Кусаинова А.К., Булгакова О.В., Берсимбай Р.И.

Евразийский национальный университет им. Л.Н. Гумилева

Ассоциация полиморфного маркера гена р53 с развитием рака легкого.

Особое место в картине нарушений при злокачественных новообразованиях различных локализаций, в том числе и при рак легкого, занимают повреждения гена онкосупрессора p53.

Для гена р53 установлено 19 полиморфизмов, из которых три считаются вовлеченными в патогенез злокачественных новообразований, это полиморфизмы, расположенные в 3, 6 интронах и 4 экзоне. 72 кодон 4 экзона гена р53 может быть представлен тремя генотипами (Arg/Arg, Arg/Pro, Pro/Pro) в результате однонуклеотидной замены гуанина на цитозин (CGC – аргинин, ССС- пролин). Полиморфизм в 72 кодоне 4 экзона является функционально значимым, так как затрагивает ДНК-связывающий домен. Считается, что форма 72Arg p53 значительно более эффективно, чем форма 72Pro, запускает программированную клеточную смерть. Ряд авторов связывает данный феномен с более выраженной способностью 72Arg-формы белка проникать в митохондрии, что сопровождается высвобождением в цитоплазму цитохрома С. В связи с чем многие исследования, проводимые в различных популяциях показали, что наличие аллеля 72Pro связано с риском развития рака легкого. При полиморфизме Arg72Pro гена р53 за счет снижения белковой функции исчезает способность гена р53 останавливать клеточный цикл для свершения репарационных процессов, что в дальнейшем приводит к повреждению клеток легкого и канцерогенезу.

Однако, в целом данные литературы о вкладе комбинаций генотипов гена р53 в риск развития рака легкого достаточно противоречивы. В связи с чем, целью нашей работы было исследование распределения генотипов гена р53 (полиморфизм 72 кодона 4 экзона) у больных раком легкого.

Гомозиготный нормальный генотип гена р53 Arg72Arg давал два фрагмента размером 113 и 86 п.н.; гомозиготный по мутантному аллелю генотип Pro72Pro не распознавался эндонуклеазой рестрикции BstU1 и давал один фрагмент - 199 п.н.; гетерозиготный генотип Arg72Pro давал три полосы размером 199 п.н, 113 п.н. и 86 п.н. На рисунке 4 представлены результаты ПЦР-ПДРФ-анализа на полиморфизм р53 Arg72Pro (рисунок 27).

На первом этапе мы изучили распределение аллелотипов гена р53 (Arg/Arg, Arg/Pro, Pro/Pro) в группах больных раком легкого и здоровых лиц для выяснения их взаимосвязи с раком легкого. Частота встречаемости генотипов по 4 экзону не имела различий с контролем (таблица 1).

Статистически значимых различий аллелотипов гена р53 не наблюдалось в группах больных и в зависимости от гистологической формы опухоли (рисунок 1).

Рисунок 1 – Частота мутантной аллели Pro72Pro гена р53 у больных с различными гистологическими типами рака легкого (указана в %)

Мы не обнаружили значимой ассоциации вариантного аллелотипа Arg72Pro гена р53 с такими клиническими проявлениями прогрессии заболевания, как лимфогенное и гематогенное метастазирование, размером и степенью дифференцировки опухоли у больных раком легкого.

Согласно литературным данным, некоторые авторы высказали предположение о защитной роли гетерозиготного варианта Arg72Pro при раке лёгкого. Но в нашем исследовании различия в частоте Arg72Pro генотипа в группе больных РЛ и контроле не прослеживаются (таблица 1).

Таблица 1 – Относительный риск влияния полиморфизма гена р53 на развитие рака легкого в казахстанской популяции

Однако при изучении сочетанного влияния курения, имеющего доказанную причинно-следственную связь с РЛ, нами были установлены значимые различия в распределении генотипов 4 экзона для больных РЛ. Различия статистически значимы по сравнению с аналогичными показателями группы контроля (таблица 2).

Таблица 2 – Ассоциация генотипа Arg72Pro гена р53 на развитие рака легкого в зависимости от курения (тест хи-квадрат при df=2)

При этом частота Arg72Pro генотипа у больных раком легкого, имеющих длительный стаж курения составила 54% против 43% группы здоровых лиц.

Таким образом, выявленное повышение частоты гетерозиготного генотипа гена р53 по 4 экзону (54%, Arg72Pro полиморфизм) по сравнению с контрольной группой (43% соответственно) свидетельствует о вкладе данного генотипа в риск развития рака легкого для курящих индивидуумов.