Биология/9. Биохимия и биофизика

Яреминец Н. С., Самоткан Т. Ю., Фалевко Е. С., Россихин В.В.

Национальный технический университет «Харьковский политехнический институт», Харьков

ВОЗМОЖНОСТИ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ КОНСЕРВАЦИИ ДРОЖЖЕПОДОБНЫХ ГРИБОВ Candida albicans

Актуальным направлением научных исследований в современной биологии и медицине является изучение механизмов криоповреждений, криозащиты и хранения биологических объектов при низких температурах. Криоконсервирование является одним из самых эффективных методов долгосрочного хранения многих биологических объектов, а для ряда объектов - клеточных культур, донорских клеток и тканей - это единственный способ консервирования.

В последние годы существенно возросло количество заболеваний, в которых в качестве этиологического фактора выступают различные виды грибов рода Candida. В связи с этим появилась необходимость в создании коллекции клинических изолятов, которые необходимы для разработки новых и изучения эффективности уже существующих препаратов, для возможного создания препаратов специфической профилактики кандидозных инфекций.

Учитывая выше сказанное, целью данной работы было изучение влияния долгосрочного хранения при постоянных температурах на сохранение жизнеспособности и биологических свойств грибов рода Candida, а также выбор оптимального криопротектора, оказывающего ярко выраженный защитный эффект.

Для этого суспензию грибов в среде консервирования (Сабуро с добавлением 5% сахарозы и диметилсульфоксида (ДМСО) вносили в криопробирки. Концентрация грибов в образцах перед замораживанием составляла 10⁷-10⁸ кл/мл. Часть замороженных до -196⁰С образцов хранили на протяжении года при -196⁰С (контроль). Три части образцов через месяц отогревали от -196°С до -150°С, -130°С и до -100°С и хранили при этих температурах в течение года. Жизнеспособность изучали по колониеобразующей способности "чашечным методом" Коха. Статистическую обработку результатов проводили по общепринятым методам с расчетом критериев вероятности Стьюдента.

Результаты показали, что долгосрочное хранение при постоянных температурах от -196°С до -100°С не приводит к дополнительной гибели криоконсервированных клеток. ДМСО, находясь в составе среды консервирования, оказывает более выраженный защитный эффект на жизнеспособность клеток.

В дальнейшем был проделан опыт, посвященный изучению биологических свойств объекта после хранения в низкотемпературном хранилище. Для этого клеточные суспензии в средах консервирования, которые содержали ДМСО или сахарозу, замораживали до -196°С, затем часть перенесли в пары азота в температурные зоны -150°С, -130°С, -100°С и оставили храниться при этих температурах. Через год криопробирки достали из хранилища, изучив и зафиксировав биологические свойства (образование бластоспор и ферментацию углеводов) объектов.

В результате было установлено, что биологические свойства криоконсервированных объектов не меняются при хранении в низкотемпературном банке при постоянных температурах от -196°С до -100°С.

Таким образом, установлено, что долгосрочное хранение при постоянных температурах от -196°С до -100°С не приводит к дополнительной гибели криоконсервированных клеток; использование в составе среды консервирования криопротектора ДМСО в эксперименте на сохранение жизнеспособности макроколоний грибов рода Candida имело более выраженный эффект, чем использование сахарозы в качестве криопротектора; биологические свойства криоконсервированных объектов не меняются при хранении в низкотемпературном хранилище при постоянных температурах.