Лахтин М.В., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А.

ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского» Роспотребнадзора

ЛЕКТИНОВЫЕ ФЕРМЕНТЫ - РЕГУЛЯТОРЫ МЕТАБОЛИЗМА

      Аннотация. В обзоре приведены примеры лектиновых ферментов со свойствами независимого от каталитического центра распознавания углеводов. Во всех известных классах и больших группах ферментов присутствуют ферменты с лектиновыми свойствами. Лектин-ферментное кофункционирование – ключ для решения проблем клеточной и клинической микробиологии, медицинской и индустриальной биотехнологии.

      Summary. Lectin enzymes - regulators of metabolism. Lakhtin M.V., Lakhtin V.M., Afanasiev S.S., Aleshkin V.A. G.N. Gabrichevsky Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia. Examples of lectins possessing enzyme properties involving intramolecular co-functioning of both activities are reviewed. Universal diversity of molecular lectin-enzyme relationships in nature is important for solution of problems of medical and industrial biotechnology, molecular and clinical microbiology.

      Лектины относятся к углеводы-распознающим белкам, широко распространенным в природе на всех уровнях организации живого [1-3] . Для них характерны системность и способность кофункционировать с биоэффекторными молекулярными и клеточными системами [4-8]. Лектины представляют интерес для биологов, энзимологов, биотехнологов, иммунологов, исследователей врожденного иммунитета и микроэкологии, в том числе в связи с профилактикой и терапией болезней [2-6, 9-23]. В последние годы получены новые данные о кофункционировании лектинов и ферментов. Цель обзора – дать современные представления о кофункционировании лектинов и ферментов на молекулярном уровне в связи с перспективами би/мультифункциональных лектинов.

      Термин «лектин» предполагает выполение таких условий как:

-присутствие углеводы/ гликоконъюгаты(ГК)-распознаваемого/ связывающего участка (УСУ) - мотива, лектинового домена (ЛД) и/или углеводсвязывающего модуля (УСМ) некаталитической (неизменяющей ковалентные химические связи в контакте с углеводом) природы:

--обратимость углеводного узнавания в УСУ;

 --ингибирование связывания с УСУ комплементарными углеводами или ГК (набором, ранжированным по выраженности специфичности и степени сродства);

-неиммуноглобулиновую/ не антительную природу:

--Ig-подобный домен может присутствовать и быть важным в паре с УСУ (Ig-семейство лектинов, смотри классификации [1, 2]);

-нетоксическую природу УСУ:

--как нетоксический элемент, противопопоставленый и отделенный от токсической части (например, на субъединичном уровне);

-результат эволюции в рамках наследственного/ врожденного (innate) иммунитета.

     Понятие «фермент как истинный лектин» означает присутствие ферментативной и лектиновой активностей в разделенных позициях (в разных субъединицах, эпитопах, доменах, мотивах и т.д.) (смотри Табл. 1). К ложным лектинам относятся ферменты углеводного обмена, когда каталитический и ГК-узнающий участки в молекуле совпадают. В случаях лектин-подобных ферментов неуглеводного обмена возможно ранжирование углеводов и ГК по их способности распознаваться белком. Так, показано, что ангиотензин-превращающий фермент человека характеризуется УСУ, ингибирующимся гликопептидами [24, 25]. Присутствующий в химотрипсине УСУ, по-видимому, важен для сорбции фермента на гликокаликсе in vivo [26]. Панкреатический трипсин имеет УСУ преимущественного распознавания в гликопротеинах Asn-связанных гликанов сывороточного типа (при сравнении с Ser/Thr-гликанами муцинового типа) [27]. Другие примеры лектиновых ферментов неуглеводного обмена приведены в Табл. 1.

      Разнообразие УСУ

      УСУ представлены как мотивы, ЛД и УСМ. Они выявляются у ферментов всех классов [11, 23, 28],  Табл. 1. Отмечается широкое распространение в природе одного и того же типа УСМ (например, LysM, распознающего мотив GlcNAc-X-GlcNAc) [8, 29]. Классификации ЛД и УСМ включают функциональные (3 группы: А- со сродством к кристаллическим полисахаридам, B-  эндотипа со сродством к внутренним в полисахариде гликанам и С- экзотипа с концевым гликанам  [30]; другие - в соответствии с выбранными типами ГК-мишеней и по специфичности к наборам конкретных тестированных углеводов) и структурные - по уникальности вторичной, третичной и четвертичной структуры [1, 2, 4, 29]. В одном и том же ферменте может быть более 1 типа УСМ [31]. Наоборот, более одной ферментативной активности могут быть ассоциированы с одним типом ЛД [32]. Разнообразие лектиновых ферментов обусловлено не только их природной встречаемостью, но и комбинационным потенциалом использования ЛД и УСМ в рекомбинантных технологиях [13, 29, 33, 34].

      Структурно-функциональные особенности  ЛД и УСМ. Характерно N- или С-концевое положение УСМ [16, 29, Табл. 1]. Взаимодействие терминально расположенных в аминокислотной последовательности (или близко к концам)  каталитического домена и ЛД обеспечивается гибкими пространственными связями [35], участием катионов металлов Ca2+, Mg2+, Zn2+ [32, 36], дисульфидными связями, вовлечением в распознавание и фиксирование (targeting) углеводов ароматическими аминокислотами Trp, дипептидом TrpTrp и Tyr [30, 37-39]. На активность ЛД и УСМ влияет бета-складчатая/ фолдинговая мультиэлементная вторичная структура концевых доменов в аминокислотной последовательности. Лектиновые ферменты (глюкозидаза II и гликозил-трансферазы) участвуют в каскадном биосинтезе ГК в эндоплазматическом ретикулюме и аппарате Гольджи (Табл. 1), причем каскад инициирует после связывания необходимого углевода углеводзависимый переход ко второму этапу, например, предполагающему дальнейшее кофункционирование с лектиновыми шаперонами и гликопротеиновой протеин-фосфатазой СD45 [40-42].

