Коновалова А.А., Погосян Г.П., Ли К.Г., Ли П.К.
Карагандинский государственный университет им.
Е.А. Букетова
Лаборатория ДНК-диагностики
«Здравницы Дипнера»
Изучение генетически
модифицированных ингредиентов в шоколадных продуктах
Проблема
возможности широкого применения генетически модифицированных ингредиентов (ГМИ)
при производстве продуктов питания широко обсуждается в мировом
сообществе/1,2/. По данным Американского совета по науке и здравоохранению пока
нет достоверной научной информации, свидетельствующей о какой-либо опасности,
присущей генетически модифицированным организмам (ГМО). Это вовсе не означает,
что какие бы то ни было риски, связанные с такими продуктами отсутствуют в
принципе/3,4/. Оппоненты ускоренного внедрения ГМ - организмов предупреждают,
что отрицательные эффекты на здоровье человека могут проявиться не сразу, и
иметь необратимый характер. Учитывая огромное количество населения,
использующее ГМО – продукты (сою, кукурузу, рис, картофель и др.), замедленные
эффекты могут привести к массовым нежелательным последствиям /5,6/. В последние
годы стали известными результаты некоторых исследований, которые
свидетельствуют о том, что ГМ-продукты отрицательно
влияют на живые организмы /7/. Из литературных данных известно, что ГМИ могут
угнетать иммунную систему, вызывать аллергию /8/. Компоненты, содержащиеся в
ГМ-продуктах, могут быть также высокотоксичными /9/.
Из изложенного выше следует, что существует необходимость изучения пищевых продуктов на наличие в них ГМИ.
Целью настоящего исследования было тестирование
шоколадных изделий на наличие в них ГМИ методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР).
Критериями отбора продуктов служили: доступность цен;
распространенность на рынке продуктов питания; отсутствие маркировки на
содержание ГМИ.
МАТЕРИАЛЫ И
МЕТОДЫ
Материалы. Гомогенат шоколадных изделий: «Alpen Gold, ООО Крафт Фудс Рус», «Nestle Classic, ОАО Кондитерское
Объединение Россия», «На здоровье, Кондитерская фабрика Рахат»,
«Kinder Chocolate Maxi, Ferrero oHG mbH», «Milky
Way, ООО Марс», «Конфета шоколадная Рахат,
Кондитерская фабрика Рахат».
Методы. Выделение ДНК из описанных продуктов осуществляли,
используя комплект «ДНК-сорб-С» вариант 50 /10/. Амплификацию
последовательности промотора 35S, а также генов сои и кукурузы проводили с использованием
набора реактивов «АмплиСенс вариант 50-R ПЛАНТ-СКРИН», «АмплиСенс
вариант 50-R Терминатор
Nos», «АмплиСенс вариант 50-R ГМ-соя 40-3-2».
Электрофоретический анализ продуктов ПЦР в агарозном
геле проводили с помощью комплекта «ЭФ вариант 300» [10]. Анализ электрофореза
проводили, обрабатывая с помощью компьютерной системы Totallab.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Первоначальные эксперименты ставили с тест-системой «ПЛАНТ-СКРИН».
После выделения ДНК из шести сортов шоколадных изделий ставили реакции
амплификации в соответствующем режиме. Число циклов составляло 42. По окончании
ПЦР продукты амплификации анализировали процедурой электрофореза в агарозном геле. Применяли положительный и отрицательный
контрольный образцы. Для большей достоверности, эксперимент ставили по 3
раза с каждым образцом. Фотография электрофореза
представлена на Рис. 1.
На рисунке в протестированных продуктах искомые ГМИ не были
выявлены.
Следуя рекомендациям «Инструкции АмплиСенс–50-R», при получении
отрицательного результата в указанной тест-системе «ПЛАНТ-СКРИН», необходимо
исследуемые продукты проверить с комплектом реагентов «Терминатор NOS», а при получении положительного результата – «ГМ – соя». Все исследуемые объекты
тестировали в описанных системах.
С выделенными ДНК образцами ставили ПЦР с использованием
тест-системы «Терминатор NOS».
По окончании реакций проводили детекцию продуктов в электрофорезном геле. Результаты электрофореза приведены на
Рис. 2.
Анализ фотографии электрофореза показал, что шоколадные изделия «Alpen Gold,
ООО Крафт Фудс Рус», «Nestle
Classic,
ОАО Кондитерское Объединение Россия», «Kinder Chocolate
Maxi,
Ferrero oHG mbH»
наличие искомых фрагментов ДНК. В остальных образцах ГМИ компоненты не
выявлены.
Учитывая литературные сведения об использовании в
производстве некоторых шоколадных продуктов ГМ-сои,
дальнейшие эксперименты проводили с применением тест-системы «ГМ соя 40-3-2».
Картина электрофореза амплифицированных фрагментов
ДНК, приведенная на рисунке 3, демонстрирует положительный результат только
одного из испытанных объектов исследования - шоколада «На здоровье».
Таким образом, проведенные исследования выявили
наличие ГМИ в, что свидетельствует о применении компонентов трансгенных
растений в производстве этих продуктов и не обнаружили фрагментов ДНК этих
организмов в.
Дальнейшие исследования предполагают расширение
спектра изучаемых продуктов, увеличение количества тест-систем с целью
выявления различных генетически модифицированных ингредиентов, а также
определение в выявленных фрагментах ДНК последовательности нуклеотидов.
Список литературы
1. Новикова Т.А. Продукты питания, модифицированные методами генной инженерии // Биология в школе. – 2004. - №4.- С. 9-15.
2. Бутенко Р.Г. Новые направления в физиологии
растений. – М.: Наука, 1985. – 296 с.
3. Норман
Э. Борлоуг Зеленая революция: вчера, сегодня и завтра
// Экология и жизнь. – 2001. - №4. -
С.16-23.
4. Лихтенштейн К., Дрейпер Дж.
Генетическая инженерия растений // Клонирование ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера. – М.: Мир, 1988. – С. 315-380.
5. Глик Б., Пастернак Дж.
Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. – М.: Мир, 2002. – 589 с.
6. ГМО – зона повышенного риска / Под ред. Е. Климова. Алматы: Спектр, 2003. – 52 с.
7. Рекославская Н.И., Саляев Р.К., Щелкунов С.Н. «Съедобные» вакцины на основе трансгенных растений // Изучение генома
и генетическая трансформация растений. – Новосибирск: Наука, 2001. – С.
193-210.
8.Дейнеко Е.В., Загорская А.А.,
Шумный В.К. Т-ДНК – индуцированные мутации у трансгенных
растений // Генетика. - 2007. –Т.43, № 1. – С. 5-18.
9. Глеба Ю.Ю. Биотехнология растений // Соросовский
образовательный журнал. – 1998. - № 6. – С. 3-8.
10. Новое в клонировании ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир,
1989. – 368 с.