемостаз, послойное ушивание раны, обработку антисептиком. У ложнооперированных животных воспроизводили все хирургические манипуляции без лигирования вен.

Гелий-неоновое лазерное воздействие проводилось на наркотизированных животных. Выходная мощность лазерного излучения выбиралась таким образом, чтобы диаметр светового пятна был достаточно большим - 2 см. Это позволяло охватить значительную часть области расположения простаты. Плотность потока мощности лазерного излучения 25 мВт/см2, время одного сеанса - 10 минут. Эвтаназия животных осуществлялась под нембуталовым наркозом. Для гистологического исследования забирали подвздошные лимфатические узлы [10]. В группе с коррекцией Ge-Ne НИЛИ и ЭМИ-КВЧ забор лимфатических узлов производился на следующие сутки после последнего сеанса облучения. По стандартной гистологической методике выполняли проводку материала, заливали объекты исследования в парафиновые блоки, с которых делали гистологические срезы толщиной 5 - 7 мкм. Срезы окрашивали гематоксилин - эозином и азур II - эозином [6]. С помощью окулярной тестовой системы производили морфометрию срезов и подсчет клеточных элементов в отдельных структурно - функциональных зонах исследуемых лимфатических узлов. Статистическую обработку данных проводили с помощью t-критерия Стьюдента для зависимых выборок и определяли значимость различий (р – стандартная ошибка среднего). Критический уровень значимости в данном исследовании принимался р < 0,05.

Результаты исследования и обсуждение

Во II группе животных (на 21 сутки ЭДП) тип структурно-функциональной организации подвздошных лимфатических узлов не изменяется, по отношению к интактной группе животных (фрагментированный тип по классификации академика Ю.И.Бородина, 1969), с корково-мозговым индексом - 0,49. Отмечаются структурные признаки угнетения клеточного звена иммунитета: уменьшается площадь паракортикальной зоны на 27,3%, а также - относительная площадь коркового вещества; мозговое вещество не имеет достоверных отличий от значений группы контроля (таблица 1). Восстанавливается транспорт лимфы через лимфатический узел: площади мозговых и краевого синусов на имеют достоверных отличий от интактной группы. В структурно-функциональных зонах подвздошных лимфатических узлов через 21 сутки ЭДП в условиях экспериментального венозного застоя в малом тазу (таблица 2) выявлена активность процессов пролиферации (увеличивается численность незрелых форм клеток плазматического рядов), увеличивается число клеток на стадии митоза. Макрофагальная реакция выражена только в мозговом веществе.

В III группе животных (на 21 сутки ЭДП в условиях коррекции ЭМИ КВЧ) структурно-функциональная организация подвздошных лимфатических узлов соответствует фрагментированному типу. В лимфатических узлах, по сравнению с интактными животными, отмечаются структурные признаки активации гуморального звена иммунитета (увеличена площадь мантийной зоны (в 2,4 раза) на фоне сохранения площади вторичных лимфоидных узелков, увеличения площади мозговых тяжей, В- зависимой зоны). В лимфатических узлах преобладает прямой путь транспорта лимфы: увеличивается площадь краевого (в 3 раза) на фоне сохранения площади мозговых синусов. Значительно увеличивается площадь соединительнотканных элементов. В структурно-функциональных зонах подвздошных лимфатических узлов отмечается активация процессов бласттрансформации клеток лимфоидного ряда (в герминативных центрах отмечается уменьшение числа средних и увеличение - малых лимфоцитов и клеток на стадии митоза). Увеличение числа плазмобластов, митотической активности клеток в мозговых тяжах свидетельствует об активации процессов пролиферации и бласттрансформации. По сравнению с 21 сутками ЭДП без коррекции в подвздошных лимфатических узлах в условиях коррекции ЭМИ КВЧ выявлены структурные признаки активации гуморального звена иммунитета (увеличена площадь В - зависимой зоны на 16,5%, вторичных лимфоидных узелков - на 21,7%, мозговых тяжей - на 19,5%). В лимфатических узлах еще более возрастает прямой путь транспорта лимфы (относительная площадь мозговых синусов уменьшается – на 14,8%, а краевого синуса увеличивается – в 2,7 раза). По сравнению с группой без коррекции, в структурно-функциональных зонах подвздошных лимфатических узлов отмечается активация процессов пролиферации (увеличивается численность плазмобластов) и бласттрансформации (увеличивается число зрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов).

