К.с.х.н. Айсин М.Ж; магистрант Орынтаева М.Д.

Костанайский государственный университет имени А. Байтурсынова, Казахстан

МИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРОБ КОМБИКОРМОВ ДЛЯ ПТИЦЫ

Здоровье и продуктивность сельскохозяйственных животных, а также качество и количество, получаемой от животных продукции, в большей степени зависит от санитарного состояния кормов, потребляемых животными.

Микотоксикозы птицы - одна из наиболее экономически значимых проблем современного птицеводства. Когда-то, считалось, что микотоксины - проблема лишь для тропических регионов,- однако сейчас признано, что она является повсеместной, и не имеет географических границ. Микотоксины наносят огромный экономический вред животноводству и птицеводству во всём мире. Рост плесневых грибов снижает питательную ценность корма, ухудшая его потребление, что приводит к падению продуктивности животных. [1]

Высокопродуктивные породы птицы чрезвычайно чувствительны к микотоксинам. Поражение может не проявляться очевидными клиническими признаками, но снижение продуктивности неизбежно. На сегодняшний день известны более трехсот микотоксинов, большинство из них проявляют токсическое действие в отношении животных и птицы. Среди плесневых грибов основными генераторами токсинов в наших условиях являются Aspergillus, Fusarium, Penicillium, Alternaria. Наиболее часто заражение кормов вызывают афлатоксины, охратоксин, зеараленон, Т-2 токсин и дезоксиниваленол.

Корма редко бывают заражены лишь одним микотоксином; обычно в корме присутствует несколько видов. А если учесть, что рационы чаще всего состоят из нескольких видов растительного сырья, становится понятна необходимость определения загрязнения каждого из них. Например, в пшенице чаще встречаются Т-2 токсин, зеараленон и вомитоксин, в кукурузе — афлатоксины, зеараленон; в ячмене и овсе — охратоксины. Соевые и подсолнечные шрота и жмыхи могут содержать вообще весь спектр микотоксинов [2].

Ранее микотоксикозы у животных и птиц отмечались сезонно и зависели от климатических условий, обусловленных влажностью воздуха до 80% и выше. Промышленное изготовление комбикормов в сочетании с нарушением правил хранения зерна в настоящее время позволяет микотоксикозам возникать в любое время года[3].

Зерно и грубые корма подвержены заражению на всех стадиях производства: сначала полевыми грибами, затем плесенями хранения. Зерновое сырьё может содержать несколько десятков микотоксинов. Говорить о сырье, полностью свободном от микотоксинов, невозможно. Разработаны МДУ наиболее изученных микотоксинов в кормах. Использование кормов естественного происхождения заставляет обратить внимание на полимикотоксикозы[4].

Большинством стран приняты инструкции, призванные контролировать и ограничивать загрязнение микотоксинами кормов и продуктов питания человека. Вместе с тем, присутствие плесеней и их продуцентов в продукции растениеводства неизбежно, а анализы довольно дорогостоящи.

Доступные методы анализа разработаны только для десятой части микотоксинов. Согласно данным FAO, более чем 25% сельскохозяйственной продукции в мире загрязнено микотоксинами

Проблема в том, что заражение микотоксинами, как правило, распределяется неравномерно в массе зерна или комбикорма. В местах скопления плесени концентрация микотоксинов может быть очень высока, в то время как на участках, свободных от плесени, они отсутствуют[4].

Общеизвестно, что стремление современного птицеводства максимально обходиться дешёвыми кормами и добавками растительного происхождения усиливает проблему кормовых микотоксикозов. Локализация микотоксинов в основном сосредоточена в зерновых кормах и особенно в побочных продуктах переработки зернового сырья (отрубях). Кроме того, часто растительные корма характеризуются наличием микотоксинов с низкой концентрацией, которые не удаётся установить ни химическими, ни биологическими методами. В то же время такие корма проявляют кумулятивный эффект в организме птицы и могут вызывать субклинический микотоксикоз независимо от условий содержания, времени года и фазы выращивания. В подобных случаях большинство специалистов будут искать причину внезапно возникших неспецифических симптомов в чём угодно, но редко в действии микотоксинов.

Имеется много проблем, такие как, методы анализа, эффективность существующих на рынке адсорбентов, так и отношения к этим вопросам руководителей животноводческих хозяйств. К сожалению, руководители животноводческих хозяйств недостаточно осведомлены в этом направлении и, поэтому слабому вниманию к проблеме[5].

