Медицина

Голубенко И. А., Логвин И.И., Маляр С. Л.

КЗ «ДМПБ№1»ДОР, г. Днепропетровск

Опыт использования гелевой технологии при подтверждении

резус-фактора у беременных женщин

Гелевая технология в микропробирках (ГТМ) была предложена Y. Lapierre в 1989 г. Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле "сефадекс", помещенном в микропробирки. Обычно система представляет собой пластиковые карты, содержащие микропробирки, заполненные гелем (патент DiaMed AG, Швейцария). Иммуногематологические исследования, основанные на реакции гемагглютинации, обычно проводятся в жидкофазных системах.

Одним из наиболее важных условий получения корректных данных реакции агглютинации является оценка результата. Слабая реакция может быть неверно интерпретирована, особенно неопытным персоналом. Ложные слабые или отрицательные результаты непрямого антиглобулинового теста могут иметь место за счет нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки вследствие недостаточно эффективного отмывания эритроцитов. Методика гелевой технологии предусматривает агглютинацию в геле и была разработана с целью стандартизации реакций разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время как агглютинированные задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат). Центрифугирование в геле может быть конечной фазой любых серологических исследований, основанных на реакции гемагглютинации.

Методика: взвесь исследуемых эритроцитов или стандартные эритроциты и исследуемая сыворотка (плазма) помещаются в соответствующие микропробирки, где происходит реакция агглютинации, затем диагностические карточки центрифугируются для учета результатов реакции. При этом неагглютинированные эритроциты свободно проходят между частицами геля и образуют осадок на дне микропробирки, в то время как агглютинированные располагаются на поверхности или в толще геля. Расположение агглютинатов в геле определяется силой агглютинации и положительный результат может быть оценен от "+" до "+ + + +". Размер частиц геля позволяет достичь наилучших результатов чувствительности и специфичности, а его прозрачность делает считывание результатов более надежным и позволяет интерпретировать самые сложные диагностические случаи.

В КЗ «ДМПБ№1»ДОР гелевая технология успешно используется с 2005 года, что дало возможность проводить прямую пробу Кумбса и своевременно прогнозировать тактику ведения родов и при необходимости оказывать помощь новорожденным от резус отрицательных матерей, непрямую пробу Кумбса для раннего выявления резус-антител, а также подтверждения группы крови и резус-фактора у беременных женщин при постановке их на учет. Опыт работы показал, что около 18% женщин, чей резус-фактор определен цоликлонами (моноклональными антителали) как отрицательный фактически имеют слабый антиген D, что, в свою очередь, должно предусматривать другой подход к ведению беременности. Во-первых, это исключает необходимость контролировать возникновение резус-антител каждые 2 недели, во-вторых-исключает необходимость введения антирезусного иммуноглобулина в качестве профилактики. Это не только моральные, но и материальные затраты. Так, в 2011 году, из 28 подтверждений резус-фактора у резус-отрицательных женщин 4 из них оказались со слабым антигеном D, что составило 14,2%, в 2012-из 12-3(25%), в2013-из 59-11(18,6%), в 2014-из 40-6(15%), в 2015-из 25-5(20%). Таким образом, опыт работы в нашем медицинском учереждении показывает и доказывает целесообразность и необходимость подтверждения резус-фактора беременных женщин гелевой технологией при постановке их на учет.

Основные преимущества гелевой технологии - отсутствие этапов отмывания эритроцитов; сокращение времени на проведение полного иммуногематологического исследования в 5 раз; - возможность использования небольших количеств крови; - исследование крови, заготовленной на консервантах и стабилизаторах без искажения результатов; - стабильность конечной картины результатов; - объективный учет результатов и их стандартизация; - высокая чувствительность и специфичность тестов; - длительные сроки хранения карт и реагентов.

В ходе многократных испытаний показано, что гелевая система является более чувствительной, чем традиционные серологические методы исследования. Устранение этапа отмывания при проведении антиглобулинового теста и стабильность всех реагентов обеспечивают высокий уровень достоверности результатов и увеличивают возможность стандартизации и контроля лабораторных исследований. Особое значение методика приобретает при определении слабых антител и антигенов, которые могут стать сильнее при вторичной стимуляции (например, в течение беременности). Гелевый тест позволяет автоматизировать оценку результатов реакции гемагглютинации. Результаты теста могут быть фотокопированы для сохранения их в архиве или служить учебным пособием в сложно-диагностируемых случаях. Особо актуально использование гелевых технологий в педиатрии, когда получение достаточных количеств материала для других методик затруднено. Использование гелевой системы позволяет снизить риск заражения персонала даже при работе с потенциально инфицированными образцами. Пластиковые карты сделаны из биоразлагаемого материала и не загрязняют окружающую среду.