Мищенко А.А., Тржецинский С.Д., Мозуль В.И.

Запорожский государственный медицинский университет, Украина

Фитохимическое исследование клевера лугового

В последнее время уделяется значительное внимание не только изучению хорошо известных на протяжении многих веков лекарственных растений, но и поиску новых источников природных соединений, способных расширить номенклатуру официнальных лекарственных растений и лекарственного растительного сырья.

Клевер луговой (Trifolium pratense L.) – двулетнее или многолетнее травянистое растение семейства бобовые (Fabaceae). Корень стрежневой, часто с клубеньками азотфиксирующих бактерий. Стебли прямые, восходяще-дуговидно-изогнутые, разветвленные, опушенные, 40-70 см высотой. Главный стебель укорочен. Стеблей от 3 до 8 на одном растении. Листья тройчатые. Соцветия головчатые, размещены на верхушках побегов диаметром 15-20 мм и состоят из 20-40 цветков. Цветки мелкие, неправильной формы, сидячие, длиною 7-11 мм, розовые. Плод яйцевидной формы, односеменной боб [2, 4].

Представителей рода клевер (Trifolium) насчитывается около 300 видов. На территории Украины произрастает около 30 видов клевера. Распространены повсеместно в Украине, европейской части России, Сибири, Южной Африке (Алжир, Марокко, Тунис), Западной и Восточной Азии, на Кавказе, Дальнем Востоке, по всей Европейской части. Растет на пойменных лугах, среди кустарников, на опушках в лесной и лесостепной зонах, реже в степи [1, 2, 3].

Виды рода клевер содержат эфирное и жирное масло, дубильные вещества, изофлавоноиды, биофлавоноиды, биотин, холин, полисахариды, алкалоиды, гликозиды трифолин, изотрифолин, инозитол, трифолизин, ненасыщенные жирные кислоты, органические кислоты, ситостеролы, смолы, витамины, микроэлементы, белок, аминокислоты, клетчатку [1, 2, 3].

Экстракт клевера лугового обладает противомикробной активностью, уменьшает уровень триглицеридов, а также улучшает липидный гомеостаз у больных сахарным диабетом 2 типа. Изофлавоноиды клевера лугового снижают артериальное давление, проницаемость сосудов, тем самым снижают риск сердечно-сосудистых заболеваний [5, 6]. Кроме того, изофлавоноиды клевера оказывают антиэстрогенный эффект и применяются для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы [3, 5, 6]. Также трава клевера лугового обладает сосудоукрепляющим, диуретическим, желчегонным, противоязвенным, противовоспалительным, регенерирующим функцию печени действиями.

В настоящее время химический состав биологически активных веществ клевера лугового изучен недостаточно.

Целью работы являлось исследование компонентного состава жирного масла, количественного содержания аминокислот и витаминов клевера лугового.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования являлась трава клевера лугового, заготовленная в Запорожской и Днепропетровской области в фазу цветения растения.

Жирное масло из семян клевера извлекали петролейным эфиром. 2-3 капли масла растворяли в 1,9 мл гексана. В полученный раствор вводили 0,1 мл метилата натрия в метаноле. Полученные метиловые эфиры жирных кислот анализировали на газожидкостном хроматографе «Цвет-4» с пламенно-ионизационным детектором ДИП-1. Условия хроматографирования: колонки стальные, длиной 25 м; твердый носитель – хроматон N-АV (0,25 – 0,31 мм); подвижная фаза – полиэтиленгликоль-сукцинат (19%); газ-носитель – азот. Идентификацию компонентов жирного масла проводили сравнением относительного времени удерживания методом внутреннего стандарта. Количественное содержание компонентов жирного масла определяли методом внутренней нормализации.

Анализ аминокислотного состава травы клевера проводили с использованием аминокислотного анализатора ААА – 339 М.

Определение витамина Е проводили методом тонкослойной хроматографии с последующим элюированием и спектрофотометрическим анализом элюата на спектрофотометре СФ-46.

Витамины группы В (В₁ и В₂) определяли с помощью флуорометрического метода. Принцип метода заключается в том, что при окислении в щелочной среде витамин В₁ (тиамин) превращается в флуоресцирующее вещество – тиохром, а витамин В₂ (рибофлавин) имеет собственную желто-зелёную флуоресценцию. Для анализа был использован флуорометр ЕФ-3МА.

