Биологические науки/ 3. Молекулярная биология

*- Адыгейский государственный университет (АГУ), г. Майкоп, Россия.

** - Медицинский институт. Майкопский государственный технологический университет (МГТУ), г. Майкоп, Россия.

*** - Адыгейская республиканская клиническая больница (АРКД), г. Майкоп, Россия.

*Муженя Д.В., *Тугуз А.Р., **Ожева Р.Ш., **Лысенков С.П.,

**Ашканова Т.М., *Анохина Е.Н.

Частота М235Т полиморфизма гена AGT в подростковых группах населения Республики Адыгея.

Ключевые слова: ангиотензиноген (AGT), Мet235Тhr полиморфизм гена AGT, этногенетические исследования, адыги,

В развитии мультифакторных сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), обуславливающих 49% всех смертей и 30% смертей лиц в возрасте моложе 65 лет, значительная роль отводится образу жизни и генетическим факторам, в частности полиморфизмам генов, ассоциированным с системными патологическими процессами сердечного континуума и специфичными для разных народов. Из известных 16 генов-кандидатов ССЗ, наиболее часто встречающихся в европейских популяциях, прогностическую значимость на индивидуальном уровне имеет Мet235Тhr полиморфизм гена ангиотензиногена (AGT). Частота и ассоциация М235Т аллели AGT с риском развития и прогнозом исхода ССЗ, согласно этногеографическим исследованиям, в популяциях населения различается [1,2]. В Республике Адыгее (РА), этнически разнообразном регионе юга России с высокой заболеваемостью сердечно-сосудистой патологией, частота 235Thr полиморфизма практически не исследована.

Цель работы – исследование частоты и ассоциированности М235Т полиморфизмов гена AGT с риском развития ССЗ в этнических группах населения Республики Адыгея; формирование регионарной базы данных для мониторинга состояния здоровья и выявления причинно-следственных связей в развитии болезней сердечного континуума.

Контингент обследованных лиц: 115 здоровых доноров (в том числе 50 юношей и 65 девушек), подобранных эмпирически из четырех этнических групп, проживающих в РА (табл.1): адыгов (n=60), русских (n=32), армян (n=15), чеченцев (n=8) в возрасте от 14 до 29 лет (средний возраст 17,4±2,25), без клинических проявлений ССЗ (по данным опроса, осмотра кардиолога, регистрации ЭКГ и т.д.).

Таблица 1.

Распределение обследованных подростков, юношей и девушек

по этническим группам

	Этнические группы обследованных подростков
	Адыги (n)	русские	армяне	чеченцы	Всего	%
Кол-во (n)/ %	60/52,2	32/27,8	15/13	8/7	115
Юноши (n)	28	10	7	5	50	43,5
Девушки (n)	32	22	8	3	65	56,5

Материалы и методы. ДНК выделена из цельной крови, (стабилизированной ЭДТА), реагентом «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех») с последующей амплификацией на программируемом термостате Mj Mini («Био - Рад») и использованием комплекта реагентов «SNP-экспресс» (НПФ «Литех»). Результаты электрофоретического разделения продуктов амплификации визуализированы при УФ-облучении (длине волны 310 нм) в трансиллюминаторе (Gel Doc XR, «Био-Рад»).

Результаты исследований.

Наличие мутантной или нормальной аллели по 235 позиции гена AGT, в соответствии с SNP методом, определены на основании интенсивности и сочетания полос ампликонов в «НОРМЕ» и «ПАТОЛОГИИ», трактуемые как патологическая гомозиготная мутация (Pgom – Thr235Thr или ТТ), гетеророзиготная мутация (Gt – Met235Thr, МТ) и нормальная гомозигота (Ngom – Met235Met, ММ).

Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена AGT 235 в обследованной группе представлен в таблице 2 и на рисунке 1.

Таблица 2

Частота генотипов AGT 235 в обследованных группах

Обследованные группы	Частоты генотипов
	Мet235Мet–ММ нормальный генотип	Мet235Тhr – МТ гетерозиготный генотип	Тhr235Тhr – ТТ патологический гомозиготный
Все ( n =115)	0,310	0,400	0,210
адыги ( n =60)	0,367	0,35	0,20
русские ( n =32)	0,25	0,37,5	0,28,6
Армяне ( n =15)	0,40	0,40	0,20
Чеченцы ( n =8)	-	0,87,5	-

В общей выборке обследованных подростков и молодых людей обоего пола частоты нормального (Мet235Мet - ММ) генотипа составляют 0,31, гетерозиготного (Мet235Тhr - МТ) - 0,40 и патологического гомозиготного (Тhr235Тhr - ТТ) генотипа - 0,21. Анализ распределения генотипов AGT в трех этнических группах адыгов, русских и армян не выявил достоверных различий (табл. 1). Частоты гетерозиготных (МТ) и гомозиготных патологических (ТТ) генотипов составляет соответственно у: адыгов 0,350 и 0,200; русских 0,375 и 0,285, армян 0,400 и 0,200. В группе чеченцев Met235Thr полиморфизм гена AGT выявлен преимущественно в гетерозиготном состоянии. Несмотря на то, что частота М235Т генотипа значительно выше, чем в остальных этнических группах (0,875), тем не менее частота 235Т мутантного аллеля AGT235 при этом достоверно не отличается от других популяций (0,438). Нормальный гомозиготный (М235М) генотип AGT у чеченцев не определен.