      Специфичность УСМ. Почти идентичные по сиквенсу и структуре изоформы УСМ фермента могут различаться по сродству к углеводам. Так, мышечная форма протеинкиназы УСМ-бета2 связывает  альфа-1,6-разветвленные углеводы из состава гликогена до 30 раз сильнее при сравнении с УСМ-бета1 [43]. Возможна внутримолекулярная несовместимость ЛД (нет распознавания углеводов с последующей активацией активности фермента) с «чужим» каталитическим центром, что приводит к отсутствию инициации деградации полисахаридов  [29, 44]. При конструировании близких по структуре УСМ может не обнаруживаться способность УСМ связывать углеводы (возможно, из-за ограниченного разнообразия доступных углеводов) [29]. Для ЛД и УСМ характерна широкая (расширенная, протяженная, гибкая, адаптационная, конформационная) специфичность олигосахаридам, полисахаридам и ГК, что выражается в наличии рядов ранжированных по выраженности способности узнаваться лектином углеводных мишеней [23, 45].

      Кофункционирование лектинов и ферментов     

      Межмолекулярные взаимосвязи лектинов и ферментов. Описаны многочисленные примеры межмолекулярного взаимодействия ферментов 6  классов по Международной классификации (500 номенклатурных ферментов из 446 источников) со 115 лектинами различного происхождения и варьирующей структурой [19]. В результате лектин-ферментных взаимодействий достигаются модуляция активностей, их стабилизация, пространственная ориентация каталитического центра и направленная сборка мультифункциональных комплексов, ансамблей и частиц. Эти данные демонстрируют высокий потенциал возможностей реализации лектин-ферментых взаимоотношений на органельном, клеточном, внеклеточном, тканевом и органном уровнях.

      Внутримолекулярные взаимосвязи лектинов и ферментов. Достигнут значительный прогресс в области естественных (природных) внутримолекулярных взаимоотнощений лектиновой и ферментативной активностей. Молекулярная организация лектиновых ферментов предполагает наличие УСУ. В случае лектиновых гликозил-гидролаз (группы ферментов с максимальным разнообразием УСМ) одними из главных функций УСМ являются усиление гидролизного разрушения нерастворимых матриксов (сходных с микробными биопленками) [34, 46] и внутриклеточный синтез (совместно с лектиновыми гликозил-трансферазами) углеводной части гликопротеинов. Примеры бифункциональных природных ферментов такого рода приведены в Taбл. 1.

      Из таблицы видно, что все классифицированные группы ферментов включают примеры лектинов. Следует отметить, что одни и те же УСУ (мотивы) обнаруживаются в белках с различающимися функциями (лектиновая активность проявляется как вспомогательная), являются универсальными, консервативными, закрепленными эволюцией внтуримолекулярными приспособлениями. Например, Gal-связывающий мотив обнаружен не только в галактозоксидазе, но и в Tyr-протеинкиназе, X-Pro-дипептидил-пептидазе Lactococcus, Lys-эндопептидазе и NAD-динуклеотид-гликогидролазе [47]. Кроме того, одни и те же типы УСМ обнаруживается среди Archea, эубактерий, грибов (Actinomycetes) и животных [8, 48]. 

      Из таблицы также видно, что лектин-ферментные внутримолекулярные взаимодействия универсальны - выявляются не только у разных типов организма, но и вовлекаются в симбиотические и инфекционные процессы в системе «Млекопитающие - Микроорганизмы» (на уровне рецепции, событий в цитоплазме и органеллах). Лектины и ферменты при этом выступают как коэволюционизирующие в организме человека партнеры в составе эукариотических внутриклеточных систем биосинтеза, модификации и деградации ГК (гликопротеинов и других). Так, кальретикулин (лектиновый шаперон)  эндоплазматического ретикулюма вместе с тиоловой оксидоредуктазой в составе комплекса кальретикулин–ERp57 участвуют в качественном контроле Asn-гликан-зависимого фолдинга гликопротеинов на последнем этапе процесса сборки молекул класса I главного комплекса гистосовместимости, а сам процесс вовлекает также гликопротеиновый шаперон – тапазин (его гликан), лектиновые глюкозилтрансферазу UGT1 и глюкозидазу II [49, 33, Табл. 1]. Используются модели, где УСМ в ферментах кофункционируют и с другими  лектиновыми шаперонами (например, кальнексином) [29]. Выявлены сложные углеводзависмые другие внутриклеточные системы и каскады влияния на уровень фукозилирования Asn-гликанов и фолдинг гликопротеинов  в плазме человека, вовлекающие фактор-1-альфа ядер гепатоцитов и гены фукозилтрансфераз FUT6 и FUT8 [50].

      В настоящее время известно не менее 81 типа УСМ (база данных http://www.cazy.org/)  [29]. Сложные УСМ-зависимые каскадные процессы распознавания и биосинтеза муциновых углеводов отмечены в системах УСМ–Белок муцина и УСМ-Гликопептид муцина [51, Табл. 1]. В муцинах обнаружены домены СYS, «вкрапленные» в доминирующие типичные протяженные муциновые Ser/Thr/Pro-содержащие гликозилированные домены. Домены СYS регулируют взаимодействие УСМ с муцинами, а также регулируют муцин-муциновые взаимодействия, поддерживающие целостность слизистой [52]. 