В IV группе животных (на 21 сутки ЭДП в условиях коррекции Ge-Ne НИЛИ) структурно-функциональная специализация подвздошных лимфатических узлах соответствует фрагментированному типу. При этом корково-мозговое соотношение лимфатических узлов самое низкое (0,2) в сравнении с другими экспериментальными группами с коррекцией (таблица 1). По сравнению с другими экспериментальными группами транспорт лимфы через лимфатические узлы значительно увеличен. В подвздошных лимфатических узлах, как и при КВЧ-воздействии, отмечаются схожие структурные признаки активации гуморального звена иммунитета. Капсула утолщена. В структурно-функциональных зонах подвздошных лимфатических узлов, по сравнению с интактными животными, выявлено усиление процессов бласттрансформации (увеличивается количество малых лимфоцитов в мозговых тяжах, зрелых плазмоцитов в мозговых синусах, усиление митотической активности клеток). Значительно увеличивается численность макрофагов. По сравнению с 21 сутками экспериментального венозного застоя без коррекции в подвздошных лимфатических узлах увеличен транспорт лимфы через лимфатические узлы (возрастают площади мозговых на 26,45% и краевого синусов в 3,6 раза), отмечаются структурные признаки относительного уменьшения площади тимусзависимой зоны (на 68,5%) и активации гуморального звена иммунитета (увеличена площадь мантийной зоны на 95,9%, мозговых тяжей - на 11,6%). В структурно-функциональных зонах подвздошных лимфатических узлов, отмечается снижение активности процессов пролиферации (уменьшено незрелых форм клеток лимфоидного и плазматического рядов) и активация бласттрансформации (увеличивается количество малых лимфоцитов в мозговых тяжах, зрелых плазмоцитов в мозговых синусах).

Заключение

Особенность структурной реакции подвздошных лимфатических узлов при ЭДП в условиях венозного застоя органов малого таза (на 21 сутки) выражается в гипоплазии компонентов, ответственных за Т- звено иммунного ответа (уменьшении площади паракортикальной зоны), тенденции к восстановлению структурных соотношений компонентов лимфатических узлов, что позволяет заключить об активации естественных защитных сил организма, направленных на уменьшение степени проявлений эндогенной интоксикации.

Использование ЭМИ-КВЧ- и Ge-Ne НИЛИ в качестве факторов коррекции ЭДП в условиях экспериментального венозного застоя в малом тазу (на 21 сутки) вызывает в подвздошных лимфатических узлах структурную реакцию, характеризующуюся: 1) гиперплазией отделов паренхимы лимфатических узлов, ответственных за В- звено (увеличены площади вторичных лимфоидных узелков, мозговых тяжей, В- зависимой зоны); 2) относительным уменьшением площади паракортикальной зоны, наиболее выраженным при коррекции Ge-Ne НИЛИ; 3) увеличением численности зрелых эффекторных лимфоидных клеток и макрофагов; 4) изменением транспортного потенциала (преобладании прямого пути транспорта лимфы при коррекции ЭМИ КВЧ, увеличении площади всей синусной системы при Ge-Ne НИЛИ).

Таким образом, на основании полученных данных, можно заключить, что применение как ЭМИ КВЧ-, так и Ge-Ne НИЛИ в качестве факторов коррекции ЭДП, позволяет значительно усилить естественный дренажно-детоксикационный потенциал регионарных лимфатических узлов простаты за счет адаптивных структурно-функциональных перестроек, сопровождающихся увеличением их транспортной функции, способствуя уменьшению проявлений эндогенной интоксикации организма, устранению патологических изменений в лимфатическом регионе.

 

Таблица 1.

