К вопросу о влиянии микотоксинов на клетки печени крыс при раздельном и комбинированном поступлении в организм с пищей.

Карапетян А.Ф., Арутюнян Т.А.

Ереванский государственный университет

Целью настоящей работы явилось изучение апоптоз-индуцирующего влияния микотоксинов (афлатоксина В1, охратоксина А, зеараленона) и их комбинации на паренхиматозные клетки печени.

Материл и методы.

Опыты ставились на крысах линии Вистар весом тела от 180 до 260 г, которым вместе с пищей ежедневно вводили микотоксины. Подопытные крысы были разделены на группы, которые отличались между собой по продолжительности опыта и получаемым ими микотоксинами (табл. 1). Контролем служила печень крыс, содержащихся в одинаковых условиях вместе с подопытными, но получавших обычную пищу.

Таблица 1

Микотоксины	Продолжительность опыта	Количество животных
Афлатоксин B1 (0.86мкг/кг/день)	15 дней	5
	30 дней	5
	60 дней	5
Охратоксин A (1.31 мкг/кг/день)	15 дней	5
	30 дней	5
	60 дней	5
Зеараленон (1.44 мкг/кг/день)	15 дней	5
	30 дней	5
	60 дней	5
Афлатоксин B1 (0.28 мкг/кг/день), охратоксин A (0.44 мкг/кг/день), зеараленон (0.45 мкг/кг/день)	15 дней	5
	30 дней	5
	60 дней	5

Схема эксперимента

Форму клеточной гибели и жизнеспособность клеток в условиях поступления в организм микотоксинов и их комбинации оценивали с использованием двойной окраски аннексином V Cy3.18 (AnnCy3) и 6-карбоксифлуоресцеин диацетатом.

При использовании данного метода жизнеспособные клетки окрашиваются только 6-карбоксифлуоресцеином (зеленый), некрозные клетки – только аннексином (красный), а клетки на ранней стадии апоптоза окрашиваются одновременно аннексином V (красный) и 6-карбоксифлуоресцеином (зеленый).

Статистический анализ данных был произведен с применением метода хи-квадрат.

Результаты исследования.

Как показывают полученные данные, примененные в наших опытах микотоксины при раздельном введении с пищей уменьшали (p<0.05 во всех образцах) в печени долю жизнеспособных клеток через 30 и 60 суток после начала опыта. Причем, влияние афлатоксина В1 было отмечено уже через 30 суток, охратоксина А и зеараленона – через 60 суток после их применения. Что же касается влияния комбинированного введения микотоксинов, то оно сказывалось на данный параметр органа уже через 15 суток после начала опыта. Относительное количество клеток, находящихся на ранних стадиях апоптоза среди клеток изученной выборки значительно увеличивалось через 30 суток после начала введения афлатоксина и 60 суток после начала поступления в организм охратоксина А и зеареленона (71%, 52% и 53,5% соответственно). При раздельном введении афлатоксина В1 среди клеток печени появлялись некротизирующие через 30 суток после начала опыта. Комбинированное введение с пищей указанных микотоксинов вызывало некроз гепатоцитов (5% гепатоцитов) через 30 суток после начала опыта.

Таким образом, хроническое влияние микотоксинов (афлатоксин В1, охратоксин А и зеараленон) и их комбинации приводило к апоптозу в клетках печени крыс. При комбинированном воздействии максимальный эффект (54.2%) наблюдался после 15-дневной обработки пищи указанными микотоксинами. Однако при увеличении продолжительности опыта доля апоптозных клеток несколько уменьшалась (от 54,2% через 15 суток до 40% через 60 суток), что может быть связано с возможной трансформацией клеток печени.