      При исследовании сложных многоступенчатых метаболических процессов (например, при гидролизе гетерополисахаридов, сходных с антигенами вирулентности патогенов) выявлены более сложные при сравнении с УСМ трехмерные архитектуры – аффинные сомы, которым соответствуют новые сомы-зависимые и сомы-кофункционирующие гидролазы, как в случае бактериальных целлюлосом, использующихся при конструировании полисахаридаз/ деполимераз/ автолизинов (пригодных и для разрушения биопленок патогенов) [53].

      Перспективы взаимосвязей лектинов и ферментов

      Приведенные выше данные указывают на универсальность принципов кофункционирования лектинов и ферментов. Результаты указывают на перспективы изучения и применения лектиновых ферментов. Знания о лектин-ферментных взаимосвязях помогут глубже понять природные процессы клеточного узнавания и выживания в аномальных условиях и при развитии болезни. Многие бактериальные, грибные и животные лектины относятся к одним и тем же типам (например, C-, L-, R- или УСM-типам [1, 2, 29]). Другой пример – сходство бактериальных и позвоночных лектинов F-типа (фукоза-связывающих), включающих белки Streptococcus, пентраксин-1 животных [55]. Являясь базисными, сходные лектины (их УСУ) влияют на надстроечный спектр ферментативных и других активностей. В случае регулируемых лектинами ферментов [19] возможно их дальнейшее участие в контроле над пулом сигналов различного типа (стрессовых, aномальных, перекретно-разговорных [Сross-Talking], чувства кворума [Quorum Sensing], между иерархическими защитными системами человека и микробиотой, других).

      Рекомбинантные лектиновые ферменты. Кофункционирование ферментов и лектинов является важным для многих ключевых биологических процессов узнавания, в том числе в индустриальной биотехнологии. Развитие компьютерных метагеномных технологий молекулярного моделирования третичной и четвертичной струтуры (с замещением/ подменой функциональных фрагментов сиквенсов, с использованием УСМ как шаблонов/ лекал/ матриц), предусматривающего использование постоянно пополняющихся баз данных секвенирования последовательностей белков (в том числе бактерий кишечника) [13, 29, 33, 34] позволило выявить новые типы УСМ, в том числе домены BACON, кофункционирующие с протеазными и сориентированными преимущественно на мишени муцинового ряда [56].

      Знания о лектин-ферментных взаимосвязях являются основой для создания молекулярных и надмолекулярных конструкций для медицинской биотехнологии и биоинженерии [29, 34, 57]. Данные о 81 семействе УСM [29] являются основой для конструирования новых УСМ-содержащих ферментов  (известно более 300 семейств, потенциально совместимых с УСМ [29, 58]) с улучшенными свойствами, полезных для про-, пре-, сим- и синбиотических систем  или в составе биореакторов индустриального значения. Химерные содержащие УСМ ферменты (как правило, гидролазы) могут содержать комбинации нескольких рекомбинантных модулей, например, как в случае пятимодулевой α-L-арабинофуранозидазы Fibrobacter succinogenes с УСМ6 [59]. При конструировании высокоэффективных деполимеразных лектинов важную роль играет выбор оптимального/ лучшего распознающего углеводы лектинового фузогена среди сходных УСМ, Са2+-зависимость связывания УСМ и т.д. [29, 59]. Наличие кофакторных гликозидаз (например, пектиназы) может резко усиливать эффект рекомбинантного лектина (УСМ из целлюлазы Cellulomonas fimi) [60]. Часто используют комбинацию УСМ с полиHis(4-6 остатков His)-хвостом, связывающим катионы Ni2+- для облегченной очистки рекомбинантного лектин-фермента металл-хелатной хроматографией на колонке с Ni2+-сорбентом и затем на целлюлозном сорбенте, как в случае самоактивирующегося фактора-Х свертывания крови с укороченной легкой цепью, слитой с целлюлозосвязывающим модулем  [61]. Была получена высокостабильная рекомбинантная экспрессированная в дрожжах Pichia pastoris ферулоил-эстераза AwFaeA-УСМ42 (фермент типа-А из Aspergillus awamori, УСМ42 из α-L-арабинофуранозидазы Aspergillus kawachii), обладающая в значительной степени более высокой активностью [62]. В результате при этом разрушение нерастворимого гетерополисахарида (арабиноксилана) было синергичным в комбинации химерного фермента с ксиланазой. Поскольку биопленки патогенов, как правило, включают гетерополисахаридные матриксы, работы с химерными лектиновыми ферментами представляют особенный интерес для энзимотерапевтов и клинических микробиологов.

      Потенциал лектинов в энзимотерапии. В последние годы получила развитие лектин-направленная фермент-активированная пролекарственная терапия (LEAPT) [63, 64]. Основой ее является бинарная доставляющая лекарство система, предполагающая связывание лектина с углеводом для локализации гликозилированного ферментного конъюгата на поверхности выбранного типа клеток с последующей активацией ферментом (например, галактозилированной α-L-рамнозидазой) пролекарственной формы (например, рамноза-доксорубицина), действующей на клетки. Система обладает высоким противоопухолевым действием в отношении гепатоклеточной карциномы HepG2 человека.

      Знание лектиновых свойств узнавания мишеней ферментами способствует развитию новых возможностей энзимотерапии [29, 34]. Перспективы - применение лектиновых ферментов против биопленок патогенов в организме человека; способы защиты от патогенов, направленные на снижение и устранение вирулентности возбудителей болезней [34]; коррекция экспрессии лафорина при развитии болезни Лафора (прогрессивной фатальной миоклональной эпилепсии), обусловленной генетическими нарушениями экспрессии глюкан-фосфатазы [39], использование O-Man-1,2-бета-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы 1 (фукутина) при  болезни мышц-глаз-мозга, сопровождающейся мышечной дистрофией и дефицитом фосфорилирования гликанов [66]. Рассматривается участие каскада глюкозидаза-II—фосфатаза-CD45 в иммуной защите человека [42].