Рис 1. Частоты Мet235 –М235 (нормального) и 235Тhr – 235Т (мутантного) аллелей в этнических группах адыгов, русских, армян и чеченцев

Частоты М235 (нормального) и 235Т (мутантного) аллелей AGT в общей группе обследованных доноров составляют соответственно 0,514 и 0,410, что свидетельствует о высокой распространенности 235Т полиморфизма гена ангиотензиногена у юношей и девушек, проживающих на территории Республики Адыгея, и согласуется с аналогичными данными, полученными при проведении исследований в европеоидных популяциях [1, 2, 4,6]. Достоверных различий в частотах 235Т (мутантного) аллеля AGT в зависимости от этнической принадлежности обследованных не выявлено, однако в группе русских, проживающих в Республике Адыгея, отмечена более высокая частота этого полиморфизма (рис 1).

Сравнительный анализ данных, полученных в наших исследованиях и других авторов [5,6] по выявлению частоты 235Т в этнических группах русских, проживающих в разных территориальных регионах Республики Адыгея, Ростовской области, Европейской части России представлены на рисунке 2.

Рис.2 Частота аллелей AGT 235 в этнических группах адыгов,

русских из Республики Адыгея, Ростовской области, Европейской части России.

Частоты 235Т AGT в этнических группах русских их Адыгеи и европейской части России достоверно не различаются. По данным Нгуен Т.Ч. и Шкурат Т.П. (2010г.) у русских, проживающих в сопредельной с Краснодарским краем и Республикой Адыгеи Ростовской области, частота 235Т аллели составляет всего 0,179, что значительно меньше, чем в популяции русских из Адыгеи [6].

Высокая частота Met235Thr полиморфизма AGT в подростковых контингентах населения Республики Адыгея может обуславливать развитие ССЗ, так как наличие одного или двух Т аллелей AGT 235 приводит к существенному повышению содержания ангиотензина II (АТ II), чем многие авторы объясняют ассоциацию этого полиморфизма с артериальной гипертензией.

В европейской популяции М235Т (С ->Т) полиморфизм AGT делает прогноз течения и лечения гипертонии и ее осложнений (инфаркт миокарда) менее благоприятным. Наличие М235Т варианта AGT коррелирует с разными формами гипертонии, преимущественно у европейцев и японцев. В то же время показано, что мутация М235Т является независимым фактором, не связанным с риском развития гипертонии, ишемической болезни сердца и ССЗ. [1; 2; 3; 4].

Данные по распространенности ассоциированного с развитием ССЗ М235Т (С ->Т) полиморфизма AGT у здоровых представителей этнически разнообразного населения Республики Адыгея будут использованы для формирования региональной базы данных, долгосрочного мониторинга состояния здоровья включенных в исследование лиц, выявлению прогностической значимости М235Т полиморфизма AGT в развитии болезней сердечного континуума и причинно-следственных связей ССЗ у жителей Республики Адыгея.

1. Schmidt, S. Association of M235T variant of the angiotensinogen gene with familial hypertension of early onset. / S. Schmidt [et al.] // Nephrol Dial Transplant. – 1995. -№7. – P.1145-1148.

2. Sethi, A.A. Angiotensinogen single nucleotide polymorphisms, elevated blood pressure, and risk of cardiovascular disease. / A.A. Sethi [et al.] // Hypertension. – 2003. - № 6. – P. 102-111.

3. Winkelmann, B.R. Angiotensinogen M235T polymorphism is associated with plasma angiotensinogen and cardiovascular disease. / B.R. Winkelmann [et al.] // Am Heart J. – 1999. – Pt. 1, №4. – P. 698-705.

4. Yamakawa-Kobayashi, K. Absence of association of angiotensinogen gene T235 allele with increased risk of coronary heart disease in Japanese. / K. Yamakawa-Kobayashi [et al.] // Lancet/ - 1995. - № 346. - P. 512- 515.

5. Jeunemaitre X., Soubrier F., Kotelevtsev Y., Lifton R.P., Williams CS., Charru A., Hunt S. C, Hopkins P.N., Williams R. R., Lalouel J.-M., Corvol P. //Cell. 1992. V. 71.P. 7-20

6. Нгуен Тхи Чанг. Исследование ассоциации Т174М И M235T гена ангиотензиногена с ишемической болезнью сердца в Ростовской популяции /Нгуен Тхи Чанг, Т. П. Шкурат.// Эпидемиология – 2010 - т. 11