Биологические науки/5. Молекулярная биология
Телесманич
Н.Р., Коновальчик М.А., Косенко Е.П.
ГБОУ ВПО
Ростовский государственный медицинский университет Минздрава России, кафедра
общей и клинической биохимии №1, Ростов-на-Дону, Россия
Сезонные колебания уровня реагинов грудного и юношеского возраста г.
Ростова-на-Дону.
В 1966 г. японские ученые, работавшие в США,
Кимишиге и Теруко Ишизака обнаружили "реагиновые" антитела,
соответствующие иммуноглобулинам, но отличащиеся от IgG, IgM,
IgA, IgD, и назвали их IgE.
Параллельно в Швеции С.Йохансон и Н Беннич обнаружили IgE у больных миеломной
болезнью. Ранее в 1921 г. в Германии бактериолог Прауснитц и гинеколог Г.
Кюстнер разработали метод выявления реагинов в крови больных атопией,
заключающийся во внутрикожном введении здоровому человеку сыворотки больного
атопией с последующим введением в это же место исследуемого аллергена. Затем
оценивали местную кожную реакцию. В настоящее время реакцию не применяют [1].
В норме IgE в минимальной
концентрации находится в крови и других жидкостях.
Внутриутробно плод способен продуцировать IgE
не раньше 11-й недели гестации. После рождения концентрация сывороточных IgE
низкая и достигает максимума между 10-м и 15-м годом жизни. Сывороточная
концентрация IgE весьма вариабельна и изменяется в зависимости от целого
ряда обстоятельств: от наличия или отсутствия атопии, пола, возраста, сезона,
обострения заболевания и других факторов. Из-за низкой концентрации уровень IgE
в сыворотке обозначают в международных единицах: (1 МЕ/мл=2,4 нг/мл). У
немногих здоровых детей и взрослых концентрация IgE может достигать 1000
МЕ/мл.
Уровень аллергенспецифических IgE-антител
определяют (по аналогии с общим IgE) в единицах,
обозначающих соотношение массы и объема: нг/мл, МЕ/мл. Основной метод выявления
специфических IgE in vitro
- ИФА.
Одной из важнейших диагностических проблем
является изучение предрасположенности организма человека к сенсибилизации.
Вместе с тем лабораторная диагностика аллергических заболеваний представляет
собой сложную, постоянно изучающуюся проблему, включающую сопоставление
клинической и лабораторной информации, где приоритет остается за клиническим
этапом, так как именно он определяет объем и методы лабораторных исследований.
Однако, по данным различных исследований [3],
сопоставление данных анамнеза с результатами, полученными с помощью
лабораторных методов специфической диагностики, выявляет довольно большой
процент несовпадений клинических и лабораторных результатов. Эта проблема
становится еще острее в связи с расширением спектра диагностируемых
аллергенспецифических IgE.
Так на основании изучения спектра аллергенов по
одному аллергенспецифическому IgE возникает некоторая абсолютизация его
значения в диагностике аллергии, так как присутствие в панели спектра образцов виновник
сенсибилизации остается замаскированным. Так же важно иметь информацию о
показателях нормы и патологии, в зависимости от экологических условий отдельно
взятой местности, в которой проживают пациенты, а так же изменение
сенсибилизации организма в зависимости от возрастных особенностей системы
иммунитета.
В связи с этим, целью исследования явилось
изучение сезонных колебаний уровня реагинов в сыворотке крови пациентов в
возрасте от 6 месяцев до 1 года и от 10 до 16 лет на территории г.
Ростова-на-Дону.
Нами проводилось исследование с учетом жалоб
пациентов на клинические проявления: раздражения на коже лица и тела
(высыпания, покраснения, шелушения) насморк, частые простудные заболевания. По
этим показаниям мы исследовали 37 человек на уровни общего и специфического IgE
во все сезоны года, обратившихся по направлению врача-аллерголога.