      Потенциал пробиотических микробных лектинов

      Перспективной является возможность использования пробиотических лектиновых систем [5, 20, 21]. Бифидобактериальные и лактобациллярные лектины – естественные ингредиенты пробиотиков и их имитаторы - поддерживают здоровый баланс (сеть реакций) в биотопах слизистых открытых полостей организма человека, реализуют сцепленные с лектинами активностями [5, 21]. Пробиотические микробные лектины и их комплексы, как антимикробные, синергичные с антибиотиками, имитирующие пробиотики, коммуникативные перспективны для профилактики и терапии инфекционных и неинфекционных, системных и хронических болезней [2, 21, 64]. 

      Можно ожидать расширения набора углевод/ГК-распознающих активностей (в зависимости от мишеней) пробиотических микроорганизмов на уровне:

-лектиновых комплексов и мультимерных ансамблей, регулирующих уровень поверхностной экспрессии углевод/ ГК-распознавания  (в том числе в случаях отсутствия такого распознавания у мономерных ингредиентов);

-пула лектин-подобных молекул (в том числе некоторых бактериоцин-подобных, избирательно и обратимо ассоциированных с углеводами и ГК).

-амплификации укороченных лектиновых молекул (в присутствии гидролаз окружающей среды, когда лектиновая активность демаскируется, усиливается и/или модифицируется (усиления антимикробной, антивирусной, антипатогенной активностей);   

-тестирования взаимодействий между ароматическими аминокислотами, циклическими углеводами и модифицированными гликозидами.

      Перечисленные выше категории пробиотических микробных лектинов и кофункционирующих с ними систем представляют собой новый потенциал сочетанных антипатогенных (антимикробных и антивирусных) активностей, цитокин-подобных и иммуномодулирующих факторов, противоопухолевых агентов.

      Заключение. Широко распространенный в природе экономичный принцип дистанционного лабильного разделения в молекуле ферментных и лектиновых свойств находит все большее применение в системном конструировании ферментов путем их комбинирования с УСУ. Наиболее часто такое комбинирование используется для улучшения избирательного действия гидролаз, смесь которых направлена на разрушение нерастворимых матриксов (биопленок патогенов и других). Принципы лектин-ферментного кофункционирования перспективны для развития новых медицинских технологий, управления взаимоотношениями человека и микробиоты. Открыты перспективы конструирования и использования каскадного системного кофункционировании лектинов и ферментов в качестве новых биоэффекторных сборочных мультикомплексов, ансамблей и лекарств, биомаркеров и биосенсоров для нужд клинической микробиологии и медицинской биотехнологии. 

Литература:

1. Sharon N., Lis H. Lectins (2nd Edition). Springer, 2003. -  454 pp.

2. Lakhtin V., Lakhtin M., Alyoshkin V. Lectins of living organisms. The overview // Anaerobe. – 2011. – V. 17; No 6. – P. 452-455. DOI: 10.1016/j.anaerobe.2011.06.004.

3. Lakhtin M., Lakhtin V., Alyoshkin V., Afanasyev S. Lectins of beneficial microbes: system organization, functioning and functional superfamily // Beneficial  Microbes. – 2011. – V. 2(2). – P. 155 – 165. DOI: http://dx.doi.org/10.3920/BM2010.0014.

4. Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Несвижский Ю.В., Лахтин М.В., Шубин В.В. и др. Классификация лектинов как универсальных регуляторных молекул биологических систем // Вестник РАМН. – 2009. - № 3. – С. 36 – 43.

5. Лахтин М.В., Алешкин В.А., Лахтин В.М., Несвижский Ю.В., Афанасьев С.С., Поспелова В.В.  Роль лектинов пробиотических микроорганизмов в жизнеобеспечении макроорганизма // Вестник РАМН. – 2010. - № 2. – С. 3 – 8.

6. Lakhtin M., Lakhtin V., Aleshkin A., Bajrakova A., Afanasiev S., Aleshkin V. Lectin systems imitating probiotics: potential for biotechnology and medical microbiology // In: “Probiotics 2012”, Edited by E.C. Rigobelo. – New York, InTech, 2012. – P. 417 – 432. ISBN 978-953-51-0776-7. http://dx.doi.org/10/5772/3444

7. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Байракова А.Л., Алешкин В.А., Афанасьев М.С.

Кандидные маркеры болезней урогенитальных биотопов: реактивность к лектинам пробиотиков // Acta Biomedica Scientifica. – 2018. - № 1.

8. Mesnage S., Dellarole M., Baxter N.J., Rouget J.B., Dimitrov J.D., Wang N., Fujimoto Y., Hounslow A.M., Lacroix-Desmazes S., Fukase K., Foster S.J.,Williamson M.P. Molecular basis for bacterial peptidoglycan recognition by LysM domains // Nat. Commun. 2014 Jun 30;5:4269. Doi: 10.1038/ncomms5269.

9. Лахтин В.М. Лектины – регуляторы  метаболизма // Биотехнология. – 1986. – Т.2. - № 6. – С. 66-79.

10. Лахтин В.М., Запрометова О.М. альфа-Галактозидаза Сephalosporium acremonium 237 и ее лектиновые свойства // Биохимия. – 1988. – Т. 53. - № 8. – С. 1270-1279.                 

11. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов // Итоги науки и техники, серия Биотехнология, т.2, под ред. проф. А.А. Клесова. Москва: ВИНИТИ,1987, 288 c.