Цель научно-исследовательской работы является выявление микотоксинов в кормах. Материалом исследований являлись пробы комбикорма отобранные на птицеводческих предприятиях ТОО "Жас-Канат 2006 ", г Рудный, ТОО "Жас-Канат", г.Костанай, Костанайской области в 2014-2015 гг. Были отобраны три средние пробы по двум направлениям яичного и мясного.

В ходе исследований было проанализировано 20 пробы кормов с каждого хозяйства. Пробы комбикорма были проверены на содержание следующих видов микотоксинов: афлатоксин В1, дезоксиниваленол, зеараленон, охратоксин А и Т2 токсин. А также все отобранные пробы были проверены на соответствие органолептических показателей, на наличие грибов, продуцентов микотоксинов, методом посева на твердые питательные среды и микроскопии.

Лабораторные исследования состояли из идентификации микотоксинов в кормах, основанной на определении общей токсичности, биологических пробах на животных, простейших, осуществляемые с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа. Это позволило определить минимальные уровни микотоксинов, предельно допустимые концентрации и степень опасности для птиц.

Метод основан на экстракции зеараленона из пробы хлороформом, очистке полученного экстракта и определении зеараленона методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с флуориметрическим или фотометрическим детектированием.

Микотоксины определялись в соответствии с методическими указаниями и ГОСТами. Органолептический анализ комбикормов проводят - ГОСТ 13496.13-75. Применялись следующие методические указания и ГОСТы: методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах; методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье; ГОСТ Р 53093-2008 Определение содержания зеараленона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма, методы выделения микотоксинов: Т2 токсина, зеараленона (Ф2) и охратоксина А; ГОСТ 30711-2001 Продукты пищевые, методы выявления и содержания афлатоксинов В1 и М1.

Доброкачественные концентрированные корма и  не должны иметь влажность более 15%, вредных примесей (ядовитых) более 1% и сорных – более 8%. Примеси песка, земли, ила не должны превышать в зернофруктах 0,1-0,2%, комбикорме, отрубях – 0,8%.

Санитарно-гигиеническую оценку корма проводят органолептически по внешнему виду, запаху, цвету. Гранулированные комбикорма оцениваются также по крошимости и набуханию. Повышенная набухаемость гранул может отрицательно сказаться на здоровье птицы; кроме того, такой комбикорм быстрее портится.

Микотоксилогическое исследование. Для первичного выделения грибов использовали агаровую среду Чапека. В течение 7-10 суток. Рост и спороношение грибов становится заметным уже через 3 суток, однако для идентификации грибов необходимо большее время культивирования 5-7 суток.

На твердой питательной среде с засеянной на нее пробой пшеницы был обнаружен рост колоний микроскопических грибов зеленоватого цвета с воздушным мицелием (см. Рис 1).

Рисунок 1 - Культивирование на агаре Чапека - А. fumigatus

Микроскопическое исследование грибов, прежде всего непосредственно в чашках, пользуюсь только малым увеличением микроскопа. При этом выявляют наличие мицелиальных тяжей склероцитов плодовитых тел, строение и характер ветвления спорангиеносцев. Затем готовили препараты для детального изучения морфологии гриба. С помощью малого, а затем большого увеличения микроскопа изучали полученные препараты, пользуясь специальными определителями с макроскопическими ключами, идентифицировали грибы.

По результатам проведенных лабораторных исследований было выявлено присутствие микотоксинов в пробах, взятые в ТОО "Жас-Канат", г.Костанай, комбикорм «Рост» мясного направления и пробах ТОО "Жас-Канат 2006 ", г Рудный комбикорм «ПК1-1» для кур-несушек, «ПК-4» для молодняка кур 14-17 недель в пределах максимально допустимых уровней.

Исходя из полученных данных, была составлена сводная таблица по результатам выявления микотоксинов, в исследуемых пробах кормах (см. Таблицу 1).

Таблицa 1 - Показатели микотоксинов, выявленные в исследуемых пробах комбикормов

Вид комбикорма	Афлатоксин В1 мг/кг	Зеараленон мг/кг	Т–2 токсин мг/кг	Вомитоксин мг/кг	Охратоксин А мг/кг
«Рост»	0,007	0,006	0	0,06	0,002
ПК1-1	0,003	0,02	0,001	0,9	0.003
ПК-4	0,001	0,01	0,002	0,001	0

Таким образом, в результате изучения морфологического строения выросших колоний грибов были выявлены шероховатые конидиеносцы с круглыми зеленоватыми головками, на которых в свою очередь были расположены стеригмы с отходящими от них конидиями. На основании этого был сделан вывод, что на зернах пшеницы обнаружена «леечная плесень» или Aspergillus flavus

Наибольше содержание микотосинов (афлатоксина В₁ , зеараленон, вомитоксин, охратоксин А) оказалось в комбикорме «Рост» , что превышает максимально допустимый уровень. В комбикормах «ПК1-1» для кур-несушек, «ПК-4» для молодняка кур содержание микотоксионов не значительное.

