Давиденко І.С., Зелінська Н.В., Давиденко О.М.

ОКРЕМІ ВЛАСТИВОСТІ БІЛКІВ У ПОЛЯХ НЕУРАЖЕНОГО ПУХЛИНОЮ ЕКТОЦЕРВІКСУ ТА ПЛОСКОКЛІТИННОЇ КАРЦИНОМИ ШИЙКИ МАТКИ ПРИ ПАПІЛОМАВІРУСНІЙ ГЕНІТАЛЬНІЙ ІНФЕКЦІЇ (ГІСТОХІМІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ)

Вищий державний навчальний заклад України «Буковинський державний медичний університет», м. Чернівці

Вступ. Методика забарвлення з бромфеноловим синім на «кислі» та «основні» білки за Mikel Calvo дозволяє за кольором диференціювати білки, в яких переважають карбоксильні групи (так звані «кислі» білки) – червона ділянка спектру, від білків, в яких аміногрупи переважають над карбоксильними («основні» білки) – синя ділянка спектру. Сучасні можливості об’єктивної оцінки кольору (комп’ютерна мікроспектрофотометрія) дають змогу отримувати високоточні та відтворювані результати вимірювань кольору. На основі комп’ютерної мікроспектрофотометрії, використовуючи комп’ютерну систему аналізу кольору RGB (від англ. “Red” - червоний, “Green” - зелений, “Blue”- синій) отримують коефіцієнт R/B, який власне і є кількісною відносною мірою оцінки такої властивості білків, як переважання в них карбоксильних груп чи аміногруп. Без сумніву, властивості білків у цитоплазмі пухлинних клітин, які є паренхімою пухлини, залежать, у першу чергу, від конкретних порушень генетичного матеріалу клітин певного типу пухлини. Отже, різні властивості білків, продукованих клітинами різних типів пухлин, потенційно мають діагностичне значення. Це перший можливий аспект використання методики Mikel Calvo при пухлинах. З іншого боку, відомо, що співвідношення між карбоксильними та аміногрупами білків міняється при процесах окиснювальної модифікації білків тому з урахуванням принципової можливості використання протиоксидантів у лікуванні хворих на пухлини, визначення показника R/B може бути використаним в удосконаленні методів лікування пацієнтів, хворих на те чи інше пухлинне захворювання. Це другий аспект застосування методики Мікель-Кальво. Ще один із аспектів застосування методики з бромфеноловим синім на «кислі» та «основні» білки за Mikel Calvo при пухлинах є оцінка стану волокнистого компонента строми пухлини. Підґрунтям для цього є те, що у протеїнах «молодих» (недавно утворених) сполучнотканинних волокон хоч і переважають карбоксильні групи над аміногрупами, все ж це переважання не є таким відчутним, як у зрілих сполучнотканинних волокнах, тобто співвідношення між карбоксильними та аміногрупами білків дає кількісне уявлення про зрілість колагенових волокон. Оцінка зрілості стромального компонента пухлини є одним з цінних показників стану пухлинної тканини.

Матеріали та методи дослідження. Папіломавірусну інфекцію встановлювали на підставі виявлення діагностичної кількості койлоцитів плоского епітелію в неуражених пухлинним процесом ділянках ектоцервіксу при його дослідженні в гістологічних препаратах, пофарбованих гематоксиліном і еозином. На серійних гістологічних зрізах біоптатів неуражених пухлиною ділянок ектоцервіксу та зроговілої і незроговілової плоскоклітинної карциноми ставили гістохімічну методику з бромфеноловим синім на «кислі» та «основні» білки за Mikel Calvo. Цифрові зображення, отримані з дотриманням процедур стандартизації [1] за допомогою мікроскопа Delta Optical Evolution 100 (планахроматичні об'єктиви) та цифрової камери Olympus SP-550UZ, аналізували за допомогою комп'ютерної програми ImageJ (1.48v, вільна ліцензія, W.Rasband, National Institute of Health, USA, 2015) [2], зокрема, зондовим методом в системі аналізу кольору RGB, отримували величини «R» та «B», на основі яких обраховували коефіцієнт R/B. Далі обраховували середню арифметичну та її похибку, а розбіжність у середніх тенденціях оцінювали за допомогою непарного критерію Стьюдента (комп'ютерна програма PAST 3.10, вільна ліцензія, O.Hammer, 2015) [3].