12. Лахтин В.М. Ферменты углеводного обмена с лектиновыми доменами сорбции на полисахаридах // «Изучение и применение лектинов». Т. 1. Общие вопросы. Химия и биохимия лектинов. Тарту. Уч. Зап. Тарт. Ун-та. – 1989. – Вып. 869. – С. 128-131.

13. Лахтин В.М. Биотехнология лектинов // Биотехнология. – 1989. -  Т.5. - № 6. – С. 676-691.

14. Лахтин В.М., Алёшкин В.А., Лахтин М.В., Афанасьев С.С., Поспелова В.В., Шендеров Б.А.  Лектины, адгезины и лектиноподобные вещества лактобацилл и бифидобактерий // Вестник РАМН. – 2006. - № 1. – С. 28 – 34.   

15. Лахтин В.М. Лектины в исследовании гликоконъюгатов: Автореф…дис. д-ра.биол. наук. – М., 1991. – 49 с.

16. Лахтин В.М. Молекулярная организация лектинов // Молекулярная  биология. – 1994. – Т.28. - № 2. – С. 245-273.

17. Лахтин В.М. Лектины в исследовании углеводной части гликопротеинов и других природных гликоконъюгатов // Биохимия. – 1995. – Т.60. - № 2. – С. 187-217.

18. Lakhtin M.V., Lakhtin V.M., Alyoshkin V.A. Lectin and enzyme relationships in microbiology // International Journal of Molecular and Clinical Microbiology. – 2011. – V.1; No 1. – P. 9-14. ISSN: 2008-9171.

19. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Алешкин А.В. Лектины и ферменты в биологии и медицине. – Москва: Издательство «Династия», 2010. – 496 с.

20. Lakhtin M., Alyoshkin V., Lakhtin V., Afanasyev S.,  Pozhalostina L., Pospelova V. Probiotic lactobacillus and bifidobacterial lectins against Candida albicans and Staphylococcus aureus clinical strains: new class of pathogen biofilm destructors // Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2010, 2(3), 186-196, DOI: 10.1007/s12602-010-9046-3.

21. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Байракова А.Л., Караулов А.В., Афанасьев М.С. и др. Мобильный синбиотопный микробиоценоз против патогенов //  Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2016. - № 3 (часть 2). – С. 168-173.

22. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А. Лектины пробиотиков против болезней микробиоценозов в организме человека // Уральский научный вестник. – 2017. – Volume 2, № 9. – С. 35-45. ISSN 1561-6908.

23. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Корсун В.Ф. Лектины в терапии // Проблемы научной мысли. – 2017. – Volume 2. - № 10. – С. 77-84.  ISSN 1561-6916.

24. Kost O.A., Bovin N.V., Chemodanova E.E., Nasonov V.V., Orth T.A. New feature of angiotensin-converting enzyme: carbohydrate-recognizing domain // J. Mol. Recogn. – 2000. – V. 13. – P. 360 – 369.

25. Lohith K., Vijayakumar G.R., Somashekar B.R., Sivakumar R. et al. Glycosides and amino acyl esters of carbohydrates as potent inhibitors of angiotensin converting enzyme // Eur. J. Med. Chem. – 2006. – V. 41. – P. 1059 – 10572.

26. Rariy R.V., Klyachko N.L., Borisova E.A., Penagos C.J., Levashov A.V. Lectin-like center in the molecule of alpha-chymotrypsin: formation of complexes with peroxidase and artificially glycosylated alpha-chymotrypsin // Biochem. Mol. Biol. Int. – 1995. – V. 36. P. 31 – 37.

27. Takekawa H., Ina C., Sato R., Toma K. et al. Novel carbohydrate-binding activity of pancreatic trypsins to N-linked glycans of glycoproteins // J. Biol. Chem. – 2006. – V. 281. – P. 8528 – 8538.

28. Gilbert H.J., Knox J.P., Boraston A.B. Advances in understanding the molecular basis of plant cell wall polysaccharide recognition by carbohydrate-binding modules // Curr. Opin. Struct. Biol. 2013;23(5):669-77. Doi: 10.1016/j.sbi.2013.05.005.

29. Zámocký M., Janeček Š., Obinger C. Fungal Hybrid B heme peroxidases – unique fusions of a heme peroxidase domain with a carbohydrate-binding domain // Sci Rep. 2017 Aug 24;7(1):9393. 30-30.  Duan C.J., Feng Y.L., Cao Q.L., Huang M.Y., Feng J.X. Identification of a novel family of carbohydrate-binding modules with broad ligand specificity // Sci. Rep. 2016 Jan 14;6:19392. Doi: 10.1038/srep19392.

31. Boraston A.B., Ficko-Blean E., Healey M. Carbohydrate recognition by a large sialidase toxin from Clostridium perfringens // Biochemistry. – 2007. V. 46. – P. 11352 – 11360.

32. Claesson M., Lindqvist Y., Madrid S., Sandalova T., Fiskesund R., Yu S. et. al.  Crystal structure of bifunctional aldos-2-ulose dehydratase/isomerase from Phanerochaete chrysosporium with the reaction intermediate ascopyrone M // J. Mol. Biol. 2012;417(4):279-93.

33. Rizvi S.M., Del Cid N., Lybarger L., Raghavan M. Distinct functions for the glycans of tapasin and heavy chains in the assembly of MHC class I molecules // J. Immunol. 2011. – V. 186. – P. 2309 – 2320.

34. Guillén D., Sánchez S., Rodríguez-Sanoja R. Carbohydrate-binding domains: multiplicity of biological roles // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2010;85(5):1241-1249.

35. Lira-Navarrete E., de Las Rivas M., Compañón I., Pallarés M.C., Kong Y., Iglesias-Fernández J. et. al. Dynamic interplay between catalytic and lectin domains of GalNAc-transferases modulates protein O-glycosylation // Nat Commun. 2015 May 5;6:6937. Doi: 10.1038/ncomms7937.