Определен видовой состав плесневых грибов в кормах и кормовом сырье, используемых для кормления птицы. Наиболее часто в пробах кормов и сырья выделяли грибы рода Fusarium sp- в 28,0 %, Aspergillus sp. - в 45,3 %, Pénicillium sp. - в 26,7 % случаев.

Следующий этап исследований состояли на определении общей токсичности, с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа

Предлагаемый метод определения дезоксиниваленола и зеараленона в одном образце комбикорма включал следующие этапы:

- подготовка проб и необходимого оборудования;

- экстракцию дезоксиниваленола и зеараленона из образца смесью ацетонитрил - вода (84:16);

- очистку одной части экстракта на колонке со смесью угля с оксидом алюминия;

- определение дезоксиниваленола в очищенном экстракте с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на силикагеле с УФ-детектором при длине волны 224 нм;

- обезжиривание второй части экстракта гексаном;

- разбавление экстракта водой и переэкстракция зеараленона в бензол;

- определение зеараленона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектором при длине волны 283 нм.

Продолжительность анализа - 4 часа.

Рисунок 2 -Обнаружение и количественное определение зеараленона с помощью ВЭЖХ

Ret.time [min]	Type	Area	Amt/Area	Amount [ng/ml]	Grp	Name
5.556	-	-	-	-		Alfa DON
7.183	-	-	-	-		beta DON
11.870MM		3.30834	69.84903	231.08434		ZEN
Totals				231.08434

Обработка результатов испытаний

За результат измерений массовой доли зеараленона в пробе, мг/кг, принимают значение, вычисленное по формуле:

C173,3

Изложенное позволяет заключить, что не все исследованные пробы комбикорма в той или иной степени поражены микромицетами.

В результате был обнаружен микотоксин  зеараленон – 173,3 мкг/кг корма. Предельно-допустимые нормы содержания токсинов микроскопических грибов в кормах и кормовых ингредиентах, предназначенных для скармливания, приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Предельно-допустимые нормы содержания токсинов (Евросоюз)

токсин	корм	ПДК	Ед. изм.
Т-2 токсин	Зерновые	100	Мкг/кг
	Комбикорм /рем.	50	Мкг/кг
	Комбикорм /взрос.	100	Мкг/кг
Зеараленон	Зерно/соя/кукуруза	100	Мкг/кг
	Зерно/комбикорм	50	Мг/кг

Таким образом, концентрация микотоксина зеараленона в комбикорме для птицы превышает предельно-допустимую концентрацию. Так как зеараленон обладает выраженными гормоноподобными (экстрогенными) свойствами, это приведет к негативным влияниям на птицеводческие хозяйства.

Рассматривая и решая проблемы с микотоксикозами, многие специалисты и ученые пришли к выводу и советуют, что при выращивании сельскохозяйственных птиц:

· не нужно спрашивать, какой уровень микотоксинов безопасен;

· не стоит категорически доказывать и выяснять, какой именно токсин вызвал проблему;

· не медлить, если есть доказательство того, что проблема связана с плесневыми кормами, а принимать срочные меры для борьбы с микотоксинами;

· проводить при закупке корма исследования на наличие микотоксинов в аккредитованных лабораториях с применением наиболее эффективных методик и знаний специалистов по отбору проб;

· не экономить на средствах при вводе в корма добавок против микотоксинов — они окупятся улучшением производственных показателей.

Литература:

1. Авреньева Л.И., Соболев B.C., Кравченко Л.В., Тутельян В.А. Микоток-сины в кормах. // Гигиена и санитария. 1983. - № 2. - С. 27-28.

2. Нуралиев Е.Р., Кочиш И.И Микотоксикозы в птицеводстве // Научно - производственный журнал птицеводство. — 2014. - №4.-С. 25-28.

3. Левицкая А.Б., Авреньева Л.И., Тутельян В.А. Микотоксины в кормах: Вопр. питан. М.; -1985. - № 3. - С 8-10.

4. Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Титова В.Ю. и др. Микотоксикологический анализ проб кормов // Диагностика, профилактика и терапия незаразных болезней животных. Казань, 1996. - С. 47-49.

5. Croubels S. Влияние микотоксин на организм птиц // Междунарлная ассоциация ветеринарных специалистов по болезням птиц(WVPA).-2013.№3.-с. 75-84.