Результати досліджень. Результати досліджень разом зі статистичною обробкою цифрового матеріалу представлені у таблиці.

Таблиця

Коефіцієнт R/B у гістологічних зрізах тканин пофарбованих бромфеноловим синім на «кислі» та «основні» білки за методом Mikel Calvo у ділянках нормального епітелію та в ділянках пухлинного поля плоскоклітинної карциноми шийки матки при папіломавірусній генітальній інфекції

№ з/п	Групи дослідження	Коефіцієнт R/B
		У цитоплазмі не пухлинних чи пухлинних епітеліальних клітин	У слизу цервікального каналу	У сполучнотканинних волокнах пухлини
1.	Нормальний плоский епітелій ектоцервіксу позапухлинного поля (n = 22)	3,86±0,038	1,31±0,020	3,09±0,017
2.	Плоскоклітинна карцинома незроговіла (n = 28)	2,94±0,029 Рп<0,001	1,37±0,016 Рп=0,015	2,08±0,021 Рп<0,001
3.	Плоскоклітинна карцинома зроговіла (n = 24)	3,18±0,037 Рп<0,001 Рпнр=0,002	1,39±0,018 Рп=0,009 Рпнр>0,05	2,34±0,024 Рп<0,001 Рпнр<0,001

Примітка: Рп – у порівнянні з нормальним плоским епітелієм; Рпнр – у порівнянні з плоскоклітинною незроговілою карциномою.

Як свідчать вказані в таблиці дані, при плоскоклітинній карциномі, незалежно від її форми, за умов папіломавірусної генітальної інфекції в пухлинних епітеліоцитах суттєво зменшується коефіцієнт R/B у порівнянні з епітеліоцитами позапухлинного ектоцервіксу, Важливо відмітити, що встановлена розбіжність і між зроговілою та незроговілою карциномами. Щодо величини коефіцієнту R/B у слизу цервікального каналу, то вона над полями плоскоклітинних карцином є вищою, ніж над полями нормального плоского епітелію. А ось середні величини коефіцієнту R/B у сполучнотканинних волокнах суттєво знижені в тканині плоскоклітинної карциноми в порівнянні з полями нормального ектоцервіксу, причому при не зроговілій карциномі зниження є найбільш суттєвим.

Висновок. Дослідження коефіцієнту R/B в епітеліальних клітинах, у слизу цервікального каналу та у сполучнотканинних волокнах при постановці гістохімічної методики з бромфеноловим синім на «кислі» та «основні» білки за методом Mikel Calvo при папіломавірусній генітальній інфекції дозволяє підсилити аргументацію щодо діагностики плоскоклітинної карциноми з можливістю окремого диференціювання між собою плоскоклітинної зроговілої та незроговілої карцином.

Література.

1. Давиденко І.С. Принципи стандартизації гістохімічної методики, придатної для кількісної оцінки, на прикладі методики на окиснювальну модифікацію білків (лекція) / І.С.Давиденко, О.М.Давиденко // Materiály XI mezinárodní vědecko - praktická konference «Přední vědecké novinky – 2015». - Díl 4. Lékařství. Biologické vědy.Ekologie.Zeměpis a geologie. Chemie a chemická technologie. Zemědělství. Zvěrolékařství: Praha. Publishing House «Education and Science» s.r.o - 88 stran. Р. 12-14.

2. Ferreira T. ImageJ . User Guide / T. Ferreira, W. Rasband. – New York: National Institute of Health. - 2012. – 187 p.

3. Hammer Ø. PAST: Paleontological Statistics, Version 3.0. Reference manual / Ø. Hammer. – Oslo: Natural History Museum University of Oslo. – 2013. – 221 p.