36. Sato M., Liebschner D., Yamada Y., Matsugaki N., Arakawa T., Wills S.S. et. al. The first crystal structure of a family 129 glycoside hydrolase from a probiotic bacterium reveals critical residues and metal cofactors // J. Biol. Chem. 2017;292(29):12126-12138. doi: 10.1074/jbc.M117.777391.

37. Huang W., Lunin V., Li Y., Suzuki S. et al. Crystal structure of Proteus vulgaris chondroitin sulfate ABC lyase I at 1.9 A resolution // J. Mol. Biol. – 2003. – V. 328. – P. 623 – 634.

38. Miki A., Inaba S., Maruno T., Kobayashi Y., Oda M. Tryptophan introduction can change β-glucan binding ability of the carbohydrate-binding module of endo-1,3-β-glucanase // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2017;81(5):951-957. doi: 10.1080/09168451.2017.1285687.

39. Dias D.M., Furtado J., Wasielewski E., Cruz R., Costello B., Cole L. et. al. Biophysical characterization of laforin-carbohydrate interaction // Biochem J. 2016;473(3):335-45.

40. Lorenz V., Ditamo Y., Cejas R.B., Carrizo M.E., Bennett E.P., Clausen H. et. al. Extrinsic Functions of Lectin Domains in O-N-Acetylgalactosamine Glycan Biosynthesis // J. Biol. Chem. 2016;291(49):25339-25350.

41. Olson L.J., Orsi R., Peterson F.C., Parodi A.J., Kim J.J., D’Alessio C. et. al. Crystal Structure and Functional Analyses of the Lectin Domain of Glucosidase II: Insights into Oligomannose Recognition // Biochemistry. 2015;54(26):4097-4111.

42. Satoh T., Toshimori T., Noda M., Uchiyama S., Kato K. Interaction mode between catalytic and regulatory subunits in glucosidase II involved in ER glycoprotein quality control // Protein Sci. 2016;25(11):2095-2101. doi: 10.1002/pro.3031.

43. Mobbs J.I., Koay A., Di Paolo A., Bieri M., Petrie E.J., Gorman M.A. et. al. Determinants of oligosaccharide specificity of the carbohydrate-binding modules of AMP-activated protein kinase // Biochem J. 2015;468(2):245-257.

44. Alderwick L.J., Lloyd G.S., Ghadbane H., May J.W., Bhatt A., Eggeling L. et. al. The C-terminal domain of the Arabinosyltransferase Mycobacterium tuberculosis EmbC is a lectin-like carbohydrate binding module // PLoS Pathog. 2011 Feb;7(2):e1001299.

45. Waespy M., Gbem T.T., Elenschneider L., Jeck A.P., Day C.J., Hartley-Tassell L. et. al. Carbohydrate Recognition Specificity of Trans-sialidase Lectin Domain from Trypanosoma congolense // PloS Negl Trop. Dis. 2015 Oct 16;9(10):e0004120. Doi: 10.1371/journal.pntd.0004120.

46. Hägglund P., Eriksson T., Collén A., Nerinckx W. et al. A cellulose-binding module of the Trichoderma reesei beta-mannanase Man5A increases the mannan-hydrolysis of complex substrates // J. Biotechnol. – 2003. – V. 101. – P. 37 – 48.

47. European Bioinformatics Institute 2010>Databases>InterPro.IPR008979 (Gal-binding domain-like in proteins). – 2010.

48. Abbott D.W., Eirín-López J.M., Boraston A.B. Insight into Ligand Diversity and Novel Biological Roles for Family 32 Carbohydrate-Binding Modules // Mol. Biol. Evol. – 2008. – V. 25. – P. 155–167. 

49. Yoshida Y. F-box proteins that contain sugar-binding domains // Biosci. Biotechnol. Biochem. – 2007. – V. 71. – P. 2623 – 2631.

50. Lauc G., Essafi A., Huffman J.E., Hayward C. et al. Genomics meets glycomics-the first GWAS study of human N-glycome identifies HNF1alpha as a master regulator of plasma protein fucosylation // PloS Genet. – 2010. – V. 6(12):e1001256.

51. Revoredo L., Wang S., Bennett E.P., Clausen H., Moremen K.W., Jarvis D.L. et. al. Mucin-type O-glycosylation is controlled by short- and long-range umigatesdes substrate recognition that varies among members of the polypeptide GalNAc transferase family // Glycobiology. 2016;26(4):360-376.

52. Desseyn J.L. Mucin CYS domains are ancient and highly conserved modules that evolved in concert // Mol. Phylogenet. Evol. – 2009. V. 52. – P. 284 – 292.

53. Zhou F., Chen H., Xu Y. GASdb: a large-scale and comparative exploration database of glycosyl hydrolysis systems // BMC Microbiol. 2010. – V. 10. P. 69.

54. Baldwin T.A., Gogela-Spehar M., Ostergaard H.L. Specific isoforms of the resident endoplasmic reticulum protein glucosidase II associate with the CD45 protein-tyrosine phosphatase via a lectin-like interaction //J. Biol. Chem. 2000;275(41):32071-32076.

55. Drickamer K. F-type lectins, www.imperial.ac.uk, Animal lectins home. – 2006.

56. Mello L.V., Chen X., Rigden D.J. Mining metagenomic data for novel domains: BACON, a new carbohydrate-binding module // FEBS Lett. – 2010.. – V. 584. – P. 2421 – 2426.