Количественное определение витамина С (аскорбиновой кислоты) определяли титриметрическим методом.

Результаты и их обсуждение

В результате фитохимического исследования было установлено, что количественное содержание жирного масла в семенах клевера лугового составляет 17,57 %. Методом газожидкостной хроматографии в составе жирного масла клевера лугового идентифицировано 8 жирных кислот (табл.1). В наибольшем количестве содержатся: линолевая (60,20 ± 0,05%), олеиновая (14,54 ± 0,03%), линоленовая (7,97 ± 0,01%) кислоты.

Табл.1

Содержание жирных кислот в жирном масле клевера лугового

№ п/п	Название жирной кислоты	Сокращенное химическое обозначение	Количественное содержание, %
1.	Миристиновая	14:0	0,52 ± 0,01
2.	Пальмитиновая	16:0	5,05 ± 0,02
3.	Пальмитолеиновая	16:1	2,20 ± 0,01
4.	Стеариновая	18:0	4,33 ± 0,01
5.	Олеиновая	18:1	14,54 ± 0,03
6.	Линолевая	18:2	60,20 ± 0,05
7.	Линоленовая	18:3	7,97 ± 0,01
8.	Эйкозеновая	20:1	5,19 ± 0,01

Значительно в меньшем количестве найдены кислоты: эйкозеновая (5,19±0,01%), пальмитиновая (5,05±0,02%), стеариновая (4,33±0,01%), пальмитолеиновая (2,20±0,01%). Наименьшее содержание миристиновой кислоты (0,52±0,01%).

Сумма аминокислот в траве клевера лугового составляет 16,55 мг/100 мг. С помощью спектрофотометрического метода в наибольшем количестве найдено аминокислоты: глицин (2,19 мг/100мг), аргинин (1,95 мг/100мг), валин (1,72 мг/100мг), аланин (1,64 мг/100мг), серин (1,37 мг/100мг). Содержание витамина Е в траве клевера лугового составляет 2,05 мг%, витамина В₁ – 2,70 мг%, витамина В₂ – 2,30 мг%, аскорбиновой кислоты – 1,8 %.

Выводы

1. Методом газожидкостной хроматографии в жирном масле клевера лугового установлено наличие 8 жирных кислот. В наибольшем количестве содержатся: линолевая (60,20±0,05%), олеиновая (13,53±0,03%), линоленовая (6,97±0,01%).

2. С помощью аминокислотного анализатора определен аминокислотный состав травы клевера лугового.

Основными аминокислотами являются глицин (2,19 мг/100мг), аргинин (1,95 мг/100мг), валин (1,72 мг/100мг), аланин (1,64 мг/100мг), серин (1,37 мг/100мг).

3. Определено количественное содержание витаминов Е, В₁, В₂, С.

Литература:

1. Культурная флора. Многолетние бобовые травы (клевер, лядвенец) / Под ред. Мухиной Н.А., Станкевич Л. К. - М.: Колос, 1993. - 335 с.

2. Кьосев П.А. Лекарственные растения / П.А. Кьосев – М.: ЭКСМО, 2001. - 944 с.

3. Носов А.М. Лекарственные растения официнальной и народной медицины / А.М. Носов. – М.: ЭКСМО, 2005. - 800 с.

4. Штаныко О. А. Морфологические особенности дикорастущего клевера лугового (Trifolium pratense L.) Карелии //Науч.-техн. бюл. ВИР, 1984. Вып. 144. - С. 42-43.

5. Blakesmith S, Lyons-Wall P, George C, Joannou G, Petocz P, Samman S. Effects of supplementation with purified red clover (Trifolium pratense) isoflavones on plasma lipids and insulin resistance in healthy premenopausal women // Br J Nutr. – 2003. – Vol.89. – P.467-474.

6. Campbell M, Woodside JV, Honour JW, Morton MS, Leathem AJ. Effect of red clover-derived isoflavone supplementation on insulin-like growth factor, lipid and antioxidant status in healthy female volunteers: a pilot study // Eur J Clin Nutr. – 2004. – Vol.58. - P.173-179.