Медицина

Д.м.н. Терёшин К.Я., Воропаев С.Ф.

ГБОУ ВПО ДВГМУ, г. Хабаровск.

Современные методы исследования

пролиферативной активности у больных псориазом

Как известно, псориаз относится к хроническим, рецидивирующим заболеваниям кожи мультифакторной природы (Мордовцев В.Н. с соавт., 1991) и обусловлен сочетанным влиянием нескольких генов (НLА-В-13; В 17; В-37; СW-6), активность которых находится под сильным воздействием экзогенных и эндогенных факторов. Это приводит к выраженным патологическим сдвигам и дисбалансу факторов регуляторного континуума – в стресс-активирующей и стресс-лимитирующей системах. Гиперадаптоз приводит к активации псориатического генома эпидермиса десинхронозу – к нарушениям межклеточных взаимодействий в эпидермисе и формированию пролиферативного дисрегуляторного синдрома эпидермиса. Результатом этих сдвигов является гиперпролиферация в эпидермисе и нарушение дифференцировки кератиноцитов.

Выяснение причин патологических процессов у больных псориазом и особенностей клинического течения дерматоза в сочетании с лабораторными исследованиями, по нашему мнению, позволит применить данные прогностического характера в плане рекомендаций и повысить эффективность лечебно-профилактических мероприятий (Терёшин К.Я., 2004).

В последние годы получили развитие методы количественной цитологии, включающие в себя морфологические исследования с помощью компьютерных систем анализа изображения и определения активности ядрышкового организатора рибосом (ЯОР) клеток кожи. При этом в многочисленных исследованиях подтверждена высокая значимость величины ЯОР в определении пролиферативной активности различных тканей. Кроме того, этот способ оказался взаимодополняющим и коррелирующим с результатами определения пролиферативного статуса с помощью экспрессии ядерного антигена пролиферирующей клетки (РСNА), применении моноклонального антитела Кi-67 и использования in vitro Н3-тимидина (Linder J., 1994).

Цель исследования. Для решения вопроса о преимуществе определения пролиферативной активности методом количественной цитологии (ЯОР) с помощью мазков-отпечатков из очагов поражения, перед авторадиографическим методом исследования биоптатов псориатических бляшек, проводилось параллельное исследование у здоровых и больных псориазом.

Материал и методы. У 60 больных псориазом и 30 здоровых (контрольная группа) проведено изучение митотической активности клеток кожи авторадиографическим методом с Н3-тимидином. Биопсии проводились между 11 и 13 часами, чтобы исключить влияние суточных ритмов на синтез ДНК. Полученные данные свидетельствуют об активации клеточного деления у больных псориазом. Это подтверждается достоверным увеличением индекса меченых ядер, который увеличивался более чем в 3,5 раза (15,02±0,55% у больных псориазом, по сравнению с 3,9±0,43% в контрольной группе, при Р<0,001), что характеризовало прогрессирующую стадию кожного процесса.

У 300 больных псориазом и 30 здоровых оценивалась активность ЯОР. Ядрышковый организатор рибосом входит в состав ядрышка и представляет собой участок, содержащий р-хроматин, т.е. хроматин, несущий рибосомные гены. Эту зону рассматривают как хромосомный участок, где локализуется рибосомальная ДНК (р-ДНК), сохраняющаяся при исчезновении ядрышка во время клеточного деления в участках акроцентрических хромосом 13, 14, 15, 21, 22 (Челидзе П.В., Зацепина О.В., 1988). Изучение ЯОР проводилось в препаратах, окрашенных 50% раствором АgNО3 в течение 20 мин, при подсчёте нескольких морфометрических параметров, основным из которых был подсчёт числа зон ЯОР. Полученные данные показали, что число зон ЯОР в псориатических очагах составляло 1,69±0,15 (в контрольной группе – 1,10±0,07), при Р<0,01.

Полученные результаты показали информативность и достоверность данного метода оценки активности ЯОР и значительное увеличение пролиферативных процессов при прогрессировании псориаза.

Обсуждение результатов. Полученные ранее данные (Терёшин К.Я., 2004) указывают на важное значение выявленных нарушений у больных псориазом, выражающиеся во взаимосвязи патогенетической цепи на разных этажах регуляции: микроциркуляции, коагуляции и пролиферации. Подобное нарушение взаимодействия регуляторных систем организма и создаёт условия для нарушения гистофизиологических механизмов поддержания тканевого гомеостаза.

Дефицит объективных критериев, доступных в практической дерматологии, является одним из существенных недостатков. Предложенная методика определения ЯОР даёт возможность судить об основных патологических изменениях, происходящих в коже больных псориазом и имеет значение в прогнозировании течения дерматоза, т.к. при усилении активности ядрышкового организатора рибосом в видимо здоровой коже, а особенно в «дежурных бляшках», указывает на вероятность обострения псориаза, в частности, при неопределённой его форме.

В прогнозировании течения дерматозов и, особенно осложнений, предлагаемых в научной литературе тесты иммунологических и биохимических исследований являются неспецифичными для псориаза и применяются для определения данных показателей и при других заболеваниях (например, определение холестерина, иммунного статуса и др.) Поэтому показатели пролиферативной активности и особенно многопараметрическое определение наиболее информативных признаков ЯОР, являются специфичными и объективными, т.к. они основаны на характеристике митотической активности клеток кожи в очагах поражения и легко выполнимы в обычной общебольничной лаборатории (Терёшин К.Я., 2004).

Выводы. Цитологическое исследование мазков-отпечатков из очагов поражения наряду с высокой информативностью имеет явное преимущество перед авторадиографическим методом исследования митотической активности в биоптатах кожи. Сравнительная оценка 2-х методов показала, что важным преимуществом метода количественной цитологии (ЯОР) является нетравматичность метода исследования, более быстрая статистическая обработка результатов, которые можно получить в течение 2-х часов с момента взятия цитологического отпечатка из псориатического очага поражения (вместо 4-х недель при авторадиографическом исследовании). Тем не менее, данный метод коррелирует с авторадиографическим исследованием, при этом их совместное применение способно выявить некоторые механизмы пролиферативности клеток в псориатическом очаге.

Литература:

1. Мордовцев В.Н. Псориаз (патогенез, клиника, лечение) / В.Н. Мордовцев, Г.В. Мушет, В.Н. Альбанова.-Кишинёв,1991.- 146с.

2. Терёшин К.Я Особенности течения псориаза в условиях Дальнего Востока и разработка методов его прогнозирования и корригирующей терапии: Автореф. ….дисс. д-ра мед. наук.- Москва, 2004.-33с.