В качестве контрольной группы использовали
результаты обследования 7 атопически здоровых детей в возрасте от 6 месяцев до
1 года и 7 здоровых подростков в возрасте от 10 до 16 лет г. Ростова-на-Дону
без клинических проявлений непереносимости пищевых, бытовых и лекарственных
веществ на момент обследования.
Уровни специфического IgE определяли твердофазным
неконкурентным непрямым методом в сыворотке крови (Ig Е-Ат-ИФА) серии
«Иммунотекс» (Ставрополь). Специфический IgE оценивали путем
определения в сыворотке крови уровней Ig Е-АТ к 19 различным
аллергенам, сгруппированным в "панели" - группы из нескольких
родственных аллергенов, иммобилизованных на твердофазном носителе: пищевая
(куриное яйцо, коровье молоко, томат,
свинина, говядина, апельсин, клубника, подсолнечник, пшеничная
мука, овсянка, рис, гречневая крупа,
фундук, морковь, яблоко); бытовая (домашняя пыль, шерсть кошки, шерсть собаки);
лекарственная (лидокаин).
Физиологические нормы специфического IgE,
в соответствии с инструкцией к набору реагентов количественного
иммуноферментного определения аллергенспецифических IgE-АТ составляют от 0
до 50 КЕ/л.
При определении общего IgE с помощью выявления
антител в сыворотке крови применен "сэндвич" - вариант одностадийного
твердофазного ИФА тест-системой "ДС-ИФА-IgE"(Нижний Новгород).
Для реализации его использованы
моноклональные антитела с разной специфичностью к двум доменам молекулы IgE:
первые антитела сенсибилизировали на полистироловый 96-ти луночный
планшет; вторые входят в состав
конъюгата. В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца и конъюгата,
во время инкубации одновременно происходит иммобилизация IgE,
содержащегося в исследуемом образце, и связывание его с конъюгатом. Количество
связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству общего IgE
в исследуемом образце.
Во время инкубации с ТМБ-Субстратным раствором
происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски пропорциональна
концентрации общего IgE в анализируемых пробах. После остановки
реакции проводили регистрацию результатов спектрофотометрически при длине волны
450 нм. Интерпретацию результатов оценивали в соответствии с инструкцией
(табл.1).
Таблица 1 - Содержание
общего IgE в сыворотке крови здоровых детей.
Статистическую обработку результатов проводили
по Лакину [2], определяя среднюю арифметическую; изменчивость вариационного
ряда; оценку достоверности по Стъюденту.
Нами установлено, что в группе здоровых детей от
6 месяцев до 1 года колебания содержания общего IgE в сыворотке крови во все сезоны года наблюдалось в пределах
нормы (0-15 кМЕ/л) от 6,9 до 8,3 кМЕ/л, что в 2 раза ниже верхнего предела, то
есть сезонных особенностей в изменении общего IgE не наблюдалось.
Колебания специфического IgE так же наблюдалось в
пределах нормы (0-50 КЕ/л).
Первая группа аллергенных детей от 6 месяцев до
1 года демонстрировала повышение нормы общего IgE осенью в 2,8 раз; весной
- в 2 раза; летом - в 3,5 раза, что свидетельствует о неокрепшем иммунитете
грудных детей, остро реагирующих на изменения климата.
У полученных результатов следует, что группа
аллергенных детей грудного возраста (6 месяцев - 1 год) характеризовалась
наибольшим содержанием реагинов в среднем превышающим норму почти в 3 раза во
все сезоны года. Так же наблюдались резкие сезонные колебания общего IgE.
Наибольшие показатели IgE достигали в летний
период, когда еще неокрепший организм сталкивается с наибольшим количеством
аллергенов в воздухе и в питании и демонстрирует нестабильную, формирующуюся
иммунную систему.
Повышение нормы специфического IgE
в осенне-зимний период наблюдалось в 2,5 раза; весной - в 4,7 раза; летом - в
3,6 раза.
