Ю.В.Шикова¹, В.А.Лиходед¹, Е.В.Симонян², А.В.Епифанова¹

¹Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа

²Южно-Уральский государственный медицинский университет, г. Челябинск

Стандартизация вагинальных суппозиториев, содержащих природные биологически активные компоненты, по сумме флавоноидов

В условиях развития современного российского фармацевтического рынка вагинальных препаратов, где лидируют препараты зарубежного производства, актуальным является разработка отечественных лекарственных средств с использованием доступной и не менее эффективной сырьевой базы [1]. Препараты, влияющие на скорость свободно-радикального окисления природного происхождения – продукты пчеловодства, все шире начинают использоваться для профилактики и лечения многих заболеваний, а именно в кардиологии, урологии, гинекологии, дерматологии и других областях медицины [2].

Актуально использовать биологически активный антиоксидант продукт пчеловодства - экстракт прополиса в комплексном лечении воспалительных заболеваний женской половой сферы, так как их противовоспалительный эффект заключается во влиянии на транспорт АТФ-азы, фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов, ингибировании гиалуронидазы, фосфолипазы А₂, циклооксигеназы, гипоксигеназы, гистидиндекарбоксигеназы и других, в результате чего замедляется и уменьшается выделение медиаторов воспаления. Использование этих действующих веществ оказалось весьма эффективным в лечении ряда заболеваний, а имеющиеся экспериментальные данные свидетельствуют о широких перспективах расширения показаний для его применения. В связи с этим значительный интерес представляют исследования по разработке суппозиториев, содержащих экстракт прополиса, для комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологической практике.

Внедрение в отечественную медицинскую практику новых лекарств, расширение ассортимента препаратов, требует совершенствования системы стандартизации и контроля их качества. Поэтому ключевым этапом разработки вагинальных суппозиториев является их стандартизация с использованием современных методов анализа.

Стандартизацию суппозиториев с экстрактом прополиса проводили по сумме активных компонентов прополиса – флавоноидов в пересчете на рутин и коричную кислоту. Для качественного анализа флавоноидов использовали метод хроматографии в тонком слое сорбента, Определение проводили на пластинках Сорбфил, снабженных УФ — детектором. В качестве стандартного образца использовали 0,1% раствор РСО рутина и коричной кислоты, в качестве подвижной фазы – систему растворителей: спирт бутиловый – кислота ледяная уксусная – вода очищенная (4:1:1). В качестве исследуемого раствора использовали вытяжку из суппозиториев, полученной исходя из следующей методики: около 1 г суппозиторной массы взбалтывали в течение 10 минут с 10 мл спирта этилового 95%, фильтровали, отбрасывая первые порции фильтрата. На линию старта хроматографической пластинки, наносили микрошприцем 10 мкл полученного раствора. В качестве стандарта использовали 0,01% растворы рутина и кислоты коричной (10 мкл).

При просматривании хроматограммы в УФ-свете обнаруживаются три основные зоны: первая - с темной флуоресценцией на уровне зоны рутина с Rf 0,65, вторая - с темной флуоресценцией с Rf 0,48 (не идентифицирована), третья – с темно-фиолетовой флуоресценцией на уровне зоны коричной кислоты с Rf 0,89.

Для количественной оценки флавоноидов использовали дифференциальную спектрофотометрию на основе реакции с алюминия хлоридом. Дифференциальный спектр поглощения извлечения из суппозиторной массы совпадал по положению максимума РСО рутина (при длине волны 410 ± 2 нм), что позволило проводить количественное содержание флавоноидов в экстракте в пересчете на рутин.

Определение проводили по методике: суппозиторий массой около 3,0г помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, расплавляли на водной бане, прибавляли около 15 мл спирта и взбалтывали в течение 10 минут. Доводили спиртом этиловым до метки, перемешивали и фильтровали. 5 мл фильтрата переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 5 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида, доводили спиртом этиловым до метки, перемешивали и оставляли на 25 минут.

Приготовление раствора РСО рутина. Около 0,01 г (точная навеска) рутина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в спирте этиловом, доводили до метки, перемешивали. 5 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, а далее поступали как указано выше.

Количественное определение проводили спектрофотометрически при длине волны 410 ± 2 нм. Результаты количественного определения представлены в таблице 1.

Таблица 1. Результаты количественного определения флавоноидов в пересчете на рутин в суппозиториях

№ п/п	Найдено флавоноидов, в пересчете на рутин, мг	xi - xср	(xi – xср)^2	Метрологические характеристики
1	4,24	0,04	0,0016	SD= 2,236*10^-2 x±∆x = 4,19± 2,34*10^-2 RSD= 0,57%
2	4,17	-0,03	0,0009
3	4,22	0,02	0,0004
4	4,18	-0,02	0,0004
5	4,21	0,01	0,0001
6	4,19	-0,01	0,0001
х ср	4,2		0,0029

Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин в растворах, полученных путем добавления определенного количества стандарта к исследуемому раствору. Критерий приемлемости - средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, и его средняя величина должна находиться в пределах 100±5 %. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2. Определение правильности методики

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, мг	Добавлено РСО рутина, мг	Расчетное содержание, мг	Найденное содержание, мг	Открываемость, R%
4,2	2,5	6,7	6,658	99,37
4,2	2,5	6,7	6,661	99,43
4,2	2,5	6,7	6,664	99,46
4,2	5	9,2	9,143	99,38
4,2	5	9,2	9,172	99,70
4,2	5	9,2	9,168	99,65
4,2	7,5	11,7	11,564	98,83
4,2	7,5	11,7	11,668	99,73
4,2	7,5	11,7	11,681	99,83
4,2				99,48

В результате исследований по изысканию методов стандартизации суппозиториев, содержащих экстракт прополиса, определена методика качественного анализа лекарственной формы с помощью метода тонкослойной хроматографии по сумме флавоноидов по сравнению с РСО рутина и коричной кислоты. Также выбрана достоверная методика определения количественного анализа активного компонента лекарственной формы - прополиса в пересчете на рутин.

Литература

1. Шикова Ю.В., Ивакина С.Н., Епифанова А.В., Лиходед В.А., Петрова В.В., Шиков Н.А. Анализ современного состояния рынка лекарственных препаратов, применяемых в гинекологии // Сборник научных трудов II международного конгресса «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» - Традиционная медицина – 2012. – с. 14-15.

2. Шикова Ю.В., Лиходед В.А., Фархутдинов Р.Р., Симонян Е.В., Баймурзина Ю.Л.,Епифанова А.В., Нэвес да Силва А.Г., Петрова В.В., Елова Е.В. Влияние продуктов пчеловодства на процесс образования активных форм кислорода. Возможность их применения в составе лекарственных форм // Международная научная конференция "Повышение качества жизни пациентов - тренд современной медицины" 21-23 ноября - 2013г. – г. Стерлитамак // Медицинский вестник Башкортостана – 2013. – т. 8. - № 6. – с. 151-153