Биологические науки/ 6. Микробиология

к.х.н. Таутова Е.Н.¹, Мустафина Ш.А.², Жаркенова Ж.К.¹

¹Кокшетауский государственный университет им. Ш. Уалиханова, Казахстан

²Акмолинский областной филиал РГКП «Республиканская ветеринарная лаборатория» КГИ в АПК МСХ РК

Определение остаточных количеств антибиотиков
в птицеводческой продукции

Принятая Правительством Республики Казахстан Закон о безопасности пищевой продукции ставят перед Ветеринарией задачи по оказанию практической помощи в решении вопросов обеспечения населения безопасными продуктами питания. Поэтому на ветеринарные лаборатории возложены самые ответственные функции и требуют от специалистов квалифицированного подхода при проведении исследований.

Среди отраслей сельского хозяйства птицеводство является одним из рентабельных производств. В связи с этим исследования в этой отрасли вызывает большой интерес для практиков в будущем.

Одним изосновных продуктов птицеводства является яйцо. На протяжении десятилетий с целью стимуляции роста птиц, увеличения количества яиц, профилактики инфекционных и инвазионных заболеваний стремление к повышению объемов производства и в качестве терапевтических средств применяются антибиотики довольно широко. При этом чаще всего используются антибиотики тетрациклиновой группы, левомицетин, стрептомицин, пенициллин, бацитрацин и т.д. [1,2].

Определение содержания антибиотиков необходимо для предотвращения попадания антибактериальных веществ в продукты питания человека. Потребление продуктов, содержащих остаточные количества антимикробных веществ, неблагоприятно влияют на здоровье людей, вызывая аллергические реакции, дисбактериоз. Кроме того, присутствие антибиотиков в яйцах, мясе, молоке и некоторых других продуктах ухудшает качество сыров, молочно-кислых изделий и сырокопченных колбас, а также затрудняет проведение исследований при ветеринарно-санитарной оценке продуктов животного происхождения.

Таким образом, задача ветеринарных лабораторий особо актуальна в том, чтобы не допустить попадания продуктов, загрязненных остаточными количествами антибиотиков в сеть общественного питания. В связи с вышеизложенным необходимо знать предельно допустимое содержание антибиотиков в продуктах, которое не должно превышать для:

тетрациклиновой группы	– 0,01 ЕД;
левомицетин	– 0,01 ЕД;
стрептомицин	– 0,5 ЕД;
пенициллин	– 0,01 ЕД;
бацитрацин	– 0,02 ЕД на 1 г (мл) продукта [3].

Для определения антибиотиков в биосубстратах наиболее широкое распространение получили микробиологические методы, позволяющие определить минимальные концентрации антибиотиков в исследуемом материале. Они основаны на непосредственном воздействии антибиотика на чувствительные штаммы микроорганизмов (тест-культур). С их помощью устанавливают наличие антибиотиков в продуктах питания и в различных биологических субстратах [4].

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Наиболее распроостранен метод диффузии в агар, основанный на свойстве антибиотика диффундировать из испытуемого образца в плотную питательную среду, засеянную определенной тест-культурой и подавлять рост этой культуры. В результате вокруг образца появляется зона задержки роста тест-микроба, свидетельствующая о наличии в образце антибиотика. Величина зоны зависит от химической природы и концентрации антибиотика, чувствительности тест-микроба, состава агаризованной среды, рН и других факторов, которые следует учитывать при разработке и практическом применении метода диффузии в агар.

Анализ метода диффузии в агар складывается из нескольких этапов:

1. Выращивание тест-культур и приготовление микробной взвеси.

2. Подготовка чашек со средой и тест-культурой.

3. Приготовление растворов рабочего стандарта.

4. Подготовка испытуемого материала.

5. Постановка опыта.

6. Учет получения результатов и расчет содержания антибиотика в испытуемом материале.

Тест культурами служат специально отобранные, спорообразующие и неспорообразующие непатогенные и условнопатогенные штаммы микроорганизмов, обладающие высокой чувствительностью к антибиотикам. Они должны хорошо расти на применяемых средах, образуя сплошной газон и четко очерченные зоны задержки роста в местах диффузии антибиотика в агар.

Для количественного и качественного определения антибиотиков в субстратах используют ряд микроорганизмов (таблица) [4].

Таблица. Тест-культуры, применяемые для количественного и качественного определения антибиотиков.

Антибиотик	Тест-культура
Тетрациклины	Bac.cereus ATCC 1178, Bac.subtilis L2, Bac.Pumilus
Пенициллин	Bac.caliodaktis, St.aureus ATCC 6538, Sarcina lutea ATCC 9341, St.aureus 209-P
Стрептомицин	St.aureus ATCC 6538, Bac.mycoides 538, E.coli ATCC 9637, Bac.subtilis ATCC 6633
Mономицин	Bac. subtilis L2
Левомицетин (хлорамфеникол)	Bac. cereus ATCC 1178, Bac.subtilis ATCC 6633, Sarcina lutea ATCC 9341
Гризин	Bac.subtilis ATCC 6633, Bac.subtilis L2
Бацитрацин	Micrococcus flavus ATCC 9341

Тест-культуры сохраняют на агарных средах в течение 15-30 дней при температуре +4 -10^оС, после чего пересевают на свежую питательную среду.

Для обеспечения наибольшей чувствительности метода следует вносить минимальное количество микробных тел, которое еще дает возможность получения сплошного газона и четко очерченных зон задержки роста.

После застывания агара в среде пробочным сверлом (с внутренним диаметром 8 мм) при помощи трафарета под углом 60^о друг другу на расстоянии 28 мм от центра чашки делают 6 отверстий (лунок).

Большинство антибиотиков в той или иной степени связываются с белками тканей и органов, поэтому следует иметь в виду, что в яйцах, молоке, меде и других субстратах, полученных от животных, которые не получали антимикробных препаратов могут присутствовать вещества, задерживающие рост тест-микроба (естественные ингибиторы).

Для устранения ингибиторов роста тест-микробов яйца, мед, молоко перед началом исследования прогревают на водяной бане при 60-65^оС в течение 10-15 минут.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Испытуемые яйца освобождаем от скорлупы, отделяем белки и желтки. Для устранения ингибиторов роста тест-микробов белки отдельно от желтков подвергаем прогреванию на водяной бане при 60-65 ⁰С в течении 10-15 минут. Затем эмульгируем в фосфатном буфере. При определении тетрациклиновой группы используем Bac.cereus. Суточную бульонную культуру, разбавленную физиологическим раствором наносим на поверхность питательного агара, излишнюю жидкость отсасываем, а агар подсушиваем 30 минут в термостате, затем полученный испытуемый раствор закапываем в лунки и инкубируем в термостате при 30^оС и течении 18-20 часов и учитываем результат.

Данный метод можно использовать для качественного определения тетрациклина.

Таким образом, предлагаемый метод обнаружения остаточного количества антибиотиков в пищевых продуктах в определенной степени облегчает постановку анализа в лабораториях и позволяет получить достоверные результаты без особых затрат и дорогостоящего оборудования.

Литература:

1. Зденек Мюллер. Антибиотики в кормлении сельскохозяйственных животных. 1958.

2. Аксенов В.И., Ковалев В.Ф. Антибиотики в продуктах животноводства. 1977.

3. Ковалев В.Ф., Хоменко Н.Р. Справочник «Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии. 1988.

4. Заиченко А.И. Методические указания по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства. Москва, 1985.