57. Moriyoshi K., Koma D., Yamanaka H., Ohmoto T., Sakai K. Functional analysis of the carbohydrate-binding module of an esterase from Neisseria sicca SB involved in the degradation of cellulose acetate, Biosci. Biotechnol. Biochem. – 2010. – V. 74, 100213-1-3, 2010.

58. Emanuelle S., Brewer M.K., Meekins D.A., Gentry M.S. Unique carbohydrate binding platforms employed by the glucan phosphatases // Cell Mol. Life Sci. 2016;73(14):2765-2778.

59. Yoshida S., Hespen C.W., Beverly R.L., Mackie R.I. et al.  Domain analysis of a modular α-L-arabinofuranosidase with a unique carbohydrate binding strategy from the fiber-degrading bacterium Fibrobacter succinogenes S85 // J. Bacteriol. – 2010. – V. 192. – P. 5424 – 5436.

60. Zhang Y., Chen S., Xu M., Cavoco-Paulo A. et al. Characterization of Thermobifida fusca cutinase–carbohydrate-binding module fusion proteins and their potential application in bioscouring // Appl. Environ. Microbiol. – 2010. – V. 76. – P. 6870 – 6876.

61. Kwan E., Guarna M.M., Boraston A.B., Gilkes N.R. et al. Self-activating factor X derivative fused to the C-terminus of a cellulose-binding module: Production and properties // Biotechnol. Bioeng. – 2002. – V. 79. – 724 – 732.

62. Koseki T., Mochizuki K., Kisara H., Miyanaga A. et al. Characterization of a chimeric enzyme comprising feruloyl esterase and family 42 carbohydrate-binding module // Appl. Microbiol. Biotechnol. – 2010. – V. 86. – P. 155 – 161.

63. Robinson M.A., Charlton S.T., Garnier P., Wang X.T. et al. LEAPT: lectin-directed enzyme-activated prodrug therapy // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. – 2004. – V. 101. – P. 14527 – 14532.

64. Garnier P., Wang X.T., Robinson M.A., van Kasteren S. et al. Lectin-directed enzyme activated prodrug therapy (LEAPT): Synthesis and evaluation of rhamnose-capped prodrugs // J. Drug Target. – 2010. – V. 18. – P. 794 – 802. 

65. Sanabria N.M., van Heerden H., Dubery I.A. Molecular characterisation and regulation of a Nicotiana tabacum S-domain receptor-like kinase gene induced during an early rapid response to lipopolysaccharides // Gene. 2012;501(1):39-48. doi: 10.1016/j.gene.2012.03.073.

66. Kuwabara N., Manya H., Yamada T., Tateno H. Kanagawa M., Kobayashi K. et. al. Carbohydrate-binding domain of the POMGnT1 stem region modulates O-mannosylation sites of α-dystroglycan // Proc Natl Acad Sci U S A. 2016;113(33):9280-5. Doi: 10.1073/pnas.1525545113.

67. Ito N., Phillips S.E., Stevens C., Ogel Z.B. et al. Novel thioester bond revealed by a 1.7 A crystal structure of galactose oxidase // Nature. 1991. – V.  350. – P. 87 – 90.

68. Fritz T.A., Raman J., Tabak L.A. Dynamic association between the catalytic and lectin domains of human UDP-GalNAc:polypeptide α-N-acetylgalactosaminyltransferase // J. Biol. Chem. – 2006. – V. 281. – P. 8613 – 8619.

69. Barth H., Aktories K., Popoff M.R., Stiles B.G. Binary bacterial toxins: biochemistry, biology, and applications of common Clostridium and Bacillus proteins // Microb. Mol. Biol. Rev. – 2004. – V. 68. – P. 373 – 402.

70. Navarro-Gochicoa M.-T., Camut S., Timmers A.C.J., Niebel A. et al. Characterization of four lectin-like receptor kinases expressed in roots of Medicago truncatula. Structure, location, regulation of expression, and potential role in the symbiosis with Sinorhizobium meliloti // Plant Physiol. – 2003. – V. 133. – P. 1893 – 1910.

71. Guillén D., Sánchez S., Rodríguez-Sanoja R. Carbohydrate-binding domains: multiplicity of biological roles // Appl. Microbiol. Biotechnol. – 2010. – V. 85. – P. 1241 – 1249.

72. Chou W.-I., Pai T.-W., Liu S.-H., Hsiung B.-K. et al. The family 21 carbohydrate-binding module of glucoamylase from Rhizopus oryzae consists of two sites playing distinct roles in ligand binding // Biochem. J. – 2006. – V. 396. – P. 469 – 477.

73. Ashida H., Miyake A., Kiyohara M., Wada J. et al. Bifidobacterium bifidum are essential for the utilization of fucosylated milk oligosaccharides and glycoconjugates // Glycobiology. – 2009. – V. 19. – P. 1010 – 1017.  

74. Val-Cid C., Biarnés X., Faijes M., Planas A. Structural-Functional Analysis Reveals a Specific Domain Organization in Family GH20 Hexosaminidases // PloS One. 2015 May 29;10(5):e0128075. Doi: 10.1371/journal.pone.0128075.

75. Zhao G., Li G., Zhou X., Matsuo I. et al. Structural and mutational studies on the importance of oligosaccharide binding for the activity of yeast PNGase // Glycobiology. – 2007. –V.19. – P.118–125.

76. Etzler M.E., Kalsi G., Ewing N.N., Roberts N.J., Day R.B., Murphy J.B. A nod factor binding lectin with apyrase activity from legume roots // Proc. Natl Acad. Sci. USA. – 1999.– V.96.– P.5856–5861.

77. Tran S.T., Le D.T., Kim Y.C., Shin M. et al. Cloning and characterization of phosphomannose isomerase from Sphingomonas chungbukensis DJ77 // Biochem. Mol. Biol. Reports (Korean Society for Biochemistry and Molecular Biology). – 2009. – V. 42. – P. 523 – 528.