Во все сезонные периоды повышение уровня
специфических IgE у экспериментальной группы наблюдалось на коровье молоко,
пшеничную муку, говядину, куриное яйцо, свинину, гречневую крупу и рис. В
осенне-зимний период уровни специфических IgE выше в 2,5 раза на
коровье молоко, пшеничную муку, говядину и куриное яйцо, в весенний период в
4,7 раз повышение на коровье молоко,
яйцо и рис, в летний в 3,6 раз на коровье молоко, пшеничную муку, гречневую
крупу, свинину и яйцо. Таким образом, самыми аллергенными продуктами для детей
от 6 месяцев до 1 года являются коровье молоко и куриное яйцо в г.
Ростове-на-Дону.
Вторая группа здоровых детей от 10 до 16 лет
демонстрировала общий IgE, соответствующий норме
от 56 до 59 кМЕ/л, норма составляет 0-200 кМЕ/л. Колебания специфического IgE
так же наблюдалось в пределах нормы (0-50 КЕ/л). В зимний период дети от 10 до
16 лет, обратившиеся по направлению врача-аллерголога с различной степенью
аллергических проявлений имели значение общего IgE, превышающие норму в
среднем в 2,7 раз. Весной уровень общего IgE превышал норму в 2
раза, летом и осенью вообще не наблюдалось превышения нормы, что
свидетельствует о том, что с повышением сопротивляемости организма в летний
период, характеризующийся большей усвояемостью витаминов, прослеживается и
нормализация аллергических состояний у детей от 10 до 16 лет.
Вместе с тем у детей от 10 до 16 лет и летом и
осенью общий IgE остается в норме, а у группы 6 месяцев - 1 год весной и
летом повышается значительно. Группа аллергенных детей от 10 до 16 лет
демонстрировала меньший уровень повышения реагинов выше нормы по сравнению с грудными детьми, наибольший -
зимой в 2,7 раз, а летом вообще показатели общего IgE были в норме, что
свидетельствует, о том, что у детей у этой возрастной группы аллергизация
организма наименее выражена. Летом наблюдается компенсаторная реакция и
нормализация аллергических состояний за счет повышения сопротивляемости
организма в летний период, характеризующийся большей усвояемостью витаминов.
Группа аллергенных детей от 10 до 16 лет превышала показатели нормы специфического IgE
зимой - в 1,8 раз, весной - в 2,6 раз,
осенью - в 1,2 раза и летом - в 3,6 раз.
Наиболее уязвимыми месяцами для проявления
аллергических состояний и повышения общего и специфического IgE
являются холодные месяцы года, когда сопротивляемость организма инфекционными
заболеваниями понижена.
Таким образом, нами установлено, что чем выше
общая сопротивляемость организма и стабилизация иммунной системы, тем ниже
уровень реагинов, что можно пронаблюдать у детей возрастом до 16 лет, которые
демонстрируют наименьший уровень реагинов. Сезонная зависимость так же
наблюдается летом - наибольшее
понижение уровня общего IgE. Однако не всегда
остается понятным насколько клинические проявления аллергии в летний период
соответствуют показателям общего "низкого" IgE. Из наших исследований
видно, что чем крепче и стабильнее иммунитет, тем ниже показатели общего IgE
у людей, жалующихся на аллергические заболевания. Это подтверждается понижением
IgE в летний период у двух возрастных групп и уменьшением
общего IgE у группы детей до 16 лет, когда иммунитет находится на
самом высоком уровне развития.
Литература:
1.
Ковальчук
Л.В., Ганковская Л.В., Мешкова Р.Я.. Клиническая иммунология и аллергология с
основами общей иммунологии: учебник. - М.:ГЭОТАР - Медиа, 2011. - 407-409 с.
2. Лакин Г.Ф., Биометрия.
Учебное пособие для вузов. М. - 1990.
3. Петреня Н.Н., Добродеева
Л.К., Мозер А.А. Уровни общих IgE у северян и их значение
в физиологическом иммунном ответе //Вестник Уральской медицинской академической
науки. - Том 1.-№ S3 (14).-2006.-с.186-188.