Хімія та хімічні технології. 4. Хіміко-фармацевтичне виробництво

К.т.н. Хромишев В.О., к.х.н. Хромишева О.О.,

Комарова Я.П.

Мелітопольський державний педагогічний університет імені Богдана Хмельницького, Україна

Ідентифікація та визначення вмісту кумаринів у плодах Aesculus hippocastanum L.

В останні роки значно зріс інтерес до препаратів рослинного походження як в нашій країні, так і за кордоном. На міжнародному фармацевтичному ринку кожен третій препарат має рослинне походження.
До Державного реєстру України включено близько 250 найменувань лікарської рослинної сировини і понад 600 препаратів рослинного походження. Однією із рослин, яку широко застосовують у медицині є каштан кінський.

Гіркокаштан звичайний, каштан кінський, Aesculus hippocastanum - листопадне дерево родини гіркокаштанових (Hippocastanaceae), що росте по всій території України. Для виготовлення ліків використовують кору молодих гілок (Cortex Aesculi hippocaslani), листя (Folia Aesculi hippocastani), квітки (Flores Aesculi hippocastani) і плоди (Fructus Aesculi hippocastani) [1].

Препарати з плодів гіркокаштану звичайного виявляють протизапальну і протинабрякову дію, зменшує в'язкість крові, мають капілярозміцнюючі властивості, знижують артеріальний тиск, нормалізують вміст холестерину і ле- цитину в крові, зменшують ліпоїдоз аорти і печінки. Доведено також вазотонічну, судинозвужуючу і знеболюючу дію рослини. У вітчизняній і зарубіжній медицині гіркокаштан звичайний використовують для виготовлення препаратів, які застосовують в основному при різних судинних захворюваннях та деяких інших хворобах [1].

Використання гіркокаштану звичайного в медицині потребує розробки раціональних схем вилучення та кількісного визначення вмісту біологічно-активних речовин в його плодах. Одними з основних діючих речовин плодів гіркокаштану звичайного є кумарини.

Тому метою роботи було виявлення та визначення вмісту кумаринів у плодах Aesculus hippocastanum L.

Плоди гіркокаштану звичайного (Aesculus hippocastanum) були зібрані протягом вересня-жовтня 2016 року в околицях міста Мелітополя Запорізької області. Плоди збирали повністю достиглими, коли вони починали падати.

Сировина була заготовлена згідно з вимогами Державної Фармакопеї України.

Для якісного визначення кумаринів у плодах гірко каштану звичайного використали метод екстракції 80% етанолом з подальшою обробкою гарячою водою та фільтруванням. Якісне визначення кумаринів проводили за допомогою наступних реакцій: 1) лактонна проба (до 3-5 мл спиртового екстракту додають 10 крапель 10% розчину КОН в метанолі та нагрівають на водяної бані протягом 5 хвилин); 2) діазореакція (до 1-2 мл спиртового екстракту додають 3-4 мл 2% розчину соди, рідину нагрівають на водяній бані до кипіння і охолоджують. До розчину додають 2-3 краплі свіжоприготованого діазотованого n-нітроаніліна).

При проведенні реакції на лактонну пробу з екстрактом кінського каштана спостерігали зміну забарвлення – розчин жовтів (при розриві лактонного кільця утворилися кумаринати, які забарвлювали розчин у жовтий колір). При додаванні невеликої кількості дистильованої води екстракт став більш прозорим (кумаринати розчинні у воді). Підкислення екстракту концентрованою НСl визвало помутніння розчину.

В ході проведення діазореакції з екстрактом кінського каштана спостерігали інтенсивне забарвлення розчину в вишнево-бурий колір.

Для встановлення вмісту кумаринів використовували метод диференціальної фотоелектроколоріметрії, заснований на реакції кумаринів з діазотованою сульфаниловою кислотою в лужному середовищі, описаний в роботах [2-3]. 
Розрахунок вмісту суми кумаринів проводили в перерахунку на ескулетин. Вимірювання оптичної щільності проводили на КФК-2 при довжині хвилі 490 нм.
Для побудови калібрувального графіку використовували робочий стандартний зразок ескулетину (виробництва Шэньси Huazhen Biotech Co., Ltd, Китай), попередньо очищений методом подвійної кристалізації.

Процентний вміст суми кумаринів х (%) обчислюють за формулою:

,

де с – вміст ескулетину в 1 мл досліджуваного розчину, знайдений за калібрувальним графіком, г; m – маса наважки сировини, г; ω – втрата в масі при висушуванні сировини, %.

У ході експерименту було встановлено відсотковий вміст кумарину в плодах кінського каштана. Він складав 1,318±0,008% (n=6).

Завдяки розробленим методам вилучення кумаринів з рослинної сировини можна розробити технологію ефективного виділення кумаринів з Aesculus hippocastanum, що дозволить розробити нові лікарські препарати з протипухлинним, антимікробним та антивірусним ефектом.

Література

1. Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник / Відп. ред. А.М. Гродзінський. - К.: Видавництво «Українська Енциклопедія» ім. М.П. Бажана, Український виробничо-комерційний центр «Олімп», 1992. - 544с.

2. Прокопенко О.П. Колориметричний метод кiлькiсного визначения кумаринів / О.П. Прокопенко // Фармацевтичний журнал, 1992. – Т. 17, № 6. – С. 18-22.

3. Горячкина Е.Г. Изучение кумаринов трехреберника непахучего и нивяника обыкновенного / Е.Г. Горячкина, О.И. Мазунова, Г.М. Федосеева // Современная медицина: актуальные вопросы: сб. ст. по матер. XIV междунар. науч.-практ. конф. – Новосибирск: СибАК, 2013. – С. 133-137.