78. Enzyme Nomenclature. Recomendations 1992. – Orlando, Academic Press, 1992. - С. 245-273.

 

Table  1. Ферменты с лектиновыми участками. 

КФ, Ферменты*                                                (источники)                                   

Связывание углеводов**,

мотивы, домены, модули

Ссылки

1.1.3.9. Галактозоксидаза                                        (грибы)          

Gal-связывающий мотив

67

1.11.1.-. Гем-пероксидаза                              (Ascomycetes)             

ЛД, С-концевой

29

1.14.17.-. Литические полисахарид-монооксигеназы                            

                                                                         (Ascomycetes)        

УСМ20

29

2.4.1.-. Ara-трансфераза                             (M.tuberculosis)

УСМ, С-концевой

44

2.4.1.-. GalNAc-трансфераза (Т), ppGalNAc       (человек)

R-тип ЛД: T2Lec, T3Lec, T4Lec

35,40

2.4.1.-. УДФ-GalNAc:полипептид-альфа-N-ацетил-

GalNAc-трансфераза-2                                         (человек) 

ЛД: 3 участка          

68

2.4.2.30.  AДФ-рибозилтрансфераза                    (Bacillus,                 

                                                                            Clostridium)

Домены Б-субъединицы                      молекул типа A

69

2.7.-.-. Протеинкиназы                                  (M.truncatula)

Рецептор-подобная Ser/Thr-протеин киназа  (N.tabacum)

АМР-активированная протеинкиназа, АМРК, бета-субъединица                                                (Actinomycetes)                                                                                          

ЛД

B-модуль

УСМ бета-1 и бета-2

УСМ48

70

65

43

29

3.1.1.6. Aцетилэстераза                                  (A.fumigatus)       

УСM1                                                

71

3.1.1.72. Ацетатцеллюлозы-эстераза              (N.sicca SB)

УСM2                                                

57

3.1.-.-. Глюканфосфатаза, лафорин                   (человек)

УСМ (олигомеры гликогена)

29,39,

58

3.2.1.1. альфа-Амилаза        (L.amylovorus NRRL B-4540,

                                           L.plantarum, L.manihotiovorans)           

                                               (Thermoactinomyces vulgaris)

УСМ26                                               

 

УСМ34

71

 

29

3.2.1.3. Глюкоамилаза                                          (R.oryzae)

УСM21: участки I, II                        

71

3.2.1.4. Эндо-1,4- бета-глюканаза, целлюлаза, C5614-1                                                                                                             

                                                    (бактерии из рубца быка)

УСМ, С-концевой

30

3.2.1.-. Эндо-1,3- бета-глюканаза                  (Cellulans)

УСМ13 (ламинарин)

38

3.2.1.18. Большая экзо-альфа-сиалидаза    (C.perfringens)

3.2.1.18. Транс-сиалидаза, TconT               (T.congolense)    

УСM40+УСМ32

ЛД (Man-содержащие олиго-сахариды, не концевые Man)

31

45

3.2.1.-.  Протеин-альфа-Глюкозидаза II        

                                     (эндоплазматический  ретикулюм)

ЛД, Man-6P-рецептор-подобный домен бета-субъединицы (Glc в N-гликанах, гликаны протеинTyr-фосфатазы CD45)

41,42,

54

3.2.1.51. 1,3(4)-альфа-L-фукозидаза  (B.bifidumJCM1254)      

УСM32+FIVAR***   

73

3.2.1.-.  Лакто-N-биозидаза                                (B.bifidum)

УСM32, С-концевой          

73,74

3.2.1.-. Эндо-альфа-N-ацетилгалактозаминидаза               

                                                            (B.longum JCM 1217)

УСМ32

73

3.4.15/24.-.  Zn2+-протеазы, коллагеназы             (Bacillus,  

                                                                           Clostridium)                                                                                   

Домены Б-субъединицы                      молекул типа A

69

3.5.1.-. Пептид:N-гликаназа, PNGase            (S.cerevisiae)                                   

                                                                                   (мышь)

Хитобиоза-связывающая петля

Man-связывающий модуль

75

3.6.1.5. Апираза                                             (M.truncatula)                                 

(Хито)олиго-связывающий домен                

76

4.2.1.110. Альдоза-2-улеза-дегидратаза/изомераза

                                            (Phanerochaete chrysosporium)

ЛД, С-концевой, 3УС-мотива

32

4.2.2.-. Хондроитинсульфат ABC-лиаза I       (P.vulgaris)         

ЛД, N-концевой домен     

37

5.4.2.-. Фосфоманноза-изомераза (S.chungbukensis DJ77)

 

5.-.-.-. Изомераза/ Альдоза-2-улеза-дегидратаза               

                                            (Phanerochaete chrysosporium)

Man-1-фосфат- связывающий мотив

ЛД, С-концевой, 3УС-мотива

77

 

32

6.1.-.-. E3-убиквитин-лигаза                                (человек)                                               

C-концевой мотив

49

Примечание. *Порядок ферментов - согласно Международной классификации: 1- оксидоредуктазы, 2- трансферазы, 3- гидролазы, 4- лиазы, 5- изомеразы, 6- лигазы [78]. **Различия повторяющихся комбинаций доменов, кооперации участков или мотивов нескольких аминокислотных остатков, специфических комбинаций с другими типами доменов, позиции Б-субъединицы. ***Сокращенная запись аминокислот. Gal= галактоза, GalNAc = N-ацетилгалактозамин, Man= манноза, ЛД= лектиновый домен, УСМ= углеводсвязывающий модуль.