Структурно-функциональные зоны подвздошных лимфатических узлов при ЭДП в условиях венозного застоя в малом тазу (на 21 сутки) при КВЧ- и гелий-неоновом лазерном воздействии (M±m) (%).

Показатели

Интактные животные

21 сутки

ЭДП

21 сутки ЭДП + ЭМИ КВЧ

21 сутки ЭДП + Ge-Ne НИЛИ

Герминативный центр вторичных лимфоидных  узелков

6,15±0,37

5,71±0,21

3,81±0,13 *

3,93±0,18 *

Мантий вторичных лимфоидных узелков

1,95±0,02

1,34±0,18 *

4,77±0,17 *·

3,82±0,14 *

Вторичные

лимфоидные узелки

8,1±0,35

7,05±0,26

8,58±0,31 ·

7,75±0,33

Первичные

лимфоидные узелки

1,22±0,09

0,97±0,09

2,63±0,12 *·

1,87±0,11 *·

Корковое плато

1,91±0,02

2,65±0,07*

2,38±0,12 *

2,48±0,1 *

Паракортикальная зона

28,33±1,63

20,59±0,36*

12,24±0,52 *·

6,48±0,2 *·

Мозговые тяжи

37,66±1,67

40,0±1,2

47,81±0,43 *·

44,64±0,74 *·

Мозговой синус

20,48±0,87

22,98±0,48

19,58±0,68 ·

29,06±0,56 *·

Краевой синус

0,99±0,02

1,07±0,07

2,9±0,13 *·

3,85±0,12 *·

Капсула

1,09±0,02

4,49±0,25 *

3,02±0,13 *·

3,71±0,14 *

Трабекулы

0,19±0,08

0,2± 0,08

0,86±0,11 *

0,16±0,04

Соединительно-тканные элементы

1,29±0,02

4,69±0,13 *

3,88±0,24 *

3,87±0,17 *·

В-зона

46,9±0,9

50,67±1,57*

59,02±0,86 *·

54,26±1,19 *

Корковое вещество

39,0±0,59

31,26±0,95*

25,83±1,07 *·

14,58±0,75 *·

Мозговое вещество

59,14±1,27

62,98±2,21

67,39±1,12 *

73,7±1,31 *·

Корково/мозговой  индекс

0,66±0,02

0,49±0,03

0,38±0,05

0,2±0,05

 

Примечание: «*» - уровень значимости различий групп животных с коррекцией ЭДП по сравнению с интактными животными, р< 0,05; «·» - уровень значимости различий групп животных с коррекцией ЭДП по сравнению с экспериментальной группой 21 суток ЭДП без коррекции, р< 0,05.


Таблица 2.

Цитоархитектоника структурно-функциональных зон подвздошных лимфатических узлов в условиях венозного застоя (21 сутки) в малом тазу и лазерной коррекции (M±m) (%).

 

Показатели

Интактные животные

21 сутки

 ЭДП

21 сутки ЭДП + ЭМИ КВЧ

21 сутки ЭДП + Ge-Ne НИЛИ

Герминативный центр вторичных лимфоидных узелков

Лимфобласты

9,31±0,42

10,92±0,41

7,67±0,31*·

6,87±0,18 *·

Средние

лимфоциты

19,54±0,53

19,78±0,6

10,82±0,71 *·

12,84±0,62 *·

Малые лимфоциты

66,64±0,69

63,29±1,41

72,87±1,6 *·

70,03±1,7 ·

Макрофаги

3,59±0,05

4,11±0,23

4,48±0,12 *

5,21±0,15 *·

Ретикулярные клетки

0,4±0,001

0,89±0,44

3,23±0,14 *·

4,14±0,11 *·

Митозы

0,71±0,01

1,01±0,05 *

0,93±0,01 *·

0,91±0,01 ·

Мозговые тяжи

Средние лимфоциты

6,23±0,34

18,43±0,68*

13,99±0,22 *·

12,46±0,22 ·

Малые лимфоциты

24,93±0,85

16,63±0,6 *

18,93±0,4 *·

34,23±0,4 *·

Макрофаги

1,65±0,12

4,31±0,14 *

3,75±0,31 *

3,62±0,31 *

Ретикул. клетки

3,35±0,12

6,34±0,23 *

4,25±0,11 *·

3,93±0,12 *·

Плазмобласты

2,48±0,05

4,31±0,09 *

7,41±0,12 *·

4,51±0,1 *

Незрелые плазмат.  клетки

12,82±0,52

18,7±0,58 *

6,77±0,11 *·

6,05±0,23 *·

Зрелые плазмат. клетки

47,92±1,2

30,3±0,84*

44,08±1,5 *·

34,36±1,4 *

Митозы

0,62±0,04

0,98±0,03 *

0,82±0,05 *

0,84±0,01 *·

Мозговые синусы

Средние лимфоциты

3,23±0,12

3,11±0,22

5,88±0,13 *·

7,24±0,14 *·

Малые лимфоциты

47,22±0,55

40,4±0,94 *

31,6±0,44 *·

27,05±0,34 *·

Макрофаги

1,54±0,02

3,37±0,13 *

2,06±0,01 *·

2,19±0,01 *·

Ретикул. клетки

3,08±0,04

4,47±0,23 *

12,6±0,16 *·

5,72±0,01 *·

Тучные клетки

0,55±0,02

0,83±0,09

0,38±0,01 *·

0,34±0,005 *·

Плазмобласты

1,3±0,08

1,36±0,02

3,13±0,02 *·

5,56±0,02 *·

Незрелые плазмат.  клетки

10,55±0,25

13,41±0,45 *

9,39±0,47 ·

11,11±0,37 ·

Зрелые плазмат. клетки

32,49±0,31

33,05±0,58

34,96±0,35 *·

40,8±0,52 *·

 

Примечание: «*» - уровень значимости различий групп животных с коррекцией ЭДП по сравнению с интактными животными, р< 0,05; «·» - уровень значимости различий групп животных с коррекцией ЭДП по сравнению с экспериментальной группой 21 суток ЭДП без коррекции, р< 0,05.

 

Литература:

1. Байбеков И.М, Касымов А.Х., Козлов В.И. и др. Морфологические основы низкоинтенсивной лазеротерапии. Ташкент: изд. им. Ибн Сины, 1991. 224 с.

2. Бородин Ю.И., Асташов В.Н., Горчаков В.Н., Асташова Т.А., Рачковская Л.Н., Старкова Е.В. Программа оздоровительных мероприятий по лимфосанации и детоксикации организма в ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. – Новосибирск: ИПП «Манускрипт». - 2004. - 70 с.

3. Дунаевский Я.Л., Сегал А.С., Семенова Л.С. Физиотерапевтическая аппаратура: применение и перспективы развития на современном этапе. - М., 1993. - С. 32-33.

4. Левин Ю.М. Лечение, оздоровление и профилактика в условиях кризиса экологии организма.- М.: изд-во МГОУ, 1996.- 316 с.

5. Ломшаков А.А. Физическое воздействие на кровообращение предстательной железы при хроническом простатите // Автореф… дисс. канд. мед. наук. - Новосибирск, 2000. - 17 с.

6. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С.Саркисова и Ю.Л.Перова.- М.: Медицина, 1996.- 544 с.

7. Неймарк А.И., Александров В.В. Хронический простатит и его лечение с использованием продуктов пантового оленеводства. – Барнаул: Изд-во Алт. Ун-та, 1995. – 58 с.

8. Неймарк А.И., Ломшаков А.А., Гаткин М.Я. Воздействие лазеротерапии на гемодинамику и васкулярезацию простаты у больных хроническим простатитом // 1-я Поволжская научно-практическая конференция «Лазеры в медицине и экологии». – Самара, 1998. – С. 41.

9. Неймарк А.И., Неймарк Б.А. Эфферентная и квантовая терапия в урологии. М.: Медицинское информ. агенство – 2003 – 228 с.

10. Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л. Анатомия крысы (лабораторные животные). - СПб.: Издательство «Лань». - 2001. - 464 с.