К.т.н. Киприянова Е.Н.

Георгиевский технологический институт (филиал) СевКавГТУ,

К.х.н. Редчук А.С.

Днепропетровск государственный аграрный университет

Хроматографическое определение витаминов В₂, В₅ в премиксах

Витаминные добавки являются неотъемлемой частью полноценного корма для сельскохозяйственных животных. Являясь биологически активными веществами, витамины, как в случае их недостатка, так и избытка, могут вызывать нарушения различных функций организма. Эффективный аналитический контроль содержания витаминов, в том числе водорастворимых витаминов группы В, имеет важное значение. С этой целью нами выполнены исследования по созданию методик хроматографического анализа витаминов группы В в премиксах. В данной работе представлена методика определения витаминов В₂ и В₅.

Витамин В₂ (рибофлавин) кормовой – это биомасса гриба Эремоцетум ашбиу, высушенная вместе с питательной средой. В 1 грамме продукта должно содержаться не более 8% влаги, не менее 20% сырого протеина и 1% жира, а также не менее 10 мг рибофлавина. В премиксы рибофлавин вводят в виде кормового микрогранулированного препарата – Гранувит В₂ с размером частиц 0,5 мм. Нами изучены различные образцы премиксов, подобраны условия извлечения и хроматографирования витамина В₂.

Витамин В₂ вводится в большинство выпускаемых премиксов. Его содержание в наполнителе (зерно, отруби и т.д.) меняется от 8,4 мг/кг до 36,9 мг/кг. Общее содержание витамина В₂ в премиксах изменяется в диапазоне от 67,8 до 1208 мг/кг, а введенное от 50 до 1200 мг/кг. Разработанная методика позволяет проводить определение общего содержания витамина В₂ в премикса как содержащих кормовой концентрат лизина (ККЛ), так и без него.

Сухой кормовой концентрат лизина – это амфорный порошок светло-коричнево цвета, горько-соленого вкуса со специфическим запахом. Препарат содержит 90-95% сухих веществ, в том числе не менее 10% лизина монохлоргидрата. Он очень гигроскопичен, так как в его состав кроме лизина входит бактериальная масса и остатки питательной среды. Содержание ККЛ в премиксах колеблется в пределах 15-200 мг/кг. Исследованные нами премиксы изготавливались на основе пшеничных отрубей в лабораторных условиях, в соответствии с утвержденными рецептурами. Изучались также заводские образцы премиксов. Учитывая, что в отрубях и ККЛ присутствует нативный витамин В₅, проводилось предварительное определение содержания витамина в исходных компонентах. Содержание витамина В₅ в отрубях и ККЛ составило соответственно 150 и 250 мг/кг.

Разработанная нами и запатентованная ранее методика определения витамина В₅ в биологическом материале (патент № 2082170, 20.06.97 г.) предназначалось для анализа премиксов без ККЛ. В настоящей работе данная методика была опробирована на премиксах с ККЛ. Методика включает кислотный гидролиз премикса при температуре 121 ⁰С. Гидролиз проводился в автоклаве 0,5 н раствором серной кислоты в течение 30 мин. Навеска премикса – 2 г. После автоклавирования суспензию подвергали нейтрализации, центрифугированию и осветленный гидролизат хроматографировали.

Для количественного определения витаминов В₂ и В₅ строились калибровочные графики «высота пика – концентрация витамина». Для анализа может быть использован жидкостный хроматограф любой модели с УФ – детектором. Определение витаминов В₂ и В₅ ведется в отдельных пробах, которые отбираются из гидролизата. Условия хроматографирования следующее: витамин В₂ – колонка с неподвижной фазой Силасорб SPHC₁₈ ; подвижная фаза – смесь уксусной кислоты с триметиламином и водой в соотношении 3:2:95. К этой смеси добавляется 0,1 г/л гексилсульфоната натрия. Полученный раствор смешивают с ацетонитрилом в соотношении 92:8. Объем пробы 6 мкл. Детектирование ведут на длине волны 258 нм.

Витамин В₅ - колонка также, подвижная фаза – смесь уксусной кислоты, 25% - ого раствора триметиламина и воды в соотношении 3:2:95. Объем пробы для хроматографирования – 6 мкл. Длина волны 260 нм.

Использование данной методики позволяет определять суммарное содержание витамина В₅, т.е. введенные и содержащиеся в накопителе (отруби + ККЛ). Наблюдается четкое отделение пиков витаминов В₂ и В₅ от многочисленных пиков неидентифицируемых примесей, экстрагируемых из ККЛ. Методика характеризуется высокой селективностью и эффективностью. Погрешность методики не превышает 15%. Минимальное определяемое количество витаминов составляет 10 